פרוטוקול זה הוא משמעותי כי זה יכול לשמש כדי ליצור xenografts שריר השלד האנושי, אשר ניתן להשתמש בהם כדי מודל מחלת שרירים ולבצע בדיקות טיפוליות פרה-קליניות. מודל קסנוגרפט זה מאפשר לחוקרים לחקור את השריר האנושי ב-vivo כדי להבין טוב יותר את הביולוגיה של תאי השריר האנושיים ולפתח מודלים חדשניים למחלות שרירים נדירות או נרכשות. לאחר קבלת ביופסיה של שריר אנושי, מניחים את הדגימה בצלחת פטרי 100 על 15 מילימטר המכילה מדיום שריר, ולהשתמש במיקרוסקופ סטריאו ומספריים כירורגיים כדי להסיר כל fascia שנותר או רקמת שומן.
לנתח את ביופסיית השריר לחתיכות של שבעה על שלושה על שלושה מילימטרים בקירוב, ולדאוג לכך שהסיבים מסודרים באורך בתוך הדגימה. לאחר מכן, מעבירים את צלחת פטרי המכילה את השריר המנותח על הקרח, ומניחים תפרים סינתטיים שאינם ניתנים לספיגה בצלחת פטרי 100 על 15 מ"מ של 70% אתנול. לאחר אישור חוסר תגובה לצביטת בוהן בעכבר NOD-Rag-gamma בן 8 עד 12 שבועות, הרדמה, להחיל משחה על העיניים של החיה immunodeficient, ולהשתמש גוזם כדי להסיר את השיער overlying את השוקית לפני הקרסול אל הברך.
לאחר מכן, להחיל קרם depilatory על העור החשוף במשך דקה אחת לפני חיטוי האתר הכירורגי עם פתרון povidone-יוד ו 70%אתנול. כדי להשתיל את הרקמה האנושית, תחילה קלטת במורד רגל העכבר, ולעשות חתך ישר על השוקיים לפני מקורו בגידים דיסטליים ו סיום מתחת לברך. השתמש בניתוח קהה כדי להפריד את העור מרקמת השריר, ולהשתמש במספריים כדי להפוך חתך פחות מ 0.5 מילימטר דרך האפימיסיום של השריר קדמי tibialis, החל הגיד וכלה בברך.
לאחר חיתוך הגיד הדיסטלי של השוקיים, לתפוס את הגיד עם מטליות איריס, ולמשוך את השריר כלפי מעלה לכיוון הברך. לאחר מכן, חותכים את הגיד הדיסטלי של לונגוס דיגיטטורום extensor, ולמשוך את לונגוס דיגיטציה extensor כלפי מעלה לכיוון הברך. לאחר הגיד הפרוקסימלי של שריר פרונוס longus גלוי, להסיר את longus דיגיטיקום extensor ואת השוקית לפני המספריים.
השתמש לנגב כירורגית רטוב עם PBS כדי להפעיל לחץ קל עד hemostasis מושגת, חוט תפר דרך גיד פרונוס לונגוס פרוקסימלי, משאיר חתיכת חוט כ 1.5 אינץ 'משני צדי הגיד. הפוך את המחצית הראשונה של קשר ריבוע כירורגי בשתי ידיים מבלי להדק כדי ליצור מעגל, ולה מניח xenograft לתוך המעגל, הידוק הלולאה כדי לאבטח את רקמת השתל. השלם את החצי השני של הקשר המרובע כדי לתפור את קסנוגרפט לגיד הפרוקסימלי של הפרונוס לונגוס, ולהחיל את התפר דרך גיד פרונוס לונגוס דיסטלי לחזור על טכניקת הקשר הריבועי בגיד דיסטלי.
כאשר שני הקצוות של השתל אובטחו, למשוך את העור מעל השריר xenografted, לאטום את החתך עם דבק כירורגי, ולמקם שניים עד שלושה סיכות כירורגיות על הדבק. לאחר מכן, מניחים את העכבר בכלוב נקי על כרית מחוממת עם ניטור עד חקירה מלאה. ארבעה עד שישה חודשים לאחר הניתוח, מניחים מכוסה המכילה 200 מיליליטר של 2-מתילבוטן בקופסת קרח יבש לפחות 30 דקות לפני קציר קסנוגרפט.
כאשר 2-מתילבוטן התקרר, לאשר חוסר תגובה קמצוץ בוהן, ולהסיר את השיער מעל השוקיים לפני הקרסול לברך עם גוזם קרם depilatory. התפרים המחזיקים את קסנוגרפט במקום יש לצפות דרך העור. אבטחו את הרגל עם סרט הדבקה, ולהשתמש במספריים ומטסות איריס כדי לפתוח את העור מעל קסנוגרפט עד ששני התפרים נחשפים.
השתמש אזמל לחתוך בין שנאת זרים ואת השוקה כדי לשחרר צד אחד של שנאת זרים לפני חיתוך בין שריר פרונוס longus ואת שריר gastrocnemius. חותכים מתחת לתפר הדיסטלי ודרך הגיד הדיסטלי של פרונוס לונגוס, ולהשתמש מטליות הקשתית כדי לתפוס ולהסיט את התפר לכיוון הברך תוך שימוש במספריים לחתוך את xenograft הרחק רקמת השריר הבסיסית. לאחר מכן, השתמש במספריים כדי לחתוך מעל התפר הפרוקסימלי כדי להסיר את xenograft ו peroneus longus, ולה מניחים את הדגימה שנקטפו על חתיכת קרטון קטנה.
הצמד את הרקמה קרוב ככל האפשר לתפרים תוך מתיחה עדין של השריר כדי להבטיח שכיוון הסיבים יישמר במהלך תהליך הקפאת ההצמדה. כאשר הפינים נמצאים במקום בצורה מאובטחת, להחליק את השריר במעלה הפינים כך הרקמה נשענת ממש מעל הקרטון, ו הצמד להקפיא את xenograft ב 2-מתילבוטאן מקורר מראש עבור אחסון מינוס 80 מעלות צלזיוס. קסנוגרפט מוצלח מדגים התחדשות חזקה של מיופייברים אנושיים כפי שזוהו עם נוגדנים ספציפיים לבני אדם.
כתמי מיוסין עובריים חיוביים בתוך חלק מהפיוביברים מצביעים על כך שתהליך ההתחדשות עדיין נמשך. לעומת זאת, טכניקה כירורגית לקויה או דגימה לקויה עלולה להוביל להתחדשות לקויה של סיבי השריר. Xenografts שבוצעו על ידי חולה שאובחן עם מיופתיה דלקתית אידיופטית להפגין מספרים מתונים של myofibers אנושיים מחדש ב אוספים ארבעה ושישה חודשים, וכתמים מיוסין עוברי נמשך שישה חודשים.
תאים דלקתיים נמצאים גם בתוך xenograft, כפי שנצפה על ידי כתמי H ו- E. מידות מיופייבר בודדות דומות בין ארבעה לשישה חודשים במיאופתיה דלקתית אידיופטית קסנוגרפטים. סיבים נדירים המציגים אזור חתך גדול מ-3,500 מיקרומטר בריבוע נצפו בתוך קסנוגרפטים אך לא בביופסיות מיופתיה דלקתיות אידיופתיות, מה שמצביע על כך שחלק מהפיופיברים בשנאת זרים יכולים להתחדש לאזור חתך רוחב הדומה בגודלו למיאופייברים בריאים.
החלקים החשובים ביותר של הליך זה הם זיהוי כל הגידים בקרסול לאחר החתך הראשוני נעשה בהצלחה חיתוך דרך האפימיסיום. ניתן להעריך את כשירותם התפקודית של הקסנוגרפטים על ידי בידוד אנזימטי של מיופייברים בודדים ובדיקת תמורות סידן או על ידי ביצוע מדידות כפויות מעוררות בעקבות גירוי חשמלי.
