يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال التسبب بالبكتيريا حول ما إذا كانت البكتيريا المنقولة بالدم يمكن أن تعبر حاجز الدم في الدماغ لتصيب الجهاز العصبي المركزي والدماغ. مع هذه التقنية، يمكن تحديد الأرقام البكتيرية داخل أنسجة الدم والدماغ للحيوانات المصابة مع استبعاد عدد البكتيريا المقيمة داخل الأوعية الدموية في الدماغ. إثبات الإجراء سيكون باللاب غوش، باحث مشارك من مختبري.
في 72 ساعة بعد العدوى، تعيين نظام ضخ الآلي لمعدل تدفق أربعة ملليلتر من برنامج تلفزيوني تكملها 10 ملليمولار من EDTA في الدقيقة الواحدة. ووضع الحيوان القتل الرحيم في موقف supine في مقلاة تشريح. تأكيد القتل الرحيم من عدم الاستجابة لقرصة مخلب.
وبلّل البطن بنسبة 75٪ من الإيثانول. استخدام مقص لجعل شق جدار البطن إلى أسفل القفص الصدري لفضح الحجاب الحاجز والأعضاء الحشوية. وقطع الحجاب الحاجز لفتح تجويف الصدر.
قطع قفص فرك ثنائيا لفضح البطين الأيسر واستخدام ملقط لفهم بلطف القلب. أدخل إبرة فراشة قياس 21 قياسا متصلة بنظام القذف في البطين الأيسر وقطع بعناية الأذين الأيمن لجمع حوالي 200 ميكرولتر من الدم في أنبوب مليلتر يحتوي على 10 ملليمولار EDTA لمنع التخثر. ثم اثقب الحيوان لمدة أربع دقائق مع 15 إلى 20 ملليلتر من PBS بالإضافة إلى EDTA.
بعد التسريب الكامل ، سيظهر الدماغ والكبد مبيضًا لضمان أن البكتيريا المتبقية هي من الأعضاء التي تم حصادها وليس من الدم المتداول. بعد التسريب، ونقل بعناية الأجهزة ذات الأهمية إلى الفردية العقيمة، 15 ملليلتر أنابيب المخروطية التي تحتوي على خمسة ملليلتر من معقم أربع درجات مئوية PBS لكل أنبوب. لحصاد الدماغ بعد قطع الرأس، استخدم المقص لقطع جلد فروة الرأس أسفل خط الوسط بين العينين، مع الاحتفاظ بالنصائح التي تم الضغط عليها ضد الجمجمة لتقليم أي أنسجة زائدة حسب الضرورة.
أدخل بلطف طرف واحد من المقص في ماغنوم السفح وقطعه بشكل جانبي في الجمجمة على كلا الجانبين. قطع الجمجمة بعناية بين العينين أسفل خط الوسط في الجمجمة، مع الحرص على تطبيق الضغط الجانبي وتجنب الانزعاج في الدماغ. باستخدام ملقط، وفتح الجمجمة لفضح الدماغ ووضع ملعقة بين الجانب السفلي من الدماغ وقاعدة الجمجمة لنقل الدماغ بعناية إلى أنبوب 15 ملليلتر تحتوي على خمسة ملليلتر من أربع درجات مئوية برنامج تلفزيوني.
في مجلس الوزراء السلامة الأحيائية، إدراج تلميح وتشغيل التجانس الأنسجة لمدة 10 ثانية في 5٪ تبييض متتابعة، والمياه المعقمة، 75٪ الإيثانول، وحلول المياه المعقمة في أنابيب مخروطية 15 ملليلتر منفصلة. عندما تم تعقيم الطرف بشكل دقيق ، التجانس الدماغ المصاب في أنبوب لها. عندما لا تبقى أي شظايا الأنسجة مرئية، إعادة تعقيم طرف لمنع الحمل البكتيري إلى عينة الجهاز المقبل، وتجانس الجهاز التالي.
عندما تم تجانس جميع الأعضاء ، وإعداد 10 أضعاف التخفيفات المسلسلة لكل جهاز تجانس في برنامج تلفزيوني عقيم وطبقة التخفيف على الدماغ القلب ضخ لوحات أجار. ثم احتضان ثقافات التخفيف المتجانسة عند 37 درجة مئوية بين عشية وضحاها، وحص عدد المستعمرات على كل صفيحة لتحديد العدد الإجمالي للبكتيريا لكل عضو أو ملليلتر من الدم. حساب الأعباء البكتيرية في أجهزة الماوس المصابة L.monocytogenes كما هو موضح للتو يشير إلى أن الضخ بعد العدوى لا يغير بشكل كبير من العبء البكتيري في الدم أو أعضاء الفئران المصابة التي تم فحصها في هذه الدراسة التمثيلية.
بعد هذا الإجراء، يمكن معالجة الأجهزة المصابة بـ Listeria monocytogenes لإجراء تحليل إضافي مثل المعالجة الهدولوجية للإجابة على أسئلة إضافية حول تسلل الخلايا الالتهابية إلى أجهزة الماوس المصابة مقارنة بالحيوانات غير المصابة. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن نتذكر تجنب الانزعاج في الدماغ والحفاظ على الحد الأدنى من الاتصال بين المقص وأنسجة الدماغ.
