הפרוטוקול שלנו מאפשר חקר של דלקת קרום המוח פריאפית במודל עכבר נגיש ומבוקר. לכן, פרוטוקול זה יש יתרונות על פני דגימות המטופל או מודלים במבחנה. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם כי העכבר נחקר היטב, כי השיטה היא פשוטה מבחינה טכנית במונחים של דרישות המתקן והוא חסכוני.
כמו הליך זה הוא מאתגר בשל הממדים הקטנים של השיניים, זה מועיל לדמיין את ההליך כדי ללמוד על המיקום והביצועים של הטכניקה. לאחר אישור חוסר תגובה לצביטת בוהן, מניחים את העכבר בצד היד הדומיננטי על משטח קצף פוליסטירן מובלט בתא סגור ומאבטחים את הכפות בקלטת. באמצעות גומייה אחת לכל זוג חותכים, ומחטים ארוכות מוצמדות למשטח קצף פוליסטירן מובלט בתא סגור, תומכים בפה פתוח.
השתמש מדפים סגורים מודבקים לקצף כדי לחזור בו הלחי הימנית. ומ מניחים את הקצף והעכבר תחת מיקרוסקופ ומקור אור. לאחר מכן, לסגת את הלשון באמצעות מרית שיניים ולהשתמש מחט מד 27 להזריק 25 כדי 50 microliters של הרדמה מקומית לתוך קיפול ריר סמוך טוחנת הים הראשון.
יש לצפות בנפיחות ברקמות סביב אתר ההזרקה. כדי לחשוף את עיסת, להשתמש בכל מנוע שיניים מתאים מצויד עגול, יהלום במהירות גבוהה 0.8 מילימטר בר שיניים במהירות של 800 סיבובים לדקה, כדי לקדוח את החלק occlusal של טוחן הים הימני הראשון עד קרני עיסת גלויים דרך דנטין. השתמש בקובץ K או H, מספר שמונה או מספר 10 כדי לנקב את העיסה ולשבור את הדנטין המכסה את קרני העיסה המסיאליות והדיסטליות כדי לאפשר הכנסת הקובץ לתוך הקרניים.
המשך לעבוד עם הקבצים בתוך עיסת עמוק ככל האפשר תוך הרחבת הפתחים עם הקבצים, דימום מן העיסה הוא ציין בדרך כלל סביב הקצוות החדים של השן עם bur ולהסיר את השן מן aclusion כדי להפחית את הכאב במהלך הניסוי. השתמש במברשת מיקרו כדי לנקות את כל הפסולת. ולהשאיר את התבונה השמאלית ההפוזרתית הראשונה כשליטה.
במשך שלושת הימים הראשונים לאחר ההליך, משקלל את בעלי החיים והזריק 0.1 מיליגרם לקילוגרם של buprenorphine תוך-אפית פעם ביום. המשך לעקוב אחר בעלי החיים במהלך 42 הימים הבאים על ידי שקילה והערכה התנהגותית כללית פעמיים עד שלוש פעמים בשבוע. ולספק כדורי מזון מרוככים במים בצלחת פטרי על רצפת הכלוב לאורך כל תקופת המעקב.
בסוף הניסוי, השתמש במספריים כירורגיים ומדפים כדי לאסוף את החלק של הלסת הכולל את שלושת הטוסוחים הן בצדדים המטופלים והן בצדדים שאינם מטופלים. ולהשתמש במקלפים כדי לקלף כמה שיותר של הרקמה הרכה ככל האפשר, משאיר בעיקר עצם ושיניים על הדגימות. יש לשטוף את הרקמה לזמן קצר ב-PBS.
לפני קיבעון בארבעה אחוזים paraformaldehyde במשך 24 עד 48 שעות. ואז לשטוף את הדגימות שלוש פעמים PBS טרי. עבור טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת, או ניתוח מיקרו-CT מקם את הרקמות שנקטפו בצינור בקוטר 12 מ"מ המכיל 1.5 מיליליטר של PBS על במת הסורק.
עם הדגימות מכוונות כך משטחים buccal או לשוני של השן ואת השורש שכב במקביל לתחתית הצינור. השתמש בספוג כדי להפריד את הדגימות. ולכסות את החלק העליון של הצינור עם סרט גמיש.
בחר את קובץ הבקרה והגדר את האנרגיה ל- 70 קילו-וולט, את העוצמה ל- 114 מיקרו אמפר ואת הרזולוציה לגודל Voxel עם קוביות של שישה מיקרומטר. לחץ על תצוגת צופים. כאשר התמונה מופיעה, לחץ על קו הפניה וסמן את אזור הדוגמאות לסריקה, תוך לחיצה על הוסף סריקה לאחר כל דגימה.
לאחר שסומנו כל הדוגמאות, עבור אל רשימת המשימות ובחר התחל משימות אינטראקציה. לקווי המתאר של פרוסות המיקרו-CT, בחרו את הפרוסה המייצגת את האמצע המשוער של השן, שבו נמצאים עיסת קורונאל, עיסת ראדיקולר של שתי התעלות, ושני האפורים האפורים. לחץ על לוח קווי המתאר, ומתחיל מנקודת הדיסטלית של שאפקס השורש הדיסטלי, סמן את הגבול האפילמי עד לאזור הקוף הרדיאלי פאק, דרך הגבול המחיק של שאפקס השורש הקסיאלי, בעקבות הגבול הדיסטלי של השורש הקסיאלי, ואת הגבול הקסיאלי של השורש הדיסטלי, דרך אזור הזעם.
העתיקו והדביקו את קווי המתאר המתקבלים, והתאיימו את קווי המתאר בהתאם לחמש פרוסות המוצבות משני צדי הפרוסה האמצעית. כדי לחשב את נפח הרקמה של קווי המתאר המסומנים עבור כל דגימה, תחת הערכת מיקרו-CT, בחר משימה ולחץ על הערכת תלת-מימד. לאחר מכן, בחלון של הערכת תלת-מימד, לחץ על בחר ובחר מסנן לחישוב עוצמת הקול של הרקמה.
בסוף ניתוח מיקרו-CT, להעביר את הרקמות מהסורק לצינור מיקרו צנטריפוגה המכיל מיליליטר אחד של EDTA במשך 10 ימים. בסוף המ decalcification, למקם את הדגימות לתוך קלטות היסטולוגיות המכילות הגדלת ריכוזי אתנול, במשך שעה אחת לכל ריכוז. לאחר טבילת האתנול השנייה, מעבירים את הדגימות לקסילן לטבילה של שעתיים, לפני שמעבירים את הקלטות לפרפין נוזלי של 60 מעלות צלזיוס במכסה המנוע הכימי בן לילה כדי לאפשר לקצילן להתאדות.
למחרת בבוקר, מניחים את הדגימות המיובשים עם הכתר והשורשים המכוונים במקביל לתחתית התבנית, במכונת חסימה היסטולוגית כדי להטמיע את הדגימות בפרפין. כדי להשיג חלקים, לאבטח את דגימת בלוק פרפין על בלוק חיתוך מיקרוטון, לקצץ את המדגם עד רקמת העניין הוא הגיע. כאשר כל חלק של השן גלוי, להתחיל להשיג שישה חלקים עבים מיקרומטר, התאמת זווית החיתוך עד קטעי קשת הכוללים עיסת coronal ו radicular ואת foramen apical מתקבלים.
כאן מוצגת התמדה מטופלת שלמה. הגדלה של הסחבת הימנית הראשונה המטופלת, מאפשרת התבוננות בחשיפה של קרני עיסת המזיאליות והדיסטליות והכניסה לתעלות. הדמיית מיקרו-CT מאפשרת הדמיה של החשיפה לעיסה ה mesial, ואת האזורים רדיולנציאליים mesial ו דיסטלי של resorbtion העצם.
ואכן, שינוי משמעותי של עצם פריאפית של נפח הרקמה נמדד בשיניים המטופלות, בהשוואה לפקדים. ניתוח היסטולוגי מציין כי בשן המטופלת, עיסת השיניים עצמה מציגה נמק, אשר ניתן לראות בבירור לאחר כתמי H ו- E בהשוואה לשליטה רקמת עיסת מאורגן. בנוסף, וחשוב מכך, באזור ההפיזי של השן המטופלת, נצפה הנגע האפורי המורכב מתאים חיסוניים, הנעדר בשני הבקרה.
זה חיוני כדי למקם את העכבר כראוי במהלך החשיפה עיסת כמו מיקום נכון מאפשר גישה טובה לפה של החיה ותוצאות אופטימליות. שיטות נוספות של ניתוח דלקת פריאפית כגון כתמי רקמות אימונוהיסטוכימיים ופקס וניתוח מולקולרי מפורט של התאים ניתן לבצע בעקבות פרוטוקול זה. פרוטוקול זה הוא משמעותי, לא רק למחקר שיניים, אלא גם למחקר אימונולוגי, כפי שהוא מספק מודל לדלקת מקומית המושרה עם שליטה פנימית מובנית.
