마우스에서 아데노 관련 바이러스의 전신 치료 전달을 위한 측면 꼬리 정맥 주입

시작하려면 마우스 꼬리를 구속 튜브의 상단 구멍에 삽입합니다. 마우스를 튜브에 천천히 당기고 플러그를 마우스 앞에 놓아 빠져나가지 않도록 합니다. 더 작은 쥐를 위한 구속 슬리브를 만들려면 원뿔의 코 끝을 잘라 쥐의 코가 막히지 않고 숨을 쉴 수 있는 충분한 공간이 있는지 확인합니다.

그런 다음 마우스의 길이와 비슷한 원뿔의 뒷면을 자릅니다. 앞에서 설명한 대로 튜브 고정 장치에 마우스를 놓습니다. 쥐의 꼬리를 잡고 쥐가 원뿔 안으로 걸어 들어가도록 합니다.

구속 콘을 튜브에 밀어 넣습니다. 마우스의 꼬리가 튜브 뒤쪽에서 완전히 빠져 나오고 마우스가 원뿔 내부에서 숨을 쉴 수 있는 공간이 있는지 확인합니다. 콘의 노즈 개구부 바로 앞에 튜브 플러그를 고정합니다.

15밀리리터의 원뿔형 튜브에 따뜻한 물을 채웁니다. 마우스가 들어 있는 튜브 고정 장치를 높은 플랫폼에 놓습니다. 구속된 쥐의 꼬리를 측면 정맥이 명확하게 확장되고 보일 때까지 최소 1분 동안 따뜻한 물에 담그십시오.

1.7ml의 마이크로 원심분리기 튜브가 들어 있는 뚜껑이 없는 아데노 관련 바이러스(AAV)를 튜브 랙에 넣습니다. 주로 사용하는 손으로 바늘을 튜브에 수직으로 삽입합니다. 바늘이 튜브 안에 들어가면 자주 사용하지 않는 손으로 튜브를 잡습니다.

그런 다음 튜브와 주사기를 동시에 눈높이로 올리고 바늘이 튜브 벽에 닿지 않도록 합니다. 두 팔을 테이블에 놓고 투여량을 천천히 주사기에 넣습니다. 일회용 흡수 패드 위로 주사기에서 기포를 배출합니다.

주입제를 40초 동안 유지하여 예열합니다. 꼬리 정맥이 명확하게 보이는지 확인한 후 높은 플랫폼에서 튜브 고정 장치를 제거하고 테이블 위에 직접 놓습니다. 꼬리를 쉽게 다룰 수 있도록 발을 아래로 향하게 하여 마우스를 억제 장치에 놓습니다.

꼬리를 거즈로 빠르게 닦아 말리십시오. 그런 다음 알코올 면봉으로 꼬리를 닦고 다시 마른 거즈로 말리십시오. 꼬리를 왼쪽이나 오른쪽으로 약 90도 회전하여 두 개의 측면 정맥 중 하나가 위쪽을 향하도록 합니다.

꼬리의 중간 1/3 이내에서 적절한 주사 부위를 찾습니다. 주로 사용하지 않는 손으로 엄지와 검지를 주사 부위 바로 원위부에서 잡고 잡습니다. 주사 부위가 집게 손가락에 평평하게 놓이도록 꼬리를 집게 손가락 위로 접습니다.

그런 다음 꼬리를 뒤로 당겨 늘리면 주입 부위가 완전히 수평이 됩니다. 주사기의 배럴 플랜지 양쪽에 있는 주로 사용하는 손의 검지와 중지를 사용하여 주사기를 잡고 엄지 손가락으로 플런저를 준비합니다. 양손을 테이블에 놓고 바늘을 경사가 위쪽을 향하도록 하여 꼬리와 정맥에 직접 평행하게 놓습니다.

이제 바늘에 아래쪽 압력을 가하고 정맥으로 앞으로 밀어 AAV 용액을 정맥에 주입합니다. 투여 후 천천히 바늘을 빼고 즉시 출혈이 멈출 때까지 주사 부위에 10 초 이상 거즈로 압력을 가합니다. 주입 후 형광 리포터 단백질의 조직학적 이미징은 tdTomato가 간과 대퇴사두근 전체에 걸쳐 확산적으로 발현됨을 보여주었으며, 이는 AAV9가 두 조직의 다른 영역에 광범위하게 도달하고 transduction되었음을 나타냅니다.