李斯特菌脑部感染

该方法有助于回答细菌发病机制领域有关血液传播细菌能否跨越血脑屏障感染中枢神经系统和大脑的关键问题。通过这项技术，可以确定受感染动物的血液和脑组织内的细菌数量，同时排除大脑血管内的细菌数量。证明这个程序将是帕拉布·戈什，一个来自我实验室的副研究员。

感染后72小时，将自动灌注系统设置为4毫升PBS的流量，并辅以每分钟10毫升EDTA。将安乐死动物放在解剖锅的超级位置。确认安乐死缺乏对爪子捏的反应。

用75%乙醇淋湿腹部。使用剪刀将腹壁切口切到肋骨笼下方，以暴露隔膜和内脏器官。切开隔膜打开胸腔。

双边切割摩擦笼以暴露左心室，并使用钳子轻轻抓住心脏。将连接到灌注系统的 21 粒蝴蝶针插入左心室，并小心地切割右心房，将约 200 微升血液收集到含有 10 毫摩尔 EDTA 的两毫升管中，以防止凝固。然后用 15 到 20 毫升的 PBS 加 EDTA 将动物淋长 4 分钟。

完全灌注后，大脑和肝脏会出现发白，确保剩余的细菌来自收获的器官，而不是循环的血液。灌注后，小心地将感兴趣的器官转移到单个无菌的15毫升锥形管中，每管含有5毫升的无菌4摄氏度PBS。要收获斩首后的大脑，用剪刀将头皮皮肤切下眼睛之间的中线，保持尖端压在头骨上，以修剪任何多余的组织，必要时。

轻轻地将剪刀尖插入前人大玉中，横向切成两侧的头骨。小心地将头骨切下头骨中线，注意施加横向压力，避免大脑扰动。用钳子打开头骨，露出大脑，在大脑底部和头骨底部之间放置一个铲子，小心地将大脑转移到一个15毫升的管子中，管内含有5毫升4摄氏度的PBS。

在生物安全柜中，插入尖端，在单独的 15 毫升锥形管中连续运行 5% 漂白剂、无菌水、75% 乙醇和无菌水溶液，运行组织均质器 10 秒。当尖端被彻底消毒后，在其管中使受感染的大脑均质化。当没有可见的组织碎片时，重新消毒尖端，以防止细菌携带到下一个器官样本，并同化下一个器官。

当所有器官均质化时，在无菌PBS中准备每个器官均质的10倍序列稀释，并盘灌脑心输液加糖板上的稀释。然后在37摄氏度下孵育同质稀释培养物，并计算每个牌盘上的菌落数量，以确定每个器官或毫升血液的细菌总数。对受L.单细胞基因感染的小鼠器官的细菌负担的计算表明，感染后灌注不会显著改变受感染小鼠血液或器官的细菌负担，而这一代表性研究对此进行了检查。

按照这个程序，李斯特菌单细胞基因感染的器官可以进一步处理，以进行额外的分析，如组织病理学处理，以回答有关炎症细胞渗透到受感染的小鼠器官与未受感染的对照动物相比的其他问题。在尝试此程序时，重要的是要记住避免大脑的扰动，并保持剪刀和脑组织之间的最小接触。