O registro contínuo do fluxo sanguíneo renal em ratos instrumentados nos permite determinar temporariamente a sequência de eventos que levam ao processo de doença que estamos estudando. No nosso caso, é hipertensão e estamos tentando determinar se uma redução do fluxo sanguíneo renal, que ocorre na hipertensão, precede ou é uma consequência da pressão alta. O sistema que demonstraremos hoje e a preparação do animal é realmente projetado para permitir uma determinação contínua de 24 horas do fluxo sanguíneo renal por muitas semanas de cada vez para estudar eventos crônicos e estudar o rato em seu ambiente doméstico, gaiolas.
Tal como acontece com todas as técnicas cirúrgicas, prática, paciência e atenção aos detalhes, seremos obrigados a dominar esses procedimentos até que o implemento possa ser realizado a tempo. Para começar a raspar todo o abdômen em uma região no cochilo em torno da sétima vértebra cervical de um rato anestesiado com um cortador elétrico. Após o barbear, limpe a área três vezes alternando com iodopovidona a 10% e etanol a 70%.
Coloque o rato na posição prona. Faça um corte de um centímetro com o bisturi na soneca e no flanco esquerdo. Em seguida, realize uma dissecção contundente com pinça hemostática no espaço subcutâneo claro da incisão do flanco até a parte de trás do pescoço.
Anexe o botão da pele à sonda de fluxo e passe a sonda de fluxo através deste túnel subcutâneo do pescoço até a incisão do flanco com pinça hemostática. Em seguida, coloque o rato na posição supina e faça uma incisão abdominal de quatro a cinco centímetros na linha média. Dissecar a área ao redor da artéria renal esquerda com pinça de microdissecação curva expondo o espaço suficiente para colocar a sonda de fluxo.
Em seguida, sem rodeios, perfure o músculo lombar quadrado esquerdo com a pinça hemostática e puxe a cabeça da sonda de fluxo através da artéria renal sob o tecido adiposo para a cavidade abdominal. Coloque a malha de fibra de poliéster na parede abdominal. Conecte a ponta da sonda de fluxo à artéria renal esquerda e conecte-a ao medidor de fluxo.
Adicione um pouco de gel ao redor da ponta da sonda e o valor da taxa de fluxo aparecerá no medidor de vazão. Cole a malha de fibra de poliéster presa à sonda na parede abdominal usando adesivo de tecido e segure até secar e colar. Uma vez que a sonda esteja no lugar, desconecte a sonda de fluxo do medidor de vazão e cubra o abdômen com gaze embebida em solução salina.
Para suturar a sonda, vire o rato para a posição prona. Anexe o botão de pele à sonda de fluxo e faça um loop circular da sonda de fluxo subcutaneamente no flanco. Suture a incisão no pescoço e o botão na pele.
Em seguida, suture o flanco com quatro suturas cirúrgicas ott. Conecte a sonda de fluxo ao medidor de fluxo novamente e gire o rato de volta à posição dorsal para verificar o fluxo sanguíneo renal. Faça ajustes finais da sonda de fluxo para otimizar sua posição na artéria renal.
Finalmente, suture o músculo com três ott seda na pele com quatro ott sutura cirúrgica. Quando o rato estiver totalmente recuperado da anestesia, o rato retornará a um sistema de enjaulamento de resposta ao movimento, conecte a sonda de fluxo ao medidor de fluxo sanguíneo e permita um período de recuperação de cerca de uma semana para estabilizar a sonda e a medição de fluxo. A pressão arterial média e o fluxo sanguíneo foram continuamente medidos em ratos sensíveis ao sal sem brilho, enquanto mudavam de uma dieta baixa para alta em sal.
Estes dados representativos de um rato macho foram registados durante um período de quatro semanas e são apresentados com uma média de minutos. Observou-se clara diferença diurna na pressão arterial média e no fluxo sanguíneo. Enquanto a pressão arterial aumenta com uma dieta rica em sal, o fluxo sanguíneo tende a diminuir, em vez de aumentar, sugerindo aumento da resistência vascular renal.
A grande vantagem desta técnica é que ela pode estudar o fluxo sanguíneo renal durante longos períodos de tempo e, mais importante, em condições não anestesiadas. Isso é de grande importância ao estudar a resposta a vários estímulos, onde você pode usar o mesmo animal sob condições controladas não anestesiadas e seguir esse mesmo animal por curtos períodos ou períodos muito longos para ver qual é a resposta a algum estímulo específico ou doença patológica.
