ליסטריה דלקת של המוח

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום הפתוגנזה החיידקית על האם חיידקים המועברים בדם יכולים לחצות את מחסום הדם - מוח כדי להדביק את מערכת העצבים המרכזית ואת המוח. עם טכניקה זו, ניתן לקבוע מספרי חיידקים בתוך רקמת הדם והמוח של בעלי חיים נגועים תוך אי הכללת מספר החיידקים המתגוררים בתוך כלי הדם של המוח. הדגמת ההליך תהיה פאלאב גוש, עמית מחקר מהמעבדה שלי.

ב 72 שעות לאחר ההדבקה, להגדיר מערכת חיסון אוטומטית לקצב זרימה של ארבעה מיליליטר של PBS בתוספת 10 מילימולר של EDTA לדקה. וממקמים את החיה המתת חיטוי בתוואי סופין במחבת ניתוח. אשר המתת יתד על ידי חוסר תגובה לצביטת כפות רגליים.

ולהרטיב את הבטן עם 75% אתנול. השתמש מספריים כדי להפוך חתך דופן הבטן ממש מתחת לכלוב הצלעות כדי לחשוף את הסרעפת ואת האיברים הקרביים. וחותכים את הסרעפת כדי לפתוח את חלל בית החזה.

חותכים את כלוב לשפשף דו צדדית כדי לחשוף את החדר השמאלי ולהשתמש מדפים כדי לתפוס בעדינות את הלב. הכנס מחט פרפר 21-מד מחובר למערכת זלוף לתוך החדר השמאלי בזהירות לחתוך את האטריום הימני כדי לאסוף כ 200 microliters של דם לתוך צינור שני מיליליטר המכיל 10 מילימולאר EDTA כדי למנוע קרישה. ואז לבלבל את החיה במשך ארבע דקות עם 15 עד 20 מיליליטר של PBS בתוספת EDTA.

לאחר זיקוק מלא, המוח והכבד ייראו blanched להבטיח כי החיידקים הנותרים הם מן האיברים שנקטפו ולא את הדם במחזור. לאחר זיקוק, בזהירות להעביר את האיברים של עניין לתוך סטרילי בודדים, צינורות חרוט 15 מיליליטר המכיל חמישה מיליליטר של ארבע מעלות סטריליות צלזיוס PBS לכל צינור. כדי לקצור את המוח לאחר עריפת הראש, השתמש במספריים כדי לחתוך את עור הקרקפת לאורך קו האמצע בין העיניים, תוך שמירה על הטיפים לחוצים על הגולגולת כדי לקצץ כל רקמה עודפת לפי הצורך.

מכניסים בעדינות קצה אחד של המספריים לתוך מגנום foramen וחותכים באופן צדדי לתוך הגולגולת משני הצדדים. בזהירות לחתוך את הגולגולת בין העיניים לאורך קו האמצע בגולגולת, דואג להפעיל לחץ בצד כדי למנוע הפרעה של המוח. באמצעות ממטרות, לפתוח את הגולגולת כדי לחשוף את המוח ולמקם מרית בין החלק התחתון של המוח ואת הבסיס של הגולגולת כדי להעביר בזהירות את המוח לתוך צינור 15 מיליליטר המכיל חמישה מיליליטר של ארבע מעלות צלזיוס PBS.

בארון biosafety, להכניס את הקצה ולהפעיל homogenizer רקמה במשך 10 שניות ברצף 5%אקונומיקה, מים סטריליים, 75%אתנול, ופתרונות מים סטריליים נפרדים 15 מיליליטר צינורות חרוטיים. כאשר הקצה כבר מעוכל ביסודיות, הומוגניזציה המוח הנגוע בצינור שלה. כאשר לא נותרו שברי רקמה נראים לעין, יש לעקר מחדש את הקצה כדי למנוע נשיאת חיידקים לדגימה הבאה של האיבר, ולהומוגניזציה של האיבר הבא.

כאשר כל האיברים כבר homogenized, להכין 10-פי דילול סדרתי של כל איבר הומוגנית PBS סטרילי צלחת את הדילולים על המוח-לב עירוי אגר צלחות. ואז להדגיר את תרבויות דילול הומוגנית ב 37 מעלות צלזיוס לילה לספור את מספר המושבות על כל צלחת כדי לקבוע את המספר הכולל של חיידקים לכל איבר או מיליליטר של דם. חישוב הנטל החיידקי באברי עכבר נגועים L.monocytogenes כפי שהוכח רק עולה כי זיפוזה שלאחר זיהום אינו משנה באופן משמעותי את הנטל החיידקי בדם או באיברים של עכברים נגועים שנבדקו במחקר מייצג זה.

בעקבות הליך זה, ניתן לעבד איברים נגועים במונוציטוגנים של ליסטריה לניתוח נוסף כגון עיבוד היסטופתולוגי כדי לענות על שאלות נוספות על חדירת תאים דלקתיים לאברי עכבר נגועים בהשוואה לחיות בקרה לא נגועות. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור כדי למנוע הפרעה של המוח ולשמור על מגע מינימלי בין המספריים לבין רקמת המוח.