RBPR2 및 STRA6 펩타이드에 대한 Kinetic assay를 설정하려면 러닝 버퍼에서 마우스 RBPR2, 돌연변이 RBPR2 및 STRA6 펩타이드를 순차적으로 희석합니다. 제어 소프트웨어를 열고 Kinetic SOAR Affinity 마법사를 선택합니다. 주입 시퀀스 대화 상자에서 플로우 셀 2를 활성으로 하고 플로우 셀 1을 참조로 사용하여 플로우 경로 2.1을 선택합니다.
설정 대화 상자에서 run startup cycles 옵션을 선택하고, 솔루션을 buffer로 입력하고, 사이클 수를 지정하고, next를 클릭합니다. 이제 주입 파라미터 대화 상자로 이동하여 120초의 접촉 시간, 분당 30마이크로리터의 유속, 300초의 해리 시간과 같은 샘플 파라미터를 입력합니다. 재생 매개변수의 경우 재생 용액을 접촉 시간이 30초이고 유속이 분당 30마이크로리터인 글리신 염산으로 설정한 다음 다음을 클릭합니다.
샘플 대화 상자에 펩타이드 이름, 분자량 및 농도를 입력하고 다음을 클릭합니다. 랙 위치 대화 상자에서 희석된 펩타이드를 1에서 100마이크로몰까지 다양한 농도의 개별 120마이크로리터 샘플로 랙의 지정된 위치에 할당합니다. eject rack(배출 랙)을 클릭하고 모든 바이알을 삽입합니다.
그런 다음 다음을 클릭한 다음 prepare run protocol 대화 상자에서 start를 클릭합니다. 파일 이름을 입력하고 저장을 클릭합니다. 이제 소프트웨어에서 시작 메뉴를 클릭하고 평가를 선택하십시오.
파일을 연 다음 드롭다운 선택 메뉴에서 FC-2.1을 선택하여 msRBP4, 돌연변이 msRBPR2 및 msSTRA6 펩타이드의 결합 및 해리 단계에 대한 참조 셀 빈 뺀 활성 센서그램을 분석합니다. 그런 다음 Kinetics 또는 Affinity 드롭다운을 클릭하고 표면 경계를 선택합니다. Select curves(곡선 선택) 대화 상자에서 include column in the table(테이블에 열 포함)을 선택하고 next(다음)를 클릭합니다.
이제 데이터 선택 대화 상자로 이동하여 빈 뺀 센서그램을 봅니다. Kinetics and Affinity(운동학 및 친화력)를 클릭합니다. 기본 파라미터를 유지하고 커브 피팅을 위해 fit을 클릭합니다.
보고서 탭에서 평형 해리 상수 Kd, 연관 속도 Ka 또는 Kon, 해리 속도 Kd 또는 Koff를 검사합니다. 텍스트 탭의 Kinetics 데이터 센서그램을 제한된 형식으로 저장하고 값을 사용하여 그래프를 플로팅합니다.
