在微晶的X射线衍射实验中，标准样品制备使信号对噪声难以达到良好水平。该协议旨在以受控方式减少背景形成晶体的来源。使用冲压冷冻机器人和低温TEM网格为反复操纵微晶提供了一个强大的平台，减少了周围的液体体积，并提供了样品的快速光度化。
处理网格所需的灵巧性与传统晶体采集所需的灵巧性相似。另一个重要因素是使用结晶溶液确定初始印迹参数，这是减少样品使用的关键。首先，根据制造商的说明设置和冷却自动跳冰柜。
刚才使用，发光放电低温TEM网格25秒与15毫安电流和0.39毫巴压力，然后保持发光放电网格在覆盖的Petri菜。将样品室的相对湿度设置为 90%，将印迹时间设置为 5 秒。确保在印迹完成后，将跳水冰柜设置为自动将样品放入。
打开结晶井和储层的密封。快速添加两到五微升的储液溶液在晶体下降，以保持下降的体积。将储层溶液的 10 微升转移到 0.5 毫升管中供以后使用，并重新安装油井，以防止结晶滴干燥。
使用暴跌冷冻钳来拾取单个发光放电网格，并将网格加载到仪器中，碳侧朝向远离印迹臂。旋转握住网格的钳子，使碳侧面向印迹臂。使用 2.5 微升移液器将两个微升储层溶液应用于低温TEM 网格的非支撑侧。
将网格与碳侧对峙，远离印迹臂，小心地将储层液体涂抹到网格的碳膜支撑侧。启动印迹过程，观察从碳表面提取的液体，直到可见网格表面的弹出波。如果无法看到爆裂波，则在印迹臂从网格中收回之前，将印迹时间增加一到两秒。
将结晶板置于光显微镜下，并将目标放置在视野内。将新鲜的发光放电网格放在跳水冰柜中，并将储层液体涂抹到网格的非支撑侧，如前所示。旋转网格与碳膜支持侧面对样品端口的暴跌冰柜。
从结晶板上剥下临时密封件，使用设置在两个微升的移液器，反复轻轻吸气结晶滴。将两个吸气微晶体泥浆的微升到跳板冰柜中，并将所有样品涂抹到低温电格的碳侧。启动印迹并观察弹出波，然后立即启动暴跌冻结。
将网格从液态乙烷迅速转移到浸入液氮的网格盒中。在印迹并暴跌冻结网格后，通过重置跳槽冰柜从液态乙烷中收回暴跌的网格。将支撑网格的钳子从跳动的冰柜中取出，并将网格置于光显微镜下。
调整精细对焦并评估整个网格晶体的密度。在 SEM 中加载低温TEM网格后，对齐样品并打开电子束。首先以 45 倍的放大倍率评估整个网格并记录图像，然后增加放大倍数，以便更仔细地检查单个网格方块，直到清晰观察到单个晶体。
在网格周围移动并捕获静止图像，确保网格平整，碳支持膜基本完好无损。确保水晶周围有许多单晶，其周围有狭窄的紫外液体光环，碳支撑膜中可以看到孔孔。在观察和捕捉网格图像时，确保没有大面积的受病毒化液体，六边形冰或表面冰不会分散在网格中，晶体不会重叠，均匀分布在支撑膜上。
在大型泡沫脱瓦尔中，冷却样品盒中装载的 VMXm 样品支架所需的数量。在样品装载机的样品位置上方添加液氮。将装有微晶加载网格的网格盒快速转移到样品装载机上的网格盒凹槽中，并稍微拧开盖子，以保持盖子松动且可旋转。
将网格从网格盒中取出并旋转网格，将网格平放在示例支架上。将预冷却的圆环工具快速放在网格打开的网格上，并按下按钮以安装圆环。在样品支架上方约1.5厘米处添加液氮。
使用 VMXm 样品钳小心地将装载的样品支架抬起，并将其放回样品盒中。更换墨盒盖，确保墨盒顶部的销与盖子上的孔接合。低温TEM网格上准备的微晶扫描电子显微图显示最低背景散射。
网格没有多余的液体，在晶体周围观察到狭窄的液体光环。多面体晶体分别在团块中观察到。稍大一点的胰岛素晶体也显示出一些与世隔绝的晶体一起结块。
非常大的微晶也成功地安装在低温TEM网格上。碳支持膜上的孔清晰可见，表明有很强的印迹。由于微晶的印迹时间和浓度变化，许多样品需要进一步优化。
晶体过载的网格降低了印迹效率，多个格子被记录在单个衍射图像中。高粘性结晶解决方案的印迹时间短，可能导致样品过湿。对于粘度较低的结晶解决方案，短的印迹时间会导致网格一侧的微晶件被窃取。
最佳样品制备使利用 VMXm 的全部功能，以最高分辨率以高信号与噪声比率收集高质量的 X 射线衍射数据成为可能。确定结晶溶液的初始印迹是使用最小样品的关键。如果样本非常有限，请跳过密度评估。
归根结底，最好有一个稀释的样品。这些样品现已准备好在 VMXm 光束线、微晶电子衍射或聚焦离子束铣削之前进行 X 射线衍射实验。
