Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Этот протокол предлагает метод изучения клеточной динамики с использованием простой техники культивирования in vitro . Это дает возможность исследователям и преподавателям рыбок данио изучать клеточные процессы, такие как те, которые связаны с гомеостазом костей и основами клеточной биологии, визуализируя флуоресцентные ядра и апоптотические клетки в чешуйках.

Аннотация

Чешуя рыбок данио обладает целым рядом преимуществ для использования в стандартных лабораториях в учебных и исследовательских целях. Чешуйки легко собираются без необходимости эвтаназии, регенерируются в течение пары недель, а также полупрозрачные и небольшие, что позволяет рассматривать их с помощью стандартного микроскопа. Чешуя рыбок данио особенно полезна в образовательной среде, поскольку она предоставляет учащимся уникальную возможность участвовать в практическом обучении, особенно в понимании клеточной динамики и методов культивирования in vitro . Основной целью данного протокола является описание метода сбора и поддержания чешуи рыбок данио в культуре для использования в различных биологических исследованиях с использованием базового лабораторного оборудования. Кроме того, в протоколе подробно описывается их использование для понимания костного гомеостаза путем изучения активности костных клеток, участвующих в резорбции и отложении костей. Он также включает в себя дополнительные протоколы для общих методов, таких как визуализация ядер и апоптотических клеток. Протокол культивирования in vitro дает надежные результаты с минимальным количеством реагентов и оборудования. В этой статье обсуждаются преимущества использования in vitro культур чешуи данио рерио для стимулирования научных исследований и описываются ресурсы, необходимые для поддержки их интеграции в образовательные учреждения.

Введение

В последние годы рыбки данио (Danio rerio) стали ценным модельным организмом в различных научных областях, включая генетику, биологию развития и токсикологию 1,2,3. Данио-рерио – это небольшие тропические пресноводные рыбы, обитающие в реках Юго-Восточной Азии4. Они стали популярным модельным организмом в биологии благодаря своей простоте в уходе, небольшому размеру, быстрому репродуктивномуциклу и полупрозрачным эмбрионам. Это позволяет легко наблюдать за их внутренним развитием, что д....

протокол

Все описанные здесь протоколы соответствуют рекомендациям Канадского совета по уходу за животными и ежегодно утверждаются комитетом по уходу за животными Университета Святой Марии/Университета Маунт-Сент-Винсент под номерами протоколов 20-14 и 21-12. Прежде чем выполнять этот протокол, пользователи должны убедиться в том, что федеральные и провинциальные рекомендации по использованию животных в научных исследованиях или обучении соблюдаются. Подробная информация о реагентах и оборудовании, использованных в этом исследовании, приведена в Таблице материалов.

1. П....

Результаты

Недавно этот протокол культивирования шкалы был использован для изучения костного гомеостаза11. Чешуйки могут сохраняться в питательной среде не менее 2 суток. Количество апоптотических клеток анализировалось в каждый день культивирования, максимум в т?.......

Обсуждение

Чешуя рыбок данио является легкодоступной моделью in vitro для изучения множества различных биологических процессов, которые могут поддерживаться до 2 дней с использованием метода культивирования и инкубатора для моделирования их естественной средыобит.......

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конфликта интересов.

Благодарности

Авторы благодарят персонал водного объекта Университета Маунт-Сент-Винсент и всех членов лаборатории развития костей Франца-Одендаля за обеспечение необходимого ухода за рыбами. Выражаем особую благодарность Алише Макнил (Alisha McNeil), Кили А. Маклеллан (Keely A. MacLellan) и Ширин Джеради (Shirine Jeradi) за помощь в оптимизации некоторых протоколов. Это исследование было поддержано Канадским космическим агентством (CSA) [19HLSRM01] и Советом по естественным наукам и инженерным исследованиям Канады (NSERC).

....

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
0.2 mL tubesn/an/a
37% HCl EMDHX0603-4For pH stabilization and prepration of PRS
Concave sliden/an/a
DAPIVectashieldH-1200For cell nuclei visualization
Diazonium salt (Fast Blue B)SigmaD9805For AP substrate solution
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) powder Sigma D5523For scale culture media 
Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate (MS222) Sigma E10521For preparation of 0.1% MS222
Fetal bovine serum Sigma F4135For scale culture media 
Fluorescence microscopen/an/a
Glacial acetic acid Fisher A38 212For acetate buffer
GlycerolVWRBDH1172-4LPFor 80% glycerol - storage scales
HEPES ThermoFisher 15630106For scale culture media 
Hot platen/an/a
KCl SigmaP217-10For preparation of PBS
LysotrackerThermoFisherL7528For lysosomes  visualization
Maleic acidSigmaM0375For Tris-Maleate buffer 
Micropipetten/an/a
N,N-dimethylformamideSigma319937For AP substrate solution
N,N-dimethylformamide Sigma319937For Enzyme Substrate Solution
Na2HPO4 EMDSX0720-1For preparation of PBS
NaCl Sigma S9888For preparation of PBS
NaNO2SigmaS-2252For 4% NaNO2
NaOH SigmaS5881For preparation of 4% PFA
NaOH Sigma S5881For scale fixation and pH stabilization
Napthol-AS-TR-phosphateSigmaN6125For AP substrate solution
Napthol-AS-TR-phosphate SigmaN6125For Enzyme Substrate Solution
Pararosaniline hydrochloride SigmaP3750For PRS
Penicillin-streptomycin 5000 units penicillin and 5mg streptomyocin/mlThermoFisher 15140122For scale culture media 
Personal protective equipment (PPE): disposable nitrile gloves, safety glasses/splash goggles and lab coat.n/an/a
PFA Sigma P6148For scale fixation
Sodium acetate Sigma S2889For acetate buffer
Standard compound microscopen/an/a
Stir platen/an/a
Tartaric acidSigmaT6521For Tartrate buffer
Tris baseRoche03 118 142 001For Tris-Maleate buffer 

Ссылки

  1. Nusslein-Volhard, C., Dahm, R. . Zebrafish. , (2002).
  2. Linney, E., Upchurch, L., Donerly, S. Zebrafish as a neurotoxicological model. Neurotoxicol Teratol. 26 (6), 709-718 (2004).
  3. Truong, L., Harper, S. L., Tanguay, R. L.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

JoVE215

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Исследования

Образование

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены