Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
В этом протоколе описан надежный метод получения биопленки пленки. Метод может быть масштабирован на различные объемы культур, что позволяет легко использовать его для различных экспериментальных целей. Дизайн метода позволяет качественно или количественно оценить биопленкообразующий потенциал нескольких видов микобактерий.
Многие бактерии процветают в сложных природных сообществах, проявляя ключевые атрибуты многоклеточности, такие как общение, сотрудничество и конкуренция. Наиболее распространенным проявлением бактериального многоклеточного поведения является образование биопленок, часто связанных с патогенностью. Биопленки обеспечивают защиту от противомикробных агентов, способствуя возникновению устойчивости к противомикробным препаратам. Традиционная практика культивирования бактерий в жидких культурах из колб не отражает их надлежащий физиологический рост в природе, что ограничивает наше понимание их сложной динамики. Примечательно, что метаболические и транскрипционные профили бактерий, обитающих в биопленках, очень похожи на профили естественно растущих клеток. Этот параллелизм подчеркивает важность биопленок как идеальной модели для фундаментальных и трансляционных исследований. В данной статье основное внимание уделяется использованию Mycobacterium smegmatis в качестве модельного организма для иллюстрации метода культивирования биопленок пелликулы. Этот подход может быть адаптирован к различным объемам культур, что облегчает его реализацию для различных экспериментальных целей, таких как исследования противомикробных препаратов. Кроме того, дизайн метода позволяет качественно или количественно оценить биопленкообразующие способности различных видов микобактерий с незначительными корректировками.
Бактерии способны выживать в виде одноклеточных сущностей; Однако в большинстве физиологически значимых состояний они организуются в миметики сообщества. Биопленка — это широко признанная общественная организация бактерий, образованная агрегированными клетками, заключенными в самостоятельно производимую матрицу1. Такая сборка обладает признаками ранней многоклеточности и обеспечивает более высокую стрессоустойчивость к бактериальным системам. Биопленки часто толерантны к противомикробным препаратам и, по оценкам, являются причиной почти 80% микробных инфекций 2,3
Подробная информация обо всех реактивах и оборудовании, использованных для исследования, приведена в Таблице материалов.
1. Подготовка среды Sauton
Биопленочные пленки становятся видимыми невооруженным глазом с третьего дня. Хотя биопленка растет на средах Саутона без 2% глюкозы, при его добавлении наблюдалось улучшение сетчатости. Мы получали 10,48 мг ± 3,13 мг (n = 4) сухой массы биопленки из каждой лунки 24-луночного п?.......
Многоклеточный образ жизни микробов был описан почти столетие назад; Тем не менее, клинические исследования остаются редкими, в основном из-за отсутствия надежных методов14. Методы, описанные в работах по биологии биопленки, часто трудно адаптировать. Ожи.......
Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.
Эта работа была поддержана стипендией DBT-Ramalingaswami, присужденной Амитешу Ананду.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.2 µM PVDF syringe filter | Axiva | SFNY04 R | |
1 mL tips | Genetix | GXM-611000 C | |
10 µL tips | Genetix | GXM-6110 C | |
200 µL tips | Genetix | GXM-61200C | |
6-well polypropylene plates | Tarsons | 980010 | |
Amber tubes | Tarsons | 546051 | |
Autoclave | Hospharma | ||
Biosafety Cabinet A II | MSET | ||
Blotting paper | Any suitable vendor | ||
Centrifuge | Eppendorf | ||
Citric acid | Sigma | 251275 | |
Cuvettes | Bio-Rad | 2239955 | |
Ferric ammonium citrate | Sigma | F5879 | |
Gel documentation system | Bio-Rad | ||
Glass Beads | Sigma | G8772 | |
Glucose | Sigma | 49139 | |
Glycerol | Sigma | G5516 | |
Inoculation loops | Genaxy | HS81121C | |
L-Aspargine | Sigma | A0884 | |
LB-agar | Himedia | M1151 | |
LB-media | Himedia | M575 | |
M. smegmatis mc2155 cryo-stock | ATCC | 700084 | |
Magnesium sulfate | Sigma | M2643 | |
Micropipettes | Gilson | ||
Parafilm | Tarsons | ||
Petri Dish | Tarsons | 460020 | |
pH meter | Labman Scientific Instruments | ||
Plate Reader | Tecan | ||
Polypropylene test tubes | Genaxy | GEN-14100-PS | |
Potassium phosphate monobasic | Sigma | P5379 | |
Rifampicin | MedchemExpress | HY-B0272 | |
Serological pipette | SPL Life Sciences | 95210 | |
Shaker Incubator | Eppendorf | ||
Spatula | |||
Spectrophotometer | Thermo Scientific | ||
Static Incubator | CARON | ||
Sterile 10 mL syringe | Becton Dickinson | 309642 | |
Sterile 50 mL syringe | Becton Dickinson | 309653 | |
Tween-80 | Sigma | P1754 | |
Weighing balance | Sartorius | ||
Zinc sulfate | Sigma | Z0251 |
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеСмотреть дополнительные статьи
This article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены