Protokolümüz periapical periodontitisin erişilebilir ve kontrollü bir fare modelinde incelenmesini sağlar. Bu nedenle, bu protokol hasta örnekleri veya in-vitro modellerüzerinde avantajları vardır. Bu tekniğin başlıca avantajları farenin iyi incelenmiş olması ve yöntemin tesis gereksinimleri açısından teknik olarak basit olması ve maliyet etkin olmasıdır.
Bu işlem dişlerin küçük boyutları nedeniyle zorlu olduğundan, tekniğin konumlandırılması ve performansı hakkında bilgi edinmek için prosedürü görselleştirmek faydalıdır. Parmak ucutuya yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra, fareyi kapalı hücreli ekstrüzyonlu polistiren köpük yüzeyine baskın tarafa yerleştirin ve pençeleri bantla sabitleyin. Kesici dişlerin çifti başına tek bir lastik bant ve kapalı hücreekströz polistiren köpük yüzeyine sabitlenmiş uzun iğneler kullanarak, ağzı açık şekilde destekle.
Sağ yanağı geri çekmek için köpük bantlı kapalı forseps kullanın. Ve bir mikroskop ve bir ışık kaynağı altında köpük ve fare yerleştirin. Daha sonra, bir diş spatula kullanarak dil geri çekmek ve ilk mandibular azı bitişik mukobukkal kat içine lokal anestezik 25 ila 50 mikrolitre enjekte etmek için 27 gauge iğne kullanın.
Enjeksiyon bölgesi çevresinde doku şişmesi gözlenmelidir. Hamuru ortaya çıkarmak için, bir yuvarlak ile donatılmış herhangi bir uygun diş motoru kullanın, dakikada 800 mermi hızında yüksek hızlı elmas 0.8 milimetrelik diş bur, hamuru boynuzları dentin ile görünür kadar ilk sağ mandibular molar oklüzal kısmını delmek için. Bir K veya H dosyası kullanın, sayı sekiz veya sayı 10 hamuru delmek ve boynuzları içine dosyanın eklenmesine izin vermek için mesial ve distal hamuru boynuzları kapsayan dentin kırmak.
Dosyaları ile açıklıkları genişletirken hamuru içinde dosyaları ile mümkün olduğunca derinlemesine çalışmaya devam, hamuru kanama genellikle bur ile dişin keskin kenarları yuvarlak gözlenir ve deneme sırasında ağrıyı azaltmak için aclusion diş kaldırmak. Herhangi bir enkaz temizlemek için bir mikro fırça kullanın. Ve kontralateral sol ilk mandibular azı azını kontrol olarak bırakın.
İşlemden sonraki ilk üç gün boyunca, hayvanları ağırlıkve günde bir kez buprenorfin intraperitoneally kilogram başına 0.1 miligram enjekte. Haftada 2-3 kez tartma ve genel davranış değerlendirmesi ile önümüzdeki 42 gün boyunca hayvanları izlemeye devam edin. Ve takip süresi boyunca kafesin zemininde bir Petri kabında su ile yumuşatılmış gıda peletteslim.
Deneyin sonunda, hem tedavi edilen hem de tedavi edilmeyen taraflarda üç azı azı lının bulunduğu çene kısmını toplamak için cerrahi makas ve forseps kullanın. Ve mümkün olduğunca yumuşak doku soymak için forceps kullanın, örnekler üzerinde çoğunlukla kemik ve diş bırakarak. PBS'de dokuyu kısa bir süre durula.
24 ila 48 saat boyunca yüzde dört paraformaldehit fiksasyon önce. Daha sonra taze PBS'de numuneleri üç kez durulayın. Mikro-Bilgisayarlı Tomografi veya Mikro-BT analizi için, hasat edilen dokuları tarayıcı aşamasında 1,5 mililitre PBS içeren 12 milimetre çapındaki bir tüpe yerleştirin.
Diş ve kökün bukcal veya lingual yüzeyleri tüpün altına paralel yatmak için yönlendirilmiş örneklerle. Örnekleri ayırmak için bir sünger kullanın. Ve esnek film ile tüpün üst kapağı.
Kontrol dosyasını seçin ve enerjiyi 70 kilovolta, yoğunluğu 114 mikro amper'e ve çözünürlüğü altı mikrometrelik voxel boyutuna ayarlayın. Scout Görünümü'ne tıklayın. Görüntü göründüğünde, Başvuru Satırı'nı tıklatın ve tarama için örneklerin alanını işaretleyin, her örnekten sonra Tarama Ekle'yi tıklatın.
Tüm örnekler işaretlendiğinde, görev listesine gidin ve Etkileşim görevlerini başlat'ı seçin. Mikro-BT dilimlerinin konturunu belirlemek için, koronal hamurun, her iki kanalın radiküler posasının ve her iki apikal foramenin bulunduğu dişin yaklaşık ortasını temsil eden dilimi seçin. Kontur paneline tıklayın ve distal kök apeksdistal noktasından başlayarak, radyal paque apikal alana pikonal olarak apikal sınır işareti, mesial kök ünün distal sınırını takip mesial kök apeks mesial sınırından, ve distal kökün mesial sınırı, furkasyon bölgesi ile.
Elde edilen konturkopyalayıp yapıştırın ve konturu orta dilimin her iki tarafına yerleştirilmiş beş dilime göre ayarlayın. Mikro-BT Değerlendirmesi altında her örnek için işaretlenmiş konturun doku hacmini hesaplamak için Görev'i seçin ve 3D-Değerlendirme'yi tıklatın. Ardından, 3D-Değerlendirme penceresinde, Doku hacmini hesaplamak için Seç'i tıklatın ve bir filtre seçin.
Mikro-BT analizinin sonunda, dokuları tarayıcıdan 10 gün boyunca bir mililitre EDTA içeren mikro santrifüj tüpüne aktarın. Kireçlenmenin sonunda, numuneleri konsantrasyon başına bir saat boyunca artan etanol konsantrasyonları içeren histolojik kasetlere yerleştirin. İkinci etanol daldırma sonra, ksilenin buharlaşmasını sağlamak için bir gecede kimyasal bir başlık içinde 60 derece santigrat sıvı parafin içine kasetleri aktarmadan önce, iki bir saatlik daldırma için ksilene içine örnekleri aktarın.
Ertesi sabah, taç ve kökleri kalıbın altına paralel odaklı ile kurutulmuş örnekleri yerleştirin, bir histolojik engelleme makinesine parafin örnekleri gömmek için. Bölümleri elde etmek için parafin bloğu örneğini mikroton kesme bloğuna sabitle ve numuneyi ilgi dokusuna ulaşılına kadar kesin. Dişin herhangi bir parçası görünür olduğunda, koronal ve radiküler hamuru ve apikal foramen elde edilense kadar kesme açısını ayarlayarak altı mikrometre kalınlığında kesitler elde etmeye başlayın.
Burada, bir bütün tedavi mandibula gösterilir. Tedavi edilen ilk sağ azı nın büyütülmesi, hem mesial hem de distal pulpboynuzlarının maruz ihyasının ve kanalların girişinin gözlemlenmesine olanak sağlar. Mikro-BT görüntüleme mesial pulpa pozlama görselleştirme sağlar, ve kemik rezorbtion mesial ve distal periapical radyolüan alanları.
Gerçekten de, doku hacminin önemli bir periapical kemik rezorbasyonu kontrollere göre, tedavi edilen dişler de ölçülür. Histolojik analizler, tedavi edilen dişte diş posasının nekroz alabildiği, H ve E boyamadan sonra kontrol organize edilmiş pulpdokuya göre net bir şekilde görülebilen bir nekroz olduğunu göstermektedir. Ayrıca, ve daha da önemlisi, tedavi edilen dişin periapical bölgesinde, kontrol dişlerinde bulunmayan bağışıklık hücrelerinden oluşan periapical bir lezyon gözlenir.
Fareyi, hamurun pozlanması sırasında doğru bir konumlandırma hayvanın ağzına iyi bir erişim ve en iyi sonuçlar elde etmek için doğru şekilde konumlandırmak hayati önem taşır. Bu protokolden sonra immünohistokimyasal doku boyama ve faks gibi periaptik inflamasyon analizi ve detaylı moleküler analiz yöntemleri yapılabilir. Bu protokol önemli, sadece diş araştırmaları için değil, aynı zamanda immünolojik araştırmalar için, dahili iç kontrol ile lokal indüklenen inflamasyon için bir model sağlar gibi.
