يمكن للتنميط الجزيئي للخزعات السائلة من العين البشرية التقاط السوائل المخصبة محليا التي تحتوي على آلاف الجزيئات المختلفة من أنسجة العين عالية التخصص. فهي تسمح بالتوصيف الجزيئي لأمراض العين لدى البشر الأحياء وذات إمكانات إضافية لتحديد استراتيجيات تشخيصية وعلاجية جديدة. هنا قمنا بتطوير بروتوكول للجمع الموحد والبنوك الحيوية للخزعات المائية عالية الجودة والخزعات السائلة الزجاجية أثناء الجراحة داخل العين.
جزء من البروتوكول عبارة عن قاعدة بيانات متوافقة مع خصوصية البيانات على شبكة الإنترنت للتعليق على كل عينة على مدار عمرها واستخدام نظام إحداثيات يسمح بتتبع موقع كل عينة مشفرة في التخزين ، مما يتيح استرجاع العينات بكفاءة للتجارب النهائية مثل تحليل البروتين والجليكان والأيض. استخدم مجهر التشغيل لإجراء بزل الغرفة الأمامية بشكل عمودي على الطرف باستخدام إبرة قياس 30 إلى 32 متصلة بحقنة سعة مل واحد. يمكن استخدام طرف قطني لتثبيت العين أثناء هذا الإجراء.
تأكد من بقاء طرف الإبرة فوق القزحية المحيطية في منتصف الغرفة الأمامية لتجنب تلف الهياكل داخل العين. تحت التصور المباشر عبر المجهر ، قم باستنشاق ما يقرب من مائة ميكرولتر من الفكاهة المائية غير المخففة يدويا باستخدام حقنة سعة مل واحد. ثم تتم إزالة الإبرة بعناية من الغرفة الأمامية.
في العين البكي، ضع الإبرة فوق القزحية لتجنب لمس العدسة. الضغط الإيجابي على الكرة الأرضية يمكن أن يزيد من الارتجاع. يساعد تحرير طرف القطن قبل سحب الإبرة على تقليل الارتجاع.
اسحب السباك للخلف وشاهد كيف يتحرك الهواء والسائل الذي تم جمعه. حقن المحقنة في قارورة التبريد. الهواء الإضافي ينظف المساحة الميتة للحقنة.
هنا يمكنك رؤية الرمز الشريطي المحفور بشكل دائم على القارورة. ثم يتم استخدام الرمز الشريطي لمسح العينة ضوئيا إلى نموذج REDCap على جهاز كمبيوتر في غرفة العمليات. سيتم نقل قارورة التبريد على الفور على الثلج الجاف في صندوق التبريد.
يمكن الحصول على خزعات السائل الزجاجي في بداية استئصال الزجاجية بواسطة جراح الشبكية والجسم الزجاجي المدرب. لاحظ أن قاطع استئصال الزجاجية لن يتم تحضيره بالسوائل. في التجويف الزجاجي ، قم بتنشيط القاطع الزجاجي دون تسريب لجمع عينة زجاجية غير مخففة.
نضح يدويا 0.5 إلى مل واحد من الجسم الزجاجي باستخدام حقنة متصلة بقذف الجسم الزجاجي. ثم تتم معالجة العينة كما أوضحنا للحصول على عينة عضدية دقيقة. هذا الفيديو عبارة عن إرشادات تفصيلية لنموذج جمع عينة مكتمل في REDCap في عرض الاستطلاع.
بمجرد أن يكمل المريض الموافقة الإلكترونية بمساعدة منسق البحوث السريرية ، يتم ملء هذا النموذج. يمكن الوصول إليه على نفس الجهاز الذي تمت الموافقة عليه إلكترونيا ، أو يمكن الوصول إليه باستخدام أي جهاز آخر معتمد. يمكن الوصول إلى نسخة من الموافقة الإلكترونية التي تم إكمالها هنا للتحقق من التوقيعات.
ثم يملأ المنسق الأقسام الأخرى ذات الصلة بما في ذلك نوع الموافقة وفي هذا القسم الأزرق ، تفاصيل عن الحالة نفسها ، مثل جراح الحالة ، ومكان إجرائها ، وتاريخ الجمع ، وغيرها من المعلومات ذات الصلة. في قسم المريض الأخضر التالي ، لدينا التركيبة السكانية للمريض ، بما في ذلك عينة MRN ، والاسم الأول والأخير للمريض ، وجنسه ، وتاريخ ميلاده مع حساب تلقائي للعمر ، والجانب الجانبي للعين المصابة ، وفئة التشخيص. يتميز هذا النموذج بمنطق التفريعي، لذلك عند تحديد خانة اختيار، فإنها تؤثر على مظهر خانات الاختيار الموجودة أسفلها.
في هذه الحالة ، هذا هو الجزء الأمامي وحالة شبكية العين. لذلك أولا ، يتم ملء صندوق شبكية العين. اختار المنسق أن هذا ثقب بقعي وأن صندوق تشخيص الجزء الأمامي قد تم ملؤه أيضا.
في هذه الحالة ، يبدو أنه إعتام عدسة العين. يتم أيضا ملء نموذج محفوظات ما قبل العملية كمربع نص حر. هنا ، يمكن نسخ المعلومات من EMR ولصقها أو يمكن إدخال معلومات جديدة عن تاريخ ما قبل العملية للرجوع إليها في المستقبل.
بعد ذلك ، في هذا القسم الأحمر ، لدينا مربع الإجراء. في هذه الحالة ، يبدو أنه تم اختيار استئصال الزجاجية pars plana جنبا إلى جنب مع phaco IOL. يمكن إدخال أي شيء لم يتم ملؤه هنا في أي من خانات الاختيار هذه في نص حر باستخدام هذه المربعات الأخرى التي تتخللها في النموذج.
كما تم الانتهاء من التفاصيل ذات الصلة حول القضية نفسها. أخيرا ، في قسم الذهب هذا ، لدينا منطقة تجميع. تم إدخال اسم المنسق الذي يجمع العينة مع عدد أنابيب العينات المستخدمة هنا.
مرة أخرى ، باستخدام منطق التفريع ، يمكننا جمع أكبر عدد ممكن من العينات حسب الحاجة للحالة. في هذه الحالة ، تم جمع عينتين ، يشبه النواة الزجاجية وعينة سائل الغرفة الأمامية. تم مسح الرموز الشريطية لكل من هذه العينات هنا وتسجيلها في النموذج.
أخيرا ، هناك قسم ملاحظات جمع العينات حيث يمكن للمنسق كتابة التفاصيل ذات الصلة بما في ذلك أحجام وجودة السائل المسحوب. في قسم تحميل الملف النهائي هذا ، يمكن تحميل أي صور أو مقاطع فيديو أو وثائق ذات صلة في النموذج نفسه وربطها. أخيرا ، بمجرد اكتمال كل شيء ، يمكن للمنسق النقر فوق إرسال التالي ويتم حفظ النموذج مع تخزين جميع المعلومات ذات الصلة ، وربط العينة بنجاح بالمريض.
نقل العينات على الثلج الجاف من غرفة العمليات إلى المختبر. قم بتسجيل الدخول إلى REDCap على كمبيوتر المختبر. خذ إحدى العينات التي تم جمعها وامسح الرمز الشريطي ضوئيا في قاعدة البيانات.
الآن ، هناك حاجة إلى حاوية ثانية بها ثلج جاف ورف لقوارير التبريد. سيتم أيضا مسح الرمز الشريطي للحامل ضوئيا إلى قاعدة البيانات ويتم نقل العينات إلى الحامل. تتم إضافة موضع القوارير في الحامل إلى قاعدة البيانات ويتم حفظ الإدخال وإغلاقه.
ثم يتم نقل الرف مع القوارير على الثلج الجاف إلى الثلاجة لتخزينه عند 80 درجة مئوية تحت الصفر. يضاف الرف إلى موضع معين في الثلاجة باستخدام نظام إحداثيات. سيسمح هذا لاحقا باسترداد العينات بسهولة لتحليل المصب.
هذا الفيديو عبارة عن معاينة تفصيلية لنموذج تخزين العينة. هنا ، نرى سجل نظرة عامة على المريض. تشير هذه الدائرة الخضراء إلى أن نموذج إدخال جمع العينات قد اكتمل بالفعل.
تشير هذه الدائرة الفارغة إلى أنه يجب إكمال نموذج التخزين. يجب إكمال نموذج التخزين لكل عينة يتم جمعها أثناء مرحلة نموذج الدخول. سيؤدي النقر فوق هذه الدائرة إلى نقلنا إلى نموذج تخزين العينة الأول.
هنا يمكننا أن نرى أنه تم إنشاء PID وتم إخفاء MRN. لا يزال الوصول إلى هذه المعلومات متاحا ويمكن الوصول إليه باستخدام الصفحة السابقة بالنقر فوق الدائرة الخضراء في نموذج الدخول. هنا سيتم إنشاء لقطة عينة بمجرد اكتمال هذه الصفحة.
ضمن ملاحظات المجموعة ، نرى أنه تم استيراد المعلومات تلقائيا من نموذج الإدخال. بعد ذلك ، ضمن تاريخ أرشفة السجل ، يمكننا إدخال تاريخ إكمال هذا النموذج. تحت الرمز الشريطي لأنبوب العينة ، نقوم بمسح أو إعادة إدخال الرمز الشريطي للأنبوب الذي يتم أرشفته.
في الوقت الحقيقي ، يتم تحديث لقطة العينة هذه. في هذا القسم، يمكننا تحديد ما إذا كان يتم نقل عينة أم لا. هنا ندخل تلك المعلومات ذات الصلة.
من أجل هذا المثال ، سنشير إلى أن هذه عينة تذهب إلى التخزين الداخلي للمستودع الحيوي. تحت التحقق ، يمكن لمنسق البحث العودة والتحقق من اكتمال الموافقة الإلكترونية أو الموافقة الورقية بنجاح وضمن البروتوكولات. يتم إدخال اسم الشخص الذي يكمل هذا التحقق وباستخدام هذه القائمة المنسدلة ، يطابق المدقق الرمز الشريطي هنا مع ما تم كتابته للتو.
هذا يضمن الدقة. بعد ذلك، في مرحلة الموقع هذه، نرى الفريزر حيث ستخزن العينة. يمكننا الإشارة إلى الرف حيث سيتم تخزين العينة وكذلك تسجيل الرمز الشريطي للصندوق ، والذي يمكن مسحه ضوئيا أو كتابته.
يمكن أيضا كتابة ملصق مربع هنا ويمكن وضع الملصق على المربع لمزيد من المطابقة. ثم يتم تسجيل الموضعين حسب الصف والعمود. هذا يضمن أن كل رمز شريطي مرتبط بموضع داخل الصندوق يتم تسجيله لسهولة استرجاعها في المستقبل.
ضمن قسم الاستخدام هذا ، يمكننا إدخال اسم مشروعنا أو تحديد اسم من مربع منسدل. سجل حجم العينة. وهنا ، يتم ملء التاريخ والوقت بالإضافة إلى المستخدم الذي وصل إلى هذا النموذج آخر مرة تلقائيا لضمان سلسلة العهدة التي يمكن مراجعتها وتدقيقها حسب الحاجة.
يقوم الشخص الذي يقوم بأرشفة النموذج بإدخال اسمه هنا ويشير إلى أي ملاحظات ذات صلة هنا قد تكون متسقة مع ما يريد تسجيله في نموذج الإدخال هذا للتخزين. أخيرا ، هناك قسم آخر لتحميل ملف ، وبمجرد اكتمال كل هذا ، يمكن إكمال هذا النموذج وإرساله بالنقر فوق حفظ وإنهاء ، مما يعيدنا إلى نظرة عامة على المريض. لكل نموذج إضافي يجب إكماله ، لكل أنبوب يجب تخزينه ، يمكننا النقر فوق زر الجمع هذا للعودة إلى نموذج تخزين العينة وإنشاء سجل آخر.
توفر هذه النظرة العامة وصولا إلى نموذج الإدخال الذي تم إنشاؤه بالإضافة إلى أي نماذج تخزين لاحقة لسجل المريض هذا. بهذه الطريقة ، يمكن استردادها بسهولة ويمكن الوصول إليها من قبل أي شخص لديه وصول خلفي أو أذونات أخرى معينة داخل REDCap. يمكن إخضاع الخزعات السائلة التي تم جمعها لمجموعة متنوعة من التحليل الجزيئي بما في ذلك البروتينات والسكريات والأيض.
تتيح قاعدة بيانات REDCap استرجاع العينات بشكل بسيط وسريع ، على سبيل المثال ، من خلال البحث عن عينات من المرضى الذين يعانون من مرض معين. هذه حالة مريضة تبلغ من العمر 17 عاما كانت تعاني من نقص المناعة وظهرت عليها التهاب في الشبكية والعصب البصري. نظرا للقلق بشأن العدوى ، تم إجراء خزعة سائلة من الفكاهة المائية وإرسالها لتحليل الحمض النووي PCR.
كانت النتائج إيجابية ل CMV وسلبية ل HSV وداء المقوسات وكانت حاسمة للتمييز بين الأشكال المعدية وغير المعدية للالتهاب داخل العين واختيار العلاج المناسب. يتيح قياس الطيف الكتلي للكروماتوغرافيا السائلة إجراء تحليل غير متحيز وشبه كمي للبروتين. في خزعة سائلة من الجسم الزجاجي لمريض يخضع لاستئصال الزجاجية ، تمكنت التقنية من تحديد 484 بروتينا فريدا ، بما في ذلك مكمل C3 و opticin والكولاجين من النوع 2.
تم تحليل ثلاث خزعات سائلة زجاجية باستخدام محلل متعدد الإرسال glycoproteomics. كشف الفحص عن ملامح الجليكوزيل ل 500 بروتين بشري ، والتقاط مجموعة متنوعة من المسارات البيولوجية مثل التمثيل الغذائي ، والاستجابة المناعية ، والتصاق الخلايا ، وتنظيم الأكتين. قمنا أيضا بتحليل ملف الأيض للخزعات السائلة من الفكاهة المائية باستخدام شكل خاص من قياس الطيف الكتلي.
حددنا 292 مستقلبا مختلفا في ثلاث خزعات سائلة بشرية مائية. حدد تحليل المسار مجموعة متنوعة من المسارات الأيضية بما في ذلك استقلاب الأحماض الأمينية ودورة البول وتوليف الكارنيتين. في الختام ، أنشأ سير العمل لدينا واجهة عملية بين غرفة العمليات ومختبر الأبحاث تسمح بجمع عينات جراحية عالية الجودة وعالية الإنتاجية والتعليق عليها وتخزينها.
يمكن استخدام العينات للتحليل الجزيئي المصب بما في ذلك البروتينات والسكريات والدراسات الأيضية. يوفر بروتوكولنا أساسا قيما للبحوث الانتقالية المستقبلية.
