원자 힘 현미경을 사용 하 여 단일 단백질 분자 힘 분광학

요약

우리는 상세한 절차 및 전략 기계적 특성 및 기계적 전개 경로 원자 힘 현미경을 사용 하 여 단일 단백질 분자의 측정을 설명 합니다. 우리는 또한 선택과 좋은 단일 단백질 분자 기록의 정당성에 대 한 참조로 대표적인 결과 보여줍니다.

초록

그들의 네이티브 3D 구조에 그들의 아미노산 시퀀스 로부터 단백질의 접히는 과정의 결정은 생물학에 있는 중요 한 문제 이다. 원자 힘 현미경 (AFM) 스트레칭과 휴식 단일 단백질 분자의 특정 전개 및 refolding 특성의 직접 증거를 제공 함으로써이 문제를 해결할 수 있습니다. AFM 기반 단일-분자 힘-분광학 AFM-SMF () 일관 되 게 에너지 conformations 전통적인 대량 (생화학) 측정에 가능 하지 않은 단백질을 측정 하는 수단을 제공 합니다. 수많은 논문 AFM SMF의 원리를 보여주는에 게시 된, 하지만 그것은 철저 하 게 완전 한 프로토콜의 부족 때문에 SMF 실험을 실시 쉽지 않다. 이 연구에서 우리는 AFM의 원리를 간단히 설명 하 고 광범위 하 게 세부 프로토콜, 절차, 및 데이터 분석 SMF 실험에서 좋은 결과 달성 하는 지침. 단일 단백질 기계 펼쳐진 측정의 대표적인 SMF 결과 설명 하 고 우리가 제공 하는 문제가 발생 하는 일반적으로 몇 가지 문제 해결 전략.

서문

AFM에 의해 단일 분자 힘 분광학 (SMF)에 발전 기계 조작 및 단일 단백질 분자의 정확한 특성화를 활성화 했습니다. 이 특성화 단백질 기계^1,2,³, 단백질-리간드 상호작용⁴, 단백질 단백질 상호 작용⁵, 접히는 단백질에 대 한 새로운 통찰력을 생산 하고있다 및 단백질 기반 설계 재료^6,,78. SMF는 단백질을 공부 하는 데 특히 유용 수 있습니다 제공 하는 지속적으로 증가 윤곽선 길이를 상승 그들의 강성에 따라 점차적으로 확장 하는 단백질 분자 내의 화학 및 물리적 채권 AFM에 의해 기지개로 전개. 단백질 분자의이 잡아당기고 수 파열 이벤트의 결과로 힘 확장 곡선에서 갑작스러운 변환을 (또는 강제로 피크). 강제로 피크 기계적 전개 과정에서 단백질의 펼쳐 힘 및 구조 변화에 직접 정보를 제공합니다. AFM을 사용 하 여 첫 번째 연구 중 하나 titin¹ 을 측정 하 고 전개 하 고 집중된 화학 물질 또는 극단적인 온도 같은 부자연 스러운 denaturants의 사용 없이 생리 적인 조건 하에서 refolding 단백질의 새로운 측면을 발견.

여기 우리가 고려만 AFM SMF 실험 다양 한 악기에 수행 됩니다. AFM은 4 개의 주요 요소로 구성: 프로브, 검출기, 샘플 홀더 및 압 전 스캐너. 프로브는 캔틸레버의 중세 끝에 날카로운 끝 이다. 교정, 후 연결 된 분자의 스트레칭 하는 동안 캔틸레버의 휨 측정 된다 Hooke의 법률을 사용 하 여 힘을 정확 하 게 결정 하는 캔틸레버의 뒤쪽에서 반영 되는 레이저 빔을 사용 하 여. 레이저 빔 다이오드 센터에서의 변위에 비례하여 전압을 생성 하는 사분면 포토 다이오드 검출기에 반사 된 레이저 빔 프로젝트. 액체에 단백질 샘플 기판 하위 나노미터 정밀도로 제어할 수 있는 3 차원 압 전 단계에 거치 된다. 컴퓨터 포토 다이오드 감지기에서 전압을 읽는다 고 컴퓨터 제어 전압 공급을 통해 3D 단계를 제어 합니다. 이러한 압 전 액추에이터 단계는 일반적으로 장착 용량 성 또는 스트레인 게이지 위치 센서 정확 하 게 측정 압 전 변위 및 피드 백 제어 시스템을 통해 정확한 히스테리시스. 압 전 컨트롤러에서 센서 신호 출력은 공장에서 캘리브레이션 된 압 전 전압 상수를 사용 하 여 거리 변환 됩니다. 당기는 실험에서 예 힘 확장 곡선 그림 2에 표시 됩니다.

AFM SMF 실험의 두 가지 유형이 있다: 일정 한 속도 지속적인 힘 측정을 당기. 지속적인 힘 SMF 측정 Oberhauser 외 에 설명 되어 있습니다. ⁹, 여기 우리가 일정 속도 측정에 집중 하는 동안. 전형적인 AFM 상수 속도 당기 실험 기판 캔틸레버 끝에 상대적으로 부드럽게 이동 하는 압 전 전압을 제공 하 여 수행 됩니다. 전형적인 실험 표면에 대해 처음 누르면 팁이 있다. 당기 측정 접촉에서가지고 팁에서 기판으로 이동 하 여 시작 됩니다. 단백질 처음 팁의 접촉으로 온다, 당겨 질 것 이다 하 고 변위에 대 한 힘의 펼쳐진 추적 측정 됩니다. 기판은 다음 팁 접촉 돌아온 것 고 편안한 추적 어디 단백질 접기 결정 될 수 있다 힘 변위에서 측정 된다.

프로토콜

1. 단백질 준비

1. DNA 복제입니다.
   1. 관심, NI₁₀C¹⁰, 예를 들어 DNA 시퀀스의 DNA 순서를 합성 하거나 통해 PCR 표준 분자 생물학 기법¹¹를 사용 하 여 호스트 유기 체에서 분리 합니다. 합성 또는 5'-끝 (Addgene #74888)¹²에 플라스 미드 pEMI91 모듈에 해당 하는 PCR 뇌관의에 사이트를 배치 하 여 금지 사이트와 관심사의 유전자를 측면.
   2. 별도로 소화 플라스 미드 pEMI91¹² 와 제한 사이트의 쌍으로 관심사의 DNA 순서는 관심사의 순서는 I91 ( 그림 1참조)을 반복 하는 협동에 의해 형벌 것입니다. 금지 사이트에 대 한 표준 프로토콜을 따릅니다.
   3. 젤 전기 이동 법을 사용 하 여 소화 제품을 정화 하 고 T4 DNA 리가, 다음과 같은 표준 프로토콜을 사용 하 여 제품을 선. 결 찰, 후 플라스 미드 플라스 미드 정화에 대 한 대장균 세포로 변환 하 고 표준 프로토콜을 사용 하 여 플라스 미드 정화. 시퀀스는 시퀀스 성공적으로 변형 되었다 확인 T7 뇌관 또는 내부 pEMI91 뇌관을 사용 하 여.
2. 변환입니다.
   1. C41 같은 단백질 식 세포 제거 (DE3) pLysS 셀-80 ° C 냉동 고 얼음에 완전히 해 동에서.
   2. 셀에 플라스 미드 DNA의 1 µ L을 추가 하 고 볶음 짧게; 공기 방울을 소개 하 고 온난 한 셀 아래로 pipetting 권장 하지 않습니다.
   3. 세포와 30 분 동안 얼음에 플라스 미드를 포함 하는 문화 관을 품 어.
   4. 열 충격 45 42 ° C에서 물 욕조에 셀 s.
   5. 2 분 동안 얼음에 튜브를 반환 합니다.
   6. 셀에 파운드 국물의 950 µ L를 배치 하 고 37 ° c.에 1 시간에 250 rpm에서 흔들
   7. 약 200 µ L 파운드 접시 포함 하는 100 µ g/mL 암 피 실린에 변환의 장소. PEMI91 다른 플라스 미드를 사용 하는 경우 다음 그 플라스 미드에 대 한 적절 한 항생제를 사용 합니다. 37 ° c.에 인큐베이터에 접시를 하룻밤 장소 다음 날, 인큐베이터에서 제거 접시 parafilm, 포장 하 고 저장소 냉장 1 달까지.
3. 단백질 식입니다.
   1. 접시에 단일 세균성 식민지로 살 균 피 펫 팁을 감동 하 고 아래로 파운드에 pipetting으로 하룻밤 성장 위한 37 ° C에서 50 mL 튜브에서 100 µ g/mL 암 피 실린과 파운드 국물 매체의 15 mL를 접종.
   2. 100 µ g/mL 암 피 실린과 파운드 국물 매체의 1 리터에 15 mL 문화를 전송 하 고 37 ° C에서 4-12 h에 대 한 동요 (까지 명이₆₀₀ > 0.8).
   3. 10 mL 플라스 미드 준비에 대 한 문화를 수집 합니다.
   4. 0.2-1 m m 이소프로필-β-D-thiogalactopyranoside (IPTG)를 추가 하 고 하룻밤 표현 위한 실내 온도에 온도 낮춘 다.
   5. 4 개의 튜브로 분할 하 고 40 분 4000 × g 에서 centrifuging 여 다음날 세포를 수확 하 고 몇 시간 동안-80 ° C에서 펠 릿을 동결.
   6. 시퀀싱에 대 한 셀에서 해당 단백질¹² 의 삽입된 카세트 하 뇌관으로 추출 하는 플라스 미드를 보내고 삽입된 DNA의 충실도 확인 하십시오.
4. 단백질 정화입니다.
   1. 실 온에서 30 분 동안 냉동된 세포의 1 개의 관 동
   2. 해 동된 세포 세포의 용 해 버퍼 (38 mL 물, 글리세롤, 50 mM Tris HCl pH 7.6, 150 m m NaCl, 1 mM CaCl₂, 10 µ g/mL DNase, 1 밀리미터 PMSF, 1mm TCEP, 500 µ g/mL lysozyme의 2 개 mL)를 일시 중단 하 고 1 시간에 대 한 얼음에 흔들.
   3. 몇 시간 동안-80 ° C에서 lysed 세포를 고정 하 고 다시 실 온에서 해 동.
   4. 4 ° c.에 30 분 13100 × g 에서 lysate 아래로 회전
   5. 특정 태그 (예: Strep 태그 또는 그의 태그)에 대 한 중력 흐름 열 통해는 상쾌한을 실행 합니다.
   6. 버퍼 교환 Strep 태그 또는 그의 태그 사용 하기 전에 4 ° C에서 저장소에 대 한 적절 한 버퍼를 사용 하 여 원심 필터를 사용 하 여 수행 합니다.

2. 슬라이드 샘플 준비를 위한 준비

1. 피 라 솔루션을 사용 하 여 유리 슬라이드를 준비 합니다.
   1. 장소 10-30 조각 40 mL 유리 비 커에 유리 커버 전표 (7.5 m m의 반지름) 라운드.
      참고: 후드에이 단계와 다음 단계를 수행 합니다. 이 단계 동안 위험한 화학 물질 처리에 대 한 표준 절차를 따릅니다.
   2. 집중된 (18.4 M) 황산 30 mL를 추가 합니다.
   3. 30%의 과산화 수소의 10 mL를 추가 합니다.
   4. 95 ° c 10-30 분을 위한 혼합물이 열
   5. 신중 하 게는 별도 폐기물 컨테이너 (재사용 또는 폐기)으로 피 솔루션을 가만히 따르다.
   6. 슬라이드 피 솔루션을 제거 하는 이온된 수와 린스.
   7. 아세톤의 40 mL에 슬라이드를 일시 중단 합니다.
   8. 폐기물 용기에 아세톤을 가만히 따르다와 에탄올 40 mL에 슬라이드를 다시 일시.
   9. 깨끗 한 집게를 사용 하 여 신중 하 게 한 번에 한 슬라이드를 추출 하 고 건조 한 아르곤 또는 공기를 정화.
   10. 장소 깨끗 하 고 건조 슬라이드까지 골드 증발, 진공 또는 아르곤 장기 보관을 위해.
2. (선택 사항) 골드 코팅된 슬라이드를 준비 합니다.
   참고: 이 단계는 주요 대학에서 많은 클린 룸 시설에서 사용할 수 있는 진공 (전자 빔) 증발 기를 사용 하 여를 필요 합니다.
   1. 5 현미경 슬라이드 (25 x 75 mm 직사각형 모양)는 산울타리를 사용 하 여 반으로 잘라.
   2. 양면 접착 테이프는 10의 각각의 중간에 걸쳐 적용 반 현미경 슬라이드.
   3. 스티커 메모의 끈 적 한 면을 잘라 고 메모의 끈 적 한 면이 면 업 이중 면 테이프에 적용 합니다. 스티커 메모는 일반적으로 덜 접착제, 하지만 아직도 단단히 미래의 침입을 방지 하기 위해 슬라이드에 부착. 다음 그 절반 현미경 슬라이드 유리 슬라이드 소유자 지금 사용할 수 있습니다.
   4. 신중 하 게 4 개의 깨끗 한 유리 슬라이드 (섹션 2.1.10) 소유자의 끈 적 한 면의 각 모서리를 누릅니다.
   5. 전자 빔 증발 기를 유리 슬라이드를 이동 합니다. 70을 적용 하는 증발 기의 사양에 따라 크롬 및 300의 nm 금 표면에 nm.
   6. 아르곤 골드 코팅 슬라이드를 저장 합니다.

3. 샘플 준비

1. 슬라이드를 준비 합니다.
   1. 깨끗 한 철 디스크 (15 m m 직경)를 선택 하 고 그것에 연결할는 접착제 탭.
   2. 접착제 탭의 커버 조각 unattach
   3. (섹션 2.1.10)에서 깨끗 한 유리 또는 금 (2.2.7 섹션)에서 일부를 선택 하 고 단단히 철 디스크의 끈 적 한 면에 배치,이 샘플 슬라이드 됩니다.
2. 슬라이드에 예금 단백질입니다.
   1. 실험 (25mm Tris HCl, pH 7.6 150 mm NaCl)에 대 한 버퍼는 polyprotein dialyze 0.5 mL 원심 필터 같은 버퍼 교환 열을 사용 하 여. 13000 rpm에서 10 분 동안 열에 단백질 회전 다음 열을 반전 하 고 2 분 1000 rpm에 회전에 의해 새로운 버퍼에 단백질을 elute.
   2. 280에서 흡 광도 측정 하 여 대략적인 단백질 농도 결정 nm는 분 광 광도 계를 사용 하 여.
   3. 10-100 µ g/mL에서 100 µ L의 최종 볼륨을 단백질을 희석.
   4. 슬라이드의 중심에 단백질 해결책의 60 µ L를 적용 합니다. 하도록 하지 어떤 액체 유리와 철 슬라이드 사이의 간격으로 아래 입력이 실험 및 통제 샘플 움직임 동안 접착제의 붓기가 발생할 수 있습니다이 단계에서 주의 해야 합니다.
      참고: 골드 슬라이드는 소수 성, 그리고 구형 물방울 형태로 유리 슬라이드는 더 친수성 단백질 솔루션 확산 수 있습니다 하는 동안.
   5. 샘플 10-60 분 동안 실내 온도에 앉아 보자. 이 시간 동안, 원자 힘 현미경 설정을 시작 하려면 다음 단계를 진행 합니다.

4. 원자 힘 현미경 (AFM) 설치

참고: 다음은 AFM, 설정에 대 한 일반적인 설명 그리고 일부 특정 내용을 특정 계측 사용에 따라 다를 수 있습니다. 사용 계측 이며 부분적으로 집에서 만든 숄¹³에서 자세히 설명 합니다.

1. AFM 셀에 캔틸레버를 탑재 합니다.
   1. 응용 프로그램에 대 한 적절 한 속성을 가진 캔틸레버를 선택 합니다. 사용 cantilevers 스프링 상수와 낮은 전개 세력에 대 한 4-10 pN/nm (10 ~ 50 pN), 사용 cantilevers 스프링 상수와 높은 전개 세력에 대 한 15-100 pN/nm.
   2. 신중 하 게 끝에서 캔틸레버를 선택 하 고 셀을 잡고 프로브에 배치.
   3. 지주 셀 단단히 보유 캔틸레버 자리에 계속 하기 전에 다는 것을 확인 하십시오.
   4. 레이저의 정렬에 대 한 AFM 머리에 지주 셀을 놓습니다.
2. AFM 머리에서 레이저를 맞춥니다.
   1. 머리는 거꾸로 한 현미경에 놓고 머리에 레이저 전원 공급을 위한 AFM 머리에 배터리 팩을 연결 합니다.
   2. 레이저 빛은 TV 나 모니터에 구상 될 수 있다 그래야 현미경 검출기에 카메라를 연결 합니다.
   3. 레이저를 위치 하는 캔틸레버의 끝에 위치
3. 샘플으로 머리를 탑재 합니다.
   1. 각 셀을 잡고 프로브 포트의 버퍼의 10 µ L를 플러시.
   2. 배양 된 샘플 슬라이드를 incubated 솔루션에서 액체의 40 µ L을 가만히 따르다. 슬라이드에는 버퍼의 40 µ L를 추가 합니다. 장소는 압 전 위의 자석에 샘플 슬라이드.
   3. AFM 단계 높은 위치에 있는지 확인 합니다. AFM 캔틸레버 샘플 방울 위에 되도록 다음 스테이지로 AFM 머리를 놓습니다.
4. 센터는 광다이오드에 반사 된 레이저 빔입니다.
   1. 종이의 작은 조각을 잘라내어 AFM 포토 다이오드 앞에서 그것을 배치.
   2. AFM 레이저 레이저 자리는 종이에 집중 하 고 밝은 되도록 손잡이 사용 하 여 위치를 변경할.
   3. 레이저 모든 사분면 (A + B + C + D)에 총 신호를 최대화 하기 위해 포토 다이오드를 안타와 상위 2 사이의 차이 신호 발생 및 0 (A + B-C-d)를 두 개의 사분면 아래쪽 AFM 헤드 미러를 조정 한다.

5. 원자 힘 현미경 교정

1. 파워 스펙트럼을 측정 합니다.
   1. AFM에 연결 된 필터에 전체 대역폭을 AFM 머리 신호에 대 한 필터 설정을 설정 합니다.
   2. AFM 자체에 피는 떨어져 잡음 신호에 추가 됩니다 확인 하십시오.
   3. AFM 소프트웨어¹⁴ 를 사용 하 여 1, 024 데이터 포인트를 계산에서 파워 스펙트럼의 512 계산의 평균을 측정.
   4. AFM 소프트웨어¹⁵ 를 사용 하 여 해당 주 모드의 캔틸레버에 대 한 진동 하는 첫 번째 피크에 걸쳐 전력 스펙트럼 밀도 통합.
2. 포토 다이오드 감도 계산 합니다.
   1. AFM 자체에서 압 전 컨트롤러 설정 하 고 500 Hz (로우-패스 필터) 필터 설정을 변경.
   2. 0은 AFM 소프트웨어에 주위 변동 한다 차이 신호를 모니터링 합니다. 신속 하 게 micropositioners를 사용 하 여 몇 백 마이크로미터 아래로 AFM 머리를 이동 합니다. 머리를 아래로 이동을 반복 하 고 일관 된 점프에 대 한 차이 신호 모니터링. 표면은 매우 때 신호 점프 근처 시작 높이 증가 합니다.
   3. 최대한 빨리 편향 신호 포화 표면, 접촉 시 표면에서 머리를 약간 이동 합니다.
   4. AFM 소프트웨어에 입력된 컨트롤을 사용 하 여 표면, 100-5000 nm를 위아래로 이동 하 여 찾을 수 전 전압을 조절. 없으면 표면 여전히 도달에, 수동으로 머리와 샘플 사이의 거리를 줄이기 위해 계속.
   5. AFM 소프트웨어에서 약 500의 스캔 크기와 당기 실험 실시 nm는 약 100 접촉 들어온다 팁 피 여행의 nm.
   6. AFM 팁 기판 표면 접촉 유지는 포토 다이오드 신호 대 압 전 변위 곡선의 선형 지역의 경사를 측정 합니다.
   7. 감도 기울기와 통합된 파워 스펙트럼을 사용 하 여 스프링 상수를 계산 ().

6. 데이터 수집

1. 준비입니다.
   1. AFM에 연결 된 필터, 샘플링 주파수가 두 번 이상 대역폭 (Nyquist 조건) 저역 컷오프에 대 한 상한이 줄 것 이다 필터 설정을 설정 합니다.
2. 측량입니다.
   1. 스캔 크기 펼쳐진 polyprotein (아미노산 × 0.365 수) 플러스 눌러 기판에 대 한 수 있도록 약 40%의 총 이론적인 크기를 설정. 예를 들어 약 300의 이론적인 펼친된 길이 있을 것 이다 당기는 9 x I91 구문 nm, 스캔 크기 약 420 이어야 한다 그래서 nm.
   2. AFM 소프트웨어의 위치는 캔틸레버 표면에서 스캔 크기의 80%를 (340에 대 한이 경우에, 표면에서 nm).
   3. AFM 소프트웨어에서 설정 스캔 속도 300 nm/s 처음.
      참고: 이 속도 느린, 또는 응용 프로그램에 따라 빠르게 수정할 수 있습니다.
   4. 당기는 실험을 수행 하 고는 압 전 및 포토 다이오드 신호의 결과 위치를 측정 한다. AFM 소프트웨어를 사용 하 여 스캔을 시작 하려면.
   5. AFM 소프트웨어에서 측정을 수행 약 10000 녹음 때까지 계속 합니다.
      참고: 일반적으로, 긍정적인 통제 분자의 픽업 속도 0.5¹⁶, 그래서 10000은 분석에 충분 한 데이터를 수집할 수 있을 하는 데 필요한 주위입니다.

7. 데이터 분석

1. 데이터 표준화
   1. 각 레코딩에 대 한 계산 사용 하 여 확장 확장 변위-F/kc = (kc 5.2.7에서 이다).
   2. 아무 힘 봉우리는 현재 시작 또는 힘-확장 추적의 끝의 평균을 취 함으로써 초기 힘 수준을 결정 하 고 캔틸레버 표면에 대하여 누르는 하지. 전체 힘 확장 곡선 다음이 평균 값으로 이동 수 있습니다.
   3. 되도록 확장 제로 y 축을 따라 데이터를 변환. 이 때문에 분자 확장 추적의 시작 부분에서 0으로 설정 해야 합니다.
2. 관심사의 단백질을 식별합니다.
   1. 단일 분자 지문 제공 하는 적어도 4 개의 I91 이벤트와 함께 녹음을 식별 합니다. 이러한 녹음 캡처 진정한 "단일 분자 측정".
   2. 추가 분석에 대 한 단일 분자 이벤트를 표시 하는 이벤트를 저장 합니다.
3. 윤곽선 길이 증가 결정 합니다.
   1. 각 레코딩에 대 한 맞게 펼쳐지는 이벤트, 벌레 모양의 체인 모델 어디 실내 온도에, p 속성 길이 (일반적으로 0.4 ~ 1 nm), x 는 나노미터의 확장 이며 L 에 윤곽선 길이 나노미터입니다.
      참고: 벌레 같은 체인의 형태는 정확한 보정된 솔루션, 더 정확한 숫자 솔루션 Bouchiat 그 외 여러분 에서 발견 된다 ¹⁷. 대체 피팅 모델 수 외 에서 찾을 수 있습니다 ¹⁸.
   2. L 2 연속 펼쳐지는 이벤트, 결정 그리고이 차이가 만들어낸 값 사이의 차이 계산 "윤곽선 길이 증가".
4. 파열 힘을 결정 합니다.
   1. 펼쳐진 곡선에서 큰 하락 전에 높은 포인트를 취 함으로써 주어진된 펼쳐진 이벤트에 대 한 파열 힘을 계산 합니다.

결과

이 프로토콜에서 대표적인 결과 그림 2에 표시 됩니다. 두 패널 단백질에서 대표적인 힘 확장 곡선을 표시합니다. 상단 하단 표시는 단백질--관심, NI₁₀C 분자 측면 I91 단백질 I91 polyprotein에서 결과 표시 합니다. 이러한 녹음 표시 I91의 특성 힘 (200 pN) 윤곽선 길이 증가 (28 nm) 정렬 및 AFM의 교정 되었는지 나타냅니다. 이러한 힘 확장 곡선 다음 웜 ...

토론

프로토콜에 중요 한 단계는 "지문" 단일 분자 이벤트를 긍정적인 통제 역할 단계 1.1.2에서에서 설명 하는 polyprotein의 사용 이다. 일반적으로, 거기 한다 밝혀지고 있을 polyprotein 단백질의 이벤트 (I91, 즉 약 28의 약 200 pN 및 윤곽선 길이 증가의 펼쳐진 힘 nm) 관심사의 단백질의 접힌 되었습니다는 명확 하 게 결론. 예를 들어 때 관심사의 단백질은 양쪽에서 3 개의 I91 도메인에 의해 형벌 이다, 다음 있?...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
AFM Specimen Discs, 15mm diameter	Ted Pella, Inc.	16218	Serve as base for glass substrate
Round Glass Coverslips, 15mm diamiter No.1 Thick	Ted Pella, Inc.	26024	serve as glass substrate and base for gold coating
Adhesive Tabs	Ted Pella, Inc.	16079	Paste on AFM Specimen Discs to provide a sticky face for attaching glass coverslips
STD Multimode head assembly	Bruker Nano Inc.	1B75C	AFM head
Glass probe holder	Bruker Nano Inc.	MTFML-V2	Glass probe holder for scanning in fluid with the MultiMode AFM.
Microlever AFM probes	Bruker Nano Inc.	MLCT	Silicon Nitride cantilevers with Silicon Nitride tips, ideal for contact imaging modes
AFM probes with Au coated tips	Bruker Nano Inc.	OBL-10	Cantilevers for pulling on proteins with low unfolding force
Multifunction Data Acquisition (DAQ) Card,16-Bit, 1 MS/s (Multichannel), 1.25 MS/s (1-Channel), 32 Analog Inputs	National Instruments	PCI-6259	Data Acquisition for signals from AFM head and Piezo Actuators
LISA Linear Piezo Stage Actuators	Physik Instrumente LP	P-753.11C	Piezo Actuator to control the position of substrate and perform pulling measurements
XY Piezo Stage	Physik Instrumente LP	P-541.2CD	Piezo Actuator to control the position of substrate and scan on substrate surface