Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

В этом протоколе описан надежный метод получения биопленки пленки. Метод может быть масштабирован на различные объемы культур, что позволяет легко использовать его для различных экспериментальных целей. Дизайн метода позволяет качественно или количественно оценить биопленкообразующий потенциал нескольких видов микобактерий.

Аннотация

Многие бактерии процветают в сложных природных сообществах, проявляя ключевые атрибуты многоклеточности, такие как общение, сотрудничество и конкуренция. Наиболее распространенным проявлением бактериального многоклеточного поведения является образование биопленок, часто связанных с патогенностью. Биопленки обеспечивают защиту от противомикробных агентов, способствуя возникновению устойчивости к противомикробным препаратам. Традиционная практика культивирования бактерий в жидких культурах из колб не отражает их надлежащий физиологический рост в природе, что ограничивает наше понимание их сложной динамики. Примечательно, что метаболические и транскрипционные профили бактерий, обитающих в биопленках, очень похожи на профили естественно растущих клеток. Этот параллелизм подчеркивает важность биопленок как идеальной модели для фундаментальных и трансляционных исследований. В данной статье основное внимание уделяется использованию Mycobacterium smegmatis в качестве модельного организма для иллюстрации метода культивирования биопленок пелликулы. Этот подход может быть адаптирован к различным объемам культур, что облегчает его реализацию для различных экспериментальных целей, таких как исследования противомикробных препаратов. Кроме того, дизайн метода позволяет качественно или количественно оценить биопленкообразующие способности различных видов микобактерий с незначительными корректировками.

Введение

Бактерии способны выживать в виде одноклеточных сущностей; Однако в большинстве физиологически значимых состояний они организуются в миметики сообщества. Биопленка — это широко признанная общественная организация бактерий, образованная агрегированными клетками, заключенными в самостоятельно производимую матрицу1. Такая сборка обладает признаками ранней многоклеточности и обеспечивает более высокую стрессоустойчивость к бактериальным системам. Биопленки часто толерантны к противомикробным препаратам и, по оценкам, являются причиной почти 80% микробных инфекций 2,3

протокол

Подробная информация обо всех реактивах и оборудовании, использованных для исследования, приведена в Таблице материалов.

1. Подготовка среды Sauton

  1. Приготовьте 50 мл 2,5% раствора дигидрофосфата калия, тщательно взвесив 1,25 г дигидрофосфата калия и растворив его в 50 мл деионизированной воды.
  2. Приготовьте 50 мл 2,5% раствора сульфата магния, взвесив 2,56 г сульфата магния и растворив его в 50 мл деионизированной воды.
  3. Приготовьте 10 мл 5% раствора цитрата железа и аммония, весом 0,5 г цитрата железа и аммония и растворив его в 10 мл деионизиров....

Результаты

Биопленочные пленки становятся видимыми невооруженным глазом с третьего дня. Хотя биопленка растет на средах Саутона без 2% глюкозы, при его добавлении наблюдалось улучшение сетчатости. Мы получали 10,48 мг ± 3,13 мг (n = 4) сухой массы биопленки из каждой лунки 24-луночного п?.......

Обсуждение

Многоклеточный образ жизни микробов был описан почти столетие назад; Тем не менее, клинические исследования остаются редкими, в основном из-за отсутствия надежных методов14. Методы, описанные в работах по биологии биопленки, часто трудно адаптировать. Ожи.......

Раскрытие информации

Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

Благодарности

Эта работа была поддержана стипендией DBT-Ramalingaswami, присужденной Амитешу Ананду.

....

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
0.2 µM PVDF syringe filterAxivaSFNY04 R
1 mL tipsGenetixGXM-611000 C
10 µL tipsGenetixGXM-6110 C
200 µL tipsGenetixGXM-61200C
6-well polypropylene platesTarsons980010
Amber tubesTarsons546051
AutoclaveHospharma
Biosafety Cabinet A IIMSET
Blotting paperAny suitable vendor
CentrifugeEppendorf
Citric acidSigma251275
CuvettesBio-Rad2239955
Ferric ammonium citrateSigmaF5879
Gel documentation systemBio-Rad
Glass BeadsSigmaG8772
GlucoseSigma49139
GlycerolSigmaG5516
Inoculation loopsGenaxyHS81121C
L-AspargineSigmaA0884
LB-agarHimediaM1151
LB-mediaHimediaM575
M. smegmatis mc2155 cryo-stockATCC700084
Magnesium sulfateSigmaM2643
MicropipettesGilson
ParafilmTarsons
Petri DishTarsons460020
pH meterLabman Scientific Instruments
Plate ReaderTecan
Polypropylene test tubesGenaxyGEN-14100-PS
Potassium phosphate monobasicSigmaP5379
RifampicinMedchemExpressHY-B0272
Serological pipetteSPL Life Sciences95210
Shaker IncubatorEppendorf
Spatula
SpectrophotometerThermo Scientific
Static IncubatorCARON
Sterile 10 mL syringeBecton Dickinson309642
Sterile 50 mL syringeBecton Dickinson309653
Tween-80SigmaP1754
Weighing balanceSartorius
Zinc sulfateSigmaZ0251

Ссылки

  1. Davey, M. E., O'toole, G. A. Microbial biofilms: From ecology to molecular genetics. Microbiol Mol Biol Rev. 64 (4), 847-867 (2000).
  2. Rumbaugh, K. P., Sauer, K. Biofilm dispersion. Nat Rev Microbiol. 18 (10), 571-586 (2020).
  3. ....

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

JoVE209Mycobacterium smegmatis

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Исследования

Образование

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены