여기서 우리가 사용하는 방법은 약물 전달을 위한 나노입자의 새로운 유형인 단일 벽 탄소 나노튜브로 올리고뉴클레오티드를 포장하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 생체 내 세포로 올리고뉴클레오티드 약물을 보다 효율적으로 전달하는 것입니다. 이 기술의 의미는 올리고뉴클레오티드 약물의 전달을 개선하기 위해 나노 입자를 도입했기 때문에 다발성 골수종을 연구하기 위해 확장됩니다.
이 방법을 통해 다발성 골수종 에 대한 치료에 대한 통찰력을 제공 할 수 있습니다. 그것은 또한 그밖 질병에 적용될 수 있고 단백질 및 소분자와 같은 그밖 화물과 결합될 수 있습니다. 먼저 단일 벽 탄소 나노튜브 1밀리그램, DSPE-PEG 2000 아민 5밀리그램, 멸균 된 뉴클레아제 없는 물 5 밀리리터를 20 밀리리터 유리 신자극 유리에 섞는다.
실온에서 1시간 동안 90와트의 전력 레벨에서 수조 초음파 처리기에서 바이알을 초음파 처리합니다. 초음파 처리 후, 6 시간 동안 24, 000 배 g에서 유리병을 원심분리합니다. 그런 다음 상체 솔루션을 수집합니다.
100킬로달톤 분자량 차단 원심 필터 장치에 단일 벽 탄소 나노튜브 용액의 1밀리리터를 넣고 멸균 된 뉴클레아제없는 물의 4 밀리리터를 넣습니다. 원심분리기는 실온에서 4, 000배에서 10분 동안 10분 동안 원심분리기를 사용하여 과도한 아민을 제거합니다. 아민 기능화 단일 벽 탄소 나노튜브의 450 마이크로 리터에 설포 -LC-SPDP의 0.5 밀리그램을 추가합니다.
그런 다음 10x PBS의 50 마이크로리터를 추가하고 실온에서 2 시간 동안 배양하십시오. 다음으로, 반응 혼합물을 100킬로달톤 분자량 컷오프 원심 필터 장치에 추가하고, 그 다음에 는 4밀리리터의 뉴클레아제 없는 물을 첨가한다. 원심분리기는 실온에서 4, 000배에서 10분 동안 샘플을 원심분리하여 과도한 Sulfo-LC-SPDP를 제거합니다.
Sulfo-LC-SPDP 처리 된 아민 단일 벽 탄소 나노 튜브 용액을 필터에 남기고 이전에 준비된 반대로 준비 된 안티 MALAT1-Cy3 용액 500 마이크로 리터로 희석하십시오. 그런 다음 하룻밤 사이에 섭씨 4도에서 샘플을 배양합니다. 비교의 최상의 결과를 달성하기 위해, 무작위로 각 그룹에서 7시험 또는 대조군으로 14 마리의 마우스를 배치하고, 각 그룹에서 동일한 남성 대 여성 비율로.
다음으로, 수술 벤치를 청소하고 70 %의 에틸 알코올로 살균하십시오. 가열 램프를 사용하여 마우스 중 하나를 따뜻하게하여 꼬리 정맥이 나타날 수 있도록 돕습니다. 꼬리 주입 억제제로 마우스를 제대로 억제합니다.
MM.1S-luc/mCherry 세포를 꼬리 정맥을 통해 PBS의 50 마이크로리터에 주입하십시오. 30초 동안 알코올 면봉으로 주사 부위를 누릅니다. 그런 다음 주입 된 마우스를 표시하고 깨끗한 케이지로 돌아갑니다.
7일째, MM1S 세포 주입 후, 마우스의 꼬리 정맥에 단막 탄소 나노튜브 안티 말라트1을 포함하는 PBS의 50 마이크로리터를 주입한다. 그런 다음 30 초 동안 알코올 면봉으로 주사 부위를 누릅니다. 꼬리에 있는 현지 출혈과 마우스의 일반적인 동작을 1분 동안 관찰한 다음 깨끗한 케이지로 돌려놓습니다.
주사가 잘 용납되는지 확인하기 위해 케이지를 랙으로 되돌리기 전에 주입 된 모든 마우스를 다시 관찰하십시오. 해부 전에 각 마우스의 무게. 혈액 세포 카운터 머신에 의해 수행 된 완전한 혈액 수 분석에 대한 심혼에서 말초 혈액을 수집합니다.
다음으로, 골수, 비장, 림프절, 신장 및 눈에 보이는 전이조직을 가진 조직의 조직을 수집합니다. 골수 샘플에서 RNA와 단백질을 추출합니다. 나머지 모든 조직을 포르말린으로 수정합니다.
24시간 고정 후, 0.5-어금니 EDTA 용액에 뼈 샘플을 5일 동안 담급분해합니다. 그런 다음 모든 샘플을 75%에틸 알코올에 담그고 장기 보관하십시오. QRT PCR 결과는 항 말라트1 gapmeR DNA가 말AT1 발현을 쓰러뜨리고 H929 및 MM.1S 세포에서 크게 세포멸을 유도한다는 것을 보여주었습니다.
단일 벽 탄소 나노튜브 항 MALAT1-Cy3는 MM 세포의 핵으로 전달되었고, H929 및 MM.1S 세포 모두에서 내인성 MALAT1 수준을 현저히 억제하였다. BMEC-1 세포의 생존력은 단일 벽 탄소 나노튜브 항 MALAT1-Cy3의 치료 후 유의한 차이가 없거나 다른 투여량및 시점에서 제어할 수 없다. 이는 단일 벽 탄소 나노튜브 항 MALAT1-Cy3의 독성이 높은 투여량에서 정상 세포에 제한적이고 허용 가능한 독성을 갖는다는 것을 나타낸다.
생체 내에서 단일 벽 탄소 나노튜브 안티 말AT1의 치료 효과를 평가하기 위해 인간 MM-보급 마우스 모델이 설립되었다. 단일 벽 탄소 나노튜브 항 말AT1 치료 군에서 마우스의 루시퍼론 신호는 21일 치료 후 대조군에 비해 현저하게 낮았다. 이러한 결과로부터, 정맥 주사를 통한 단일 벽 탄소 나노튜브 항말라1 치료가 항 말타1 올리고를 종양 세포에 효과적으로 전달할 수 있다는 결론을 내렸다.
치료의 유의한 부작용이 관찰되지 않았으며, 단일 벽 탄소 나노튜브 항 말AT1 주사가 마우스에게 안전한 치료법임을 나타냅니다. 이 절차를 시도하는 동안, 세포 분자 조성이 올리고뉴클레오티드 약물의 전달, 효율성 및 치료 효과에 영향을 미칠 것이라는 점을 기억하는 것이 중요합니다. 이 절차에 따라, 단백질 또는 작은 분자의 연상 같은 다른 방법은 추가 질문에 대답하기 위해 수행 될 수있다.
다른 약물을 전달하기 위해 단일 벽 탄소 나노 튜브를 사용하는 것과 같습니다.
