오픈 글로브 부상은 치료왼쪽경우 시력의 영구적 인 손실로 이어질 수 있습니다. 이 전방 세그먼트 기관 배양 모형은 동물 실험을 위한 필요 내의 이 상해의 평가를 허용합니다. 이 프로토콜은 오픈 글로브 부상, 치료 치료, 장기 배양 플랫폼을 사용하여 3 일 이상 부상을 안정화 할 수 있습니다.
절차를 시연하는 것은 닥터 보이스 연구소의 연구 기술자인 트렌트 피어슨(Trent Pearson)이 될 것입니다. 시작하려면, 외과 커튼과 총 해부에 필요한 악기를 놓는다. 해부 현미경에 눈을 시각화하기위한 바이오 안전 캐비닛을 설정합니다.
접시 조립을위한 바이오 안전 캐비닛을 설정합니다. 바이오 안전 캐비닛 내부에 오픈 글로브 부상 유도 작업 공간을 설정합니다. 펑크 플랫폼 앞에 있는 실험실 잭에 크로스 트래킹 바이스를 배치합니다.
여분의 궤도 조직을 제거하고 항생제 항mycotic PBS로 눈을 씻은 후, 눈을 되살리기 위해 항생제 항mycotic PBS에 눈을 두는 거즈를 담근다. 멸균 면도날이나 메스를 사용하여 눈의 적도 근처에서 절개를 만듭니다. 그런 다음 앞쪽 눈을 격리하기 위해 구부러진 수술 가위를 사용하여 눈을 헤아리습니다.
마이크로 가위를 삽으로 사용하여 전방 세그먼트에서 유리체 유머를 떠서 마이크로 가위로 전방 세그먼트에서 렌즈를 제거합니다. 조리개 뿌리에 홍채를 서서히 잘라내어 궤적 메쉬워크가 보일 때까지 복사합니다. 홍채 주위의 절단 을 360도 연장하고 전체 궤도 메쉬 워크 영역을 노출하고 필요한 경우 trabecular 메쉬 워크를 덮는 남은 잔류 홍채를 청소하십시오.
조직의 1 밀리미터 얇은 밴드를 떠나 회반 메쉬 워크 영역에 주모 체 잔해 후방을 손질. 페트리 접시에 전방 세그먼트를 배치 한 후. 면봉을 미디어에 적시고 각막 중앙에 부드럽게 두드려 안료를 제거합니다.
집게로 눈을 잡고 닦아 서 clera 주위에 여분의 안료를 제거 합니다. 반전된 전방 세그먼트를 바닥 접시의 높은 영역에 놓고 각막이 높은 영역의 중심에 남아 있는지 확인합니다. 새로 배치된 전방 세그먼트 위에 클램핑 링을 배치하고 L 키로 나사를 부드럽게 조입니다.
오링이 있는 유체 커넥터를 접시 하단의 나사 포트에 부착합니다. 첫 번째 유체 커넥터는 18 게이지 90도 구부러진 바늘 허브, 튜브 길이, 18 게이지 바늘 허브, 나일론 주사기 필터, 3 방향 밸브 및 미디어로 채워진 20 mm 주사기를 부착합니다. 제2 유체 커넥터는 18 게이지 90도 구부러진 바늘 허브, 튜브 길이, 18 게이지 바늘 허브, 제1 유체 커넥터에 대해 입증된 3방향 밸브를 부착한 다음 멸균 10 밀리리터 주사기의 배럴 부분을 부착하여 액체와 거품을 잡기 위해 저수지 역할을 합니다.
3방향 밸브를 주사기에 적절하게 열어 놓고 첫 번째 유체 커넥터 포트를 사용하여 미디어를 통해 부드럽게 밀어냅니다. 전방 세그먼트를 팽창시키기 위해 튜브를 미디어로 채우고 결국 저수지를 채웁니다. 미디어를 부드럽게 접시에 밀어 거품을 제거하고 거품을 밀어 접시를 반전.
전방 세그먼트 장기 배양 접시를 세포 배양 인큐베이터에 넣습니다. 튜브 라인을 인큐베이터 도어 의 바닥을 통해 튜브 라인을 지시하여 도어 개폐에 대한 간섭을 방지합니다. 압력 변환기 기기에 저장소와 튜브 라인을 배치합니다.
PBS가 튜브 라인에 유입되는 기포를 피하기 위해 라인을 통과하는 동안 측면 3방향 밸브를 설정된 압력 변환기에 연결합니다. 개방형 부상 유도를 위해 준비된 바이오 안전 캐비닛 내부에는 천자 플랫폼의 압력 조절기가 직경 4.5mm의 물체에 적절한 천자 힘을 생성하기 위해 평방 인치당 50 파운드의 힘으로 설정합니다. 펑크 플랫폼 앞에 있는 실험실 잭에 크로스 트래킹 바이스를 배치합니다.
피스톤 암을 최대 거리로 확장하고 각막 정점을 천공 물체의 1밀리미터 영역 내에 배치하고, 피스톤 암을 철회하고, 전방 세그먼트를 천공 오브젝트에 1센티미터 더 가깝게 놓습니다. 천자 장치를 발사하려면 장치를 켜고 장치에 두 번째 스위치를 사용하여 솔레노이드 밸브를 엽니다. 눈에서 장치를 철회하려면 두 번째 스위치를 누르고, 부상 부위에서 누출된 육안 검사 및 미디어 유출에 의한 적절한 부상 유도를 확인합니다.
수술 후, 각막 상피 무결성은 광학 일관성 단층 촬영을 사용하여 이미징을 통해 평가되었다. 부상당한 전방 세그먼트 조직은 부상 직후와 72 시간 후 부상을 입은 직후 에 이미지화되었습니다. 뚜렷한 부상이 부상 후 각막을 통해 위치하는 동안 제어 눈은 각막에 눈에 띄는 혼란을 표시하지 않습니다.
하향식 최대 강도 투영에서 부상은 모양과 크기가 불규칙하다는 것이 분명했지만 부상 크기는 72시간 이상 감소했습니다. 수술 전 첫 3일 동안 인터로큘러 압력은 수용 가능한 범위에서 압력 안정성을 결정하는 것으로 관찰되었다. 대표적인 결과 5개의 눈 중 3개는 허용 가능한 인터로큘러 압력 범위 내에 속한다.
오픈 글로브 부상과 치료 개입으로 인해 인터로큘러 압력이 변경됩니다. 오픈 글로브 부상 유도 후, 압력은 크게 감소하고 실험이 완료 될 때까지 낮은 남아 있었다. 피부결합 접착제를 사용한 부상당한 조직의 치료는 치료되지 않은 조직에 비해 인터로컨압력을 증가시켰으며, 이는 이 방법이 안구 압력을 복원하기 위한 치료제의 효능을 측정하는 데 사용될 수 있음을 나타낸다.
장기 배양에서 세그먼트의 초기 설정은 조직의 장기적인 안정성에 매우 중요합니다. 링을 과도하게 조이면 조직에 스트레스를 유발하고 규정 준수를 줄일 수 있습니다.
