Wir möchten unsere Berater, Dr. Eva Marder erkennen. Diese Arbeit wurde vom National Institute of Health gewährt NS17813 zu Eva Marder und NS059255 zu AE T. unterstützt

Vor Beginn dieses Protokoll den Magen des Hummers muss vom Tier entfernt werden und wie in der Begleiter JoVE Artikel (Bierman &amp; Tobin, 2009) beschrieben. Die Mehrheit der unten beschriebenen Schritte sind unter einem Dissektionsmikroskop durchgeführt werden. Teil I-Isolierung der kommissuralen Ganglia <ol><li> Richten Sie die Schüssel, so dass das vordere Ende (von der Lippe) weg von Ihnen und dem hinteren Ende (durch den Pylorus) zu Ihnen. </li><li> Stellen Sie sicher, dass der Magen merken ist, dass er so flach wie möglich liegt auf dem Teller. <ol><li> Pin durch die Speiseröhre auf jeder Seite der Lippe. </li><li> Falls erforderlich, ordnen die anderen Stifte während die Brutto-Dissektion platziert. </li></ol></li><li> Entfernen Sie die Unterhaut. <ol><li> Besorgen Sie sich die Unterhaut in der Nähe des gm2/gm3 Muskeln, lösen sie aus dieser Muskeln und sanft in die Richtung nach vorne zu ziehen. </li><li> Separate der Unterhaut von der darunter liegenden Fett durch Schnippeln keine Verbindungen. Verwenden Sie erhöhte Sorgfalt um die zentrale Arterie, die ein wichtiger Bestandteil der stomatogastrischen Nervensystem umgibt. Verlassen Sie die Unterhaut intakt innerhalb von etwa einer 0,5 cm Radius des stomatogastrischen Ganglion, das zwischen den GM1b Muskeln sitzt. </li><li> Cut off getrennt Unterhaut. </li></ol></li><li> Trennen Sie das Gehirn aus dem darunter liegenden Gewebe. <ol><li> Identifizieren Sie die zwei großen kommissuralen Nerven, die bilateral-Projekt aus dem vorderen Teil des Gehirns, die kommissuralen Ganglien in den vorderen Teil des Magens. </li><li> Sieht man von diesen Nerven intakt, heben das Gehirn mit einer Pinzette und geschnitten, um das Gehirn vom Rest des Gewebes zu trennen. Achten Sie darauf, wie Sie dies tun, wie die stomatogastrischen Nerv unterhalb des Gehirns ist und muss beibehalten werden. </li></ol></li><li> Trennen Sie die kommissuralen Ganglien aus den umliegenden Gewebe. <ol><li> Folgen Sie einem der kommissuralen Nerven zu einem der kommissuralen Ganglien. </li><li> Identifizieren Sie die Ionen und Sohn - diese Nerven müssen intakt bleiben. Die kommissuralen Ganglion haben viele Nerven ausstrahlen. Cut die meisten von ihnen (mit Ausnahme der Ionen und Sohn), aber lassen Sie einen zusätzlichen Nerven an der kommissuralen Ganglion in Position zu halten, während Sie die Dissektion zu beenden. </li><li> Wiederholen Sie mit den anderen kommissuralen Ganglion. </li></ol></li><li> Reinigen Sie die Ionen und Sohn von lateral nach medial. Verlassen Sie die labiale Nerv intakt auf das Nervensystem, den Magen zu verankern. Die Schlundganglion sitzt wurden die Ionen s schneiden. Sie können unter ihm durch Greifen der unteren Herzkammer Nerven und zog bis unter frei geschnitten. </li></ol> Teil II-Isolierung der stomatogastrischen Ganglion (STG) und die verbleibenden Nerven. <ol start="7"><li> Trennen Sie die STG aus den umliegenden Gewebe. <ol><li> Die STG sitzt in einer Arterie, die zwischen den GM1b Muskeln und bis in die gm2a, b Muskeln führt. Achten Sie auf das abgeschnittene Ende der Arterie in der Nähe des gm2a, b Muskeln. </li><li> Ziehen Sie das abgeschnittene Ende der Arterie und nach vorne, um die dvn aussetzen. Weiter nach oben ziehen, bis Sie das Niveau der übrigen Hypodermis zu erreichen. Einmal getrennt, kann die Arterie auf die Ebene, wo es auf die restlichen Unterhaut getrimmt werden. </li><li> Schneiden Sie die Muskellappen, dass in der Tribüne des Hummers befand. </li><li> Heben Sie die Unterhaut oberhalb der Arterie, die Beobachtung, dass die Arterie einen Tunnel in das Fett über dem STG macht. Legen Sie ein Blatt von der Schere im Inneren der Arterie und schneiden den Muskel darüber. Überprüfen Sie, dass Sie die dvn sehen, wie Sie sicher sein, Sie werden sicher über dem STG geschnitten. Weiter Schnitt nach vorne, nach der Arterie. Wie Sie oben im STG geschnitten, werden Sie sehen können, die stn ausgehen anterior von der STG und Abtauchen in den Muskel. Weiter Schneiden nach vorne eine vollständige Trennung des Muskels oberhalb des STG. </li><li> Löschen Sie alle Gewebe entfernt von der stn. </li></ol></li><li> Trennen Sie die agn s aus dem umgebenden Gewebe. (Auch wenn Sie nicht vorhaben, von der agn aufnehmen, werden Sie ein Teil des intakten Nerven müssen festzunageln das Ganglion für die intrazelluläre Aufnahme.) <ol><li> Um besser zu sehen, die agn s, entfernen Sie die restlichen Unterhaut und eine dünne Schicht der darunter liegenden Muskeln. </li><li> Unmittelbar hinter der STG, identifizieren einen dunklen Tunnel in der Fett-und Muskelgewebe auf beiden Seiten des dvn. </li><li> Stick eine Schere Klinge im Inneren des Tunnels und schneiden das Gewebe über dem Nerv. Weiter Schnitt seitlich, im Anschluss an die Nerven, um es zu isolieren. (Ein paar Millimeter ist ausreichend für Pinning das Ganglion, sondern entlarven mindestens 5 mm von der agn, wenn Sie von ihm aufnehmen möchten.) </li><li> Lösen Sie die agn aus dem Muskel es innerviert, indem die Verbindungen. </li><li> Wiederholen Sie auf der anderen Seite auf die andere agn isolieren. </li><li> Sobald beide agn s haben seziert worden, schneiden alle Muskeln und Gewebe verbindet die STG in den Magen. </li></ol></li><li> Isolieren Sie die mvn s. Sie sind ein bilaterales Paar kleiner Nerven abzweigen der LVN und Verfahrgeschwindigkeit seitlich unterhalb des Fettes. <ol><li> Entweder mit einer Schere oder zwei Zangen durch das Fett auf der einen Seite des dvn geschnitten, in der Nähe, wo es Filialen in den beiden lvn s. Hier sind Sie weit entfernt von der mvn s und wird es nicht riskieren, schneidet sie. </li><li> Heben Sie die Fettschicht, und identifizieren Sie die kleinen mvn darunter. Diese Nerven laufen medial nach lateral direkt hinter dem Niveau des GM1b Muskeln. </li><li> Entfernen Sie die Fettschicht über den mvn, so dass der Nerv intakt jetzt so wird es nicht verheddert. Sie werden ihre seitlichen Ende aus dem Off den Magen Schnitt am Ende der Präparation. </li><li> Wiederholen Sie den Vorgang auf der anderen Seite auf die andere mvn isolieren. </li></ol></li><li> Isolieren Sie die lvn s und hinteren Nerven. <ol><li> Ab wo die lvn s Filiale seitlich vom dvn, folgen einem lvn indem das Fett darüber. Abhängig von der Vorbereitung, manchmal die ganze Fettschicht über dem Nerv kann abgezogen werden. </li><li> Weiter enthüllt die lvn bis zu dem Punkt, wo die psn abzweigt. </li></ol></li><li> Isolieren Sie die PYN. <ol><li> Suchen Sie die PYN, es ist ein Nerv reist nach hinten über den Pylorus. </li><li> Entfernen Sie die dünne Membran, die dieser Region. </li><li> Isolieren Sie die PYN, indem ein kleiner Teil des Pylorus, an der PYN. </li><li> Heben Sie den Pylorus Abschnitt und schneiden das Gewebe auf beiden Seiten des PYN, bis Sie den Zweig, der pdn legt zu erreichen. </li></ol></li><li> Isolieren Sie die PDN. <ol><li> Suchen Sie die pdn, es ist ein Nerv reist nach hinten, um den Pylorus Dilatator Muskel. </li><li> Schneiden Sie einen kleinen Ausschnitt des Pylorus Dilatator Muskel, an der pdn. </li><li> Heben Sie den Pylorus Dilatator Muskel Abschnitt weggeschnitten das Gewebe auf beiden Seiten des pdn, bis Sie den Zweig, der PYN legt zu erreichen. </li></ol></li><li> Isolieren Sie die ventralen lvn, dass die PYN und pdn verbindet sich mit dem LVN. <ol><li> Auf der dreieckigen Filiale Punkt, wo die PYN und pdn der ventralen lvn verbinden, isolieren, jeder kleine Abschnitt der Nerv, zweigt der ventralen lvn, wie die vpln. Dies wird als Griff verwendet werden, um auf der Bauchseite lvn ziehen. </li><li> Heben Sie den Griff und schneiden das Gewebe auf beiden Seiten des ventralen lvn, arbeiten in der Richtung nach vorne, bis Sie den Punkt erreichen, wo die psn abzweigt. </li></ol></li><li> Wiederholen Sie die Schritte 10 bis 13 des LVN und hinteren Nerven auf der anderen Seite zu isolieren. </li><li> Lösen Sie die stomatogastrischen Nervensystem aus dem Magen. <ol><li> Um vollständig zu lösen die lvn aus dem Bauch, auf dem PSN zu ziehen und schneiden Sie alle Gewebe und Nerven an der LVN und ventralen LVN, mit Ausnahme der pdn und PYN. Wiederholen Sie diesen Vorgang auf der anderen Seite. </li><li> Schneiden Sie die seitlichen Ende jeder mvn. Heben Sie die seitlichen Ende und schneiden alle überflüssigen Anlagen zwischen den Nerv und die zugrunde liegenden Magengewebe. </li><li> Am vorderen Ende, schneiden alle überflüssigen Anlagen der kommissuralen Ganglien, und schneiden Sie die labiale Nerven auf jeder Seite. </li><li> Optisch scannen stomatogastrischen Nervensystem System zur Identifizierung und dann schneiden Sie keine zusätzlichen Anhänge in den Magen Gewebe. </li><li> Schnappen Sie auf das vordere Ende der beiden kommissuralen Nerven, über dem kommissuralen Ganglien, und ziehen Sie die stomatogastrischen Nervensystem aus dem Magen und verschieben Sie es auf der Seite der Schale. Wie Sie dies tun, schneiden alle verbleibenden Anlagen für das Nervensystem frei. </li></ol></li><li> Bereiten Sie die kleinen Sylgard Gericht. <ol><li> Rub einige Magengewebe gründlich auf die Oberfläche des Sylgard in die kleine Schale. Dadurch verringert sich die Hydrophobie der Sylgard, so dass Kochsalzlösung wird gleichmäßig verteilt über das Gericht. </li><li> Spülen und füllen Sie die Sylgard Gericht mit gekühlter Kochsalzlösung. </li></ol></li><li> Übertragen des Nervensystems auf die vorbereitete Sylgard Gericht durch Ergreifen des vorderen Enden der beiden kommissuralen Nerven, die Aufhebung des Nervensystems aus der großen Schüssel und legte es in die kleine Schale. </li><li> Pin der Tln in die kleine Schale mit einer Kombination aus minuten Stifte und dünner Stifte aus Wolframdraht geschnitten. <ol><li> Stellen Sie sicher, dass die Vorbereitung Dorsalseite wird durch die Überprüfung, dass die minderwertigen ventrikuläre Nerv ist weg von der Sylgard zeigt. </li><li> Entfernen Sie das Gehirn und die Pin kommissuralen Nerven. </li><li> Ziehen Sie das Nervensystem eng und flach, indem jeder der psn s hinten und seitlich und Pinning sie nieder. </li><li> Entfernen Sie den Pylorus Dilatator Muskel von der pdn s, und Pin die pdn s. </li><li> Entfernen Sie diePylorus Segment aus dem PYN s, und Pin die PYN s. </li><li> Pin, um alle verbleibenden isolierten Nerven wie die labiale Nerven, die mvn s und agn s. </li></ol></li><li> Desheath der STG. <ol><li> Sicherstellen, dass die STG ist gegen die Sylgard flach und straff gehalten durch den seitlichen agn s, der vorderen und der hinteren stn dvn. </li><li> Ordnen Sie die Beleuchtung, um die Visualisierung der Axone im dvn ermöglichen. </li><li> Mit einem kleinen Stift oder feinen Wolfram-Nadel, machen Sie einen kleinen flachen Loch in der Scheide um die dvn, unmittelbar hinter der STG. </li><li> Ziehen Sie die Nadel in der dvn, dorsal der Axone, um einen horizontalen Riss in der Nervenscheide zu schaffen. </li><li> Besorgen Sie sich die Klappe des Nervenscheide hinter der STG und ziehen nach vorne, um den Mantel von der Rückenseite des STG zu entfernen. </li></ol></li></ol><table border="1"><tbody><tr><td colspan="2"> Abkürzungen: </td></tr><tr><td> Tln </td><td> Stomatogastrischen Nervensystems </td></tr><tr><td> STG </td><td> Stomatogastrischen Ganglion </td></tr><tr><td> CoG </td><td> Kommissuralen Ganglion </td></tr><tr><td> stn </td><td> stomatogastrischen Nerven </td></tr><tr><td> mvn </td><td> medial ventrikuläre Nerven </td></tr><tr><td> Ion </td><td> inferior ösophagealen Nerven </td></tr><tr><td> Sohn </td><td> überlegen ösophagealen Nerven </td></tr><tr><td> agn </td><td> Magenvorderwand Nerven </td></tr><tr><td> dvn </td><td> dorsalen ventrikulären Nerven </td></tr><tr><td> lvn </td><td> lateralen Ventrikel Nerven </td></tr><tr><td> psn </td><td> hinteren Magen Nerven </td></tr><tr><td> vpln </td><td> ventralen hinteren seitlichen Nerven </td></tr><tr><td> PYN </td><td> Pylorus Nerven </td></tr><tr><td> pdn </td><td> Pylorus Dilatator Nerven </td></tr></tbody></table>

<ol>
	<li>Marder, E., Bucher, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+pattern+generators+and+the+control+of+rhythmic+movements.">Central pattern generators and the control of rhythmic movements.</a> Curr. Biol. 11, R986-R996 (2001).</li><li>Nusbaum, M. P., Beenhakker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+small-systems+approach+to+motor+pattern+generation.">A small-systems approach to motor pattern generation.</a> Nature. 417, 343-350 (2002).</li><li>Clemens, S., Massabuau, J. C., Legeay, A., Meyrand, P., Simmers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+modulation+of+interacting+central+pattern+generators+in+lobster+stomatogastric+ganglion:+influence+of+feeding+and+partial+pressure+of+oxygen.">In vivo modulation of interacting central pattern generators in lobster stomatogastric ganglion: influence of feeding and partial pressure of oxygen.</a> J. Neurosci. 18, 2788-2799 (1998).</li><li>Bierman, H. S., Tobin, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gross+dissection+of+the+stomach+of+the+lobster,+Homarus+americanus.">Gross dissection of the stomach of the lobster, Homarus americanus.</a> J Vis Exp. 27, (2009).</li><li>Maynard, D. M., Dando, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+stomatogastric+neuromuscular+system+in+Callinectes+sapidus,+Homarus+americanus+and+Panulirus+argus+(Decapoda+crustacean).">The structure of the stomatogastric neuromuscular system in Callinectes sapidus, Homarus americanus and Panulirus argus (Decapoda crustacean).</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 268, 161-220 (1974).</li><li>Herrick, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+history+of+the+American+lobster.">Natural history of the American lobster.</a> Bull. U.S. Bur. Fish. 29, 219-252 (1909).</li><li>Marder, E., Bucher, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+circuit+dynamics+using+the+stomatogastric+nervous+system+of+lobsters+and+crabs.">Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs.</a> Annu. Rev. Physiol. 69, 291-316 (2007).</li><li>Bucher, D., Taylor, A. L., Marder, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+pattern+generating+neurons+simultaneously+express+fast+and+slow+rhythmic+activities+in+the+stomatogastric+ganglion.">Central pattern generating neurons simultaneously express fast and slow rhythmic activities in the stomatogastric ganglion.</a> J. Neurophysiol. 95, 3617-3632 (2006).</li><li>Mizrahi, A., Dickinson, P. S., Kloppenburg, P., F&#233;nelon, V., Baro, D. J., Harris-Warrick, R. M., Meyrand, P., Simmers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+maintenance+of+channel+distribution+in+a+central+pattern+generator+neuron+by+neuromodulatory+inputs+revealed+by+decentralization+in+organ+culture.">Long-term maintenance of channel distribution in a central pattern generator neuron by neuromodulatory inputs revealed by decentralization in organ culture.</a> J. Neurosci. 21, 7331-7339 (2001).</li><li>Schulz, D. J., Goaillard, J. M., Marder, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variable+channel+expression+in+identified+single+and+electrically+coupled+neurons+in+different+animals.">Variable channel expression in identified single and electrically coupled neurons in different animals.</a> Nat. Neurosci. 9, 356-362 (2006).</li><li>Schulz, D. J., Goaillard, J. M., Marder, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+expression+profiling+of+identified+neurons+reveals+cell-specific+constraints+on+highly+variable+levels+of+gene+expression.">Quantitative expression profiling of identified neurons reveals cell-specific constraints on highly variable levels of gene expression.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104, 13187-13191 (2007).</li></ol>

Die Anatomie der Hummer Magen und Tln wurde auch zuvor 5,6, beschrieben und Variationen dieser Sektion Verfahren wurden in zahlreichen Studien eingesetzt worden. Wir empfehlen vertraut zu machen mit der Anatomie des Magen 5-7 und Tln 5,8 vor Beginn der Dissektion. Solche Vertrautheit verringert die Gefahr des zufälligen Schäden an Nerven und Gewebe. Zur Erhaltung der Gesundheit der Vorbereitung ist es wichtig, auf die Vorbereitung an einem kühlen Temperatur zu halten. Dies geschieht durch einfachen Austausch der Kochsalzlösung alle 30 Minuten mit 4 ˚ C Kochsalzlösung in einem Kühlschrank aufbewahrt erreicht. Wenn in kalter Kochsalzlösung eingetaucht ist das isolierte Tln Vorbereitung lebensfähig für viele Stunden. Recordings in Zusammenhang Homarus gammarus über stabile rhythmische Aktivität von der STG nachgewiesen ganzen 5 Tage in vitro 9; ähnlich Robustheit hat in H. gesehen worden americanus (pers. Beob.). Modulatorischer Eingang des STG vom kommissuralen Ganglien ist erforderlich, um den laufenden Motor Muster zu erhalten. Daher die Aufrechterhaltung eines normalen rhythmische Aktivität dieser Ganglien und das Ion, Sohn und stn Nerven müssen intakt gehalten werden. Die Dissektion beschreiben wir bewahrt mehreren motorischen Nerven (mit Motoneuronen Axone): Die agn s (mit Magen-Mill (GM) Axone), die mvn s (mit Lateral Gastric (LG) und Inferior Cardiac (IC) Axone), die PYN s (mit Pylorusstenose Neuron (PY) Axone), die pdn s (mit Pylorusstenose Dilatator (PD) Axone) und der lvn s (mit Lateral Pylorusstenose (LP), mediale Gastric (MG), LPG ​​Axone als auch solche von GM, PD und PY). Durch Sezieren zusätzliche (oder anders) Nerven, können andere Motoneuronen Axone aufgezeichnet werden. Jede einzelne Art der motorischen Neurons Axon können einzeln durch Sezieren und die Aufnahme von Nerven innervieren die Muskeln, auf die aufgezeichnet werden, die Art der Neuron-Projekte. Diese Vorbereitung kann für eine Vielzahl von Studien über die Funktion des Nervensystems fokussiert eingesetzt werden. Die Aktivität der Neuronen aufgezeichnet entweder mittels intrazellulärer, scharfe Elektrode Aufnahmen von Somata oder Axonen, oder durch die Aufnahme elektrischer Impulse extrazellulär von den Nerven sein. Viele Ionenkanäle in der STG Neuronen wurden teilweise kloniert und mRNA kann von Hand abgezogen Somata 10,11 gemessen werden.

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Fine Tungsten Wire (0.001 in. diameter)</td>
<td>Tool</td>
<td>California Fine Wire</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cut into 1-2mm pieces to use as fine pins.</td>
</tr>
<tr>
<td>Forceps #5</td>
<td>Tool</td>
<td>FST</td>
<td>91150-20</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Minuten Pins</td>
<td>Tool</td>
<td>FST</td>
<td>26002-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Moria Spring Scissors (7mm blades)</td>
<td>Tool</td>
<td>FST</td>
<td>15370-52</td>
<td>These are the top of the line. There are more economical spring scissors available from the same company.</td>
</tr>
<tr>
<td>Petri Dish (100x15mm)</td>
<td>Tool</td>
<td>Fischer</td>
<td>08-757-12</td>
<td>Fill 2-4mm with Sylgard 182.</td>
</tr>
<tr>
<td>Sylgard 182</td>
<td>Other</td>
<td>Dow Corning</td>
<td>182</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pin Holder</td>
<td>Tool</td>
<td>FST</td>
<td>26018-17</td>
<td>Optional. Desheathing can be done with scissors and fine forceps alone.</td>
</tr>
<tr>
<td>Super fine forceps #5SF</td>
<td>Tool</td>
<td>FST</td>
<td>11252-00</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tungsten Needles</td>
<td>Tool</td>
<td>FST</td>
<td>10130-05</td>
<td>Optional. Desheathing can be done with scissors or with pins cut from fine tungsten wire.</td>
</tr>
<tr>
<td>Dissection microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

homarus americanus stomatogastric nervous system dissection

Mit dem Ziel, das Verständnis, wie das Nervensystem Aktivität zu erzeugen und auf die Umwelt, wiederum Neurowissenschaftler zu modellieren, die die Aktivität von Interesse zeigen und zugänglich sind und zugänglich zu experimentellen Methoden. Die stomatogastrischen Nervensystems (Tln) der amerikanischen Hummer (<i&gt; Homarus americanus</i&gt;; Auch wusste, war, den Atlantik oder Hummer aus Maine) wurde als Modellsystem für die Untersuchung Rhythmus erzeugen Netzwerke und Neuromodulation von Netzwerken etabliert. Die Tln besteht aus 3 vorderen Ganglien (2 kommissuralen Ganglien und eine Ösophagus-Ganglion), mit modulatorische Neurone, die zentral Projekt zur stomatogastrischen Ganglion (STG). Die STG enthält etwa 30 Neuronen, die zwei zentrale Muster erzeugen Netzwerke umfassen, den Pylorus und Magen-Netzwerke, die Fressverhalten in Krebstieren unterliegen<sup&gt; 1,2</sup&gt;. Zwar ist es möglich, dieses System zu studieren<i&gt; In vivo</i<sup&gt; 3</sup&gt; Setzt die Tln seine rhythmische Aktivität erzeugen, wenn sie isoliert<i&gt; In-vitro-</i&gt;. Physikalische Trennung der Tln in einer Schüssel ermöglicht den einfachen Zugriff auf die Somata in den Ganglien für die intrazelluläre elektrophysiologischen Ableitungen und die Nerven des Tln für extrazelluläre Ableitungen. Isolieren der Tln ist ein zweistufiger Prozess. Der erste Teil, seziert den Magen des Tieres wird in einem begleitenden Video-Artikel beschrieben<sup&gt; 4</sup&gt;. In diesem Video-Artikel sind feine Dissektion Techniken verwendet, um die Tln aus dem Magen zu isolieren. Dieses Verfahren führt zu einem Nervensystem Vorbereitung, die für elektrophysiologische Ableitungen ist.

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Homarus Americanus Stomatogastric Nervous System Dissection

Wir beschreiben die feinen Sezierung des stomatogastrischen Nervensystem aus dem Magen des amerikanischen Hummer (<i&gt; Homarus americanus</i&gt;).

Homarus americanus stomatogastrischen Nervous System Dissection

With the goal of understanding how nervous systems produce activity and respond to the environment, neuroscientists turn to model systems that exhibit the ...

homarus-americanus-stomatogastric-nervous-system-dissection

Research

JoVE Journal

Biology

Homarus Americanus Stomatogastric Nervous System Dissection

11.1K Aufrufe.  Brandeis. Wir beschreiben die feinen Sezierung des stomatogastrischen Nervensystem aus dem Magen des amerikanischen Hummer ( Homarus americanus).

Serie: Homarus Americanus Stomatogastric Nervous System Dissection

Dissection of Drosophila Ovaries

Dissection von Drosophila Ovarien

Forschung

Biologie

Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster

The central nervous system (CNS) of Drosophila larvae is complex and poorly understood.  One way to investigate the CNS is to use immunohistochemistry to examine the expression of various novel and marker proteins.  Staining of whole larvae is impractical because the tough cuticle prevents antibodies from penetrating inside the body cavity.  In order to stain these tissues it is necessary to dissect the animal prior to fixing and staining.  In this article we demonstrate how to dissect Drosophila larvae without damaging the CNS.  Begin by tearing the larva in half with a pair of fine forceps, and then turn the cuticle "inside-out" to expose the CNS.  If the dissection is performed carefully the CNS will remain attached to the cuticle.  We usually keep the CNS attached to the cuticle throughout the fixation and staining steps, and only completely remove the CNS from the cuticle just prior to mounting the samples on glass slides.  We also show some representative images of a larval CNS stained with Eve, a transcription factor expressed in a subset of neurons in the CNS.  The article concludes with a discussion of some of the practical uses of this technique and the potential difficulties that may arise.

In this article we demonstrate how to dissect the central nervous system from third instar Drosophila larvae.

Dissection der Larven ZNS von Drosophila melanogaster

The central nervous system (CNS) of Drosophila larvae is complex and poorly understood.  One way to investigate the CNS is to use immunohistochemistry to ...

Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos

Analysis of gene expression patterns during early stages of mammalian embryonic development can provide important clues about gene function, cell-cell interaction and signaling mechanisms that guide embryonic patterning. However, dissection of the mouse embryo from the decidua shortly after implantation can be a challenging procedure, and detailed step-by-step documentation of this process is lacking.

Here we demonstrate how post-implantation (6.5 dpc) embryos are isolated by first dissecting the uterus of a pregnant mouse (detection of the vaginal plug was designated day 0.5 poist coitum) and subsequently dissecting the embryo from maternal decidua. The dissection of Reichert's membrane is described as well as the removal of the ectoplacental cone.

Isolation of postimplantation-stage embryos allows one to study gene patterning and analyze cell-lineage decision making processes during embryonic development, but proper dissection of the early embryo can be challenging. This protocol describes a method for isolating early primitive-streak-stage embryos (~6.5 days post coitum [dpc]).

Dissection von 6,5 dpc muriner Embryonen

Analysis of gene expression patterns during early stages of mammalian embryonic development can provide important clues about gene function, cell-cell ...

Isolation of Mononuclear Cells from the Central Nervous System of Rats with EAE

Whether studying an autoimmune disease directed to the central nervous system (CNS), such as experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE, 1), or the immune response to an infection of the CNS, such as poliomyelitis, Lyme neuroborreliosis, or neurosyphilis, it is often necessary to isolate the CNS-infiltrating immune cells.
In this video-protocol we demonstrate how to isolate mononuclear cells (MNCs) from the CNS of a rat with EAE. The first step of this procedure requires a cardiac perfusion of the rodent with a saline solution to ensure that no blood remains in the blood vessels irrigating the CNS. Any blood contamination will artificially increase the number of apparent CNS-infiltrating MNCs and may alter the apparent composition of the immune infiltrate. We then demonstrate how to remove the brain and spinal cord of the rat for subsequent dilaceration to prepare a single-cell suspension. This suspension is separated on a two-layer Percoll gradient to isolate the MNCs. After washing, these cells are then ready to undergo any required procedure. 
Mononuclear cells isolated using this procedure are viable and can be used for electrophysiology, flow cytometry (FACS), or biochemistry. If the technique is performed under sterile conditions (using sterile instruments in a tissue culture hood) the cells can also be grown in tissue culture medium. A given cell population can be further purified using either magnetic separation procedures or a FACS.

In this video we demonstrate how to isolate mononuclear cells from the central nervous system of rats with experimental autoimmune encephalomyelitis.

Isolierung von mononukleären Zellen aus dem zentralen Nervensystem von Ratten mit EAE

Whether studying an autoimmune disease directed to the central nervous system (CNS), such as experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE, 1), or the ...

Drosophila Larval NMJ Dissection

The Drosophila neuromuscular junction (NMJ) is an established model system used for the study of synaptic development and plasticity. The widespread use of the Drosophila motor system is due to its high accessibility. It can be analyzed with single-cell resolution. There are 30 muscles per hemisegment whose arrangement within the peripheral body wall are known. A total of 35 motor neurons attach to these muscles in a pattern that has high fidelity. Using molecular biology and genetics, one can create transgenic animals or mutants. Then, one can study the developmental consequences on the morphology and function of the NMJ. In order to access the NMJ for study, it is necessary to carefully dissect each larva. In this article we demonstrate how to properly dissect Drosophila larvae for study of the NMJ by removing all internal organs while leaving the body wall intact. This technique is suitable to prepare larvae for imaging, immunohistochemistry, or electrophysiology.

This protocol demonstrates how to dissect Drosophila larvae in preparation for immunohistochemistry and/or imaging of the neuromuscular junction.

Drosophila Larven NMJ Dissection

The Drosophila neuromuscular junction (NMJ) is an established model system used for the study of synaptic development and plasticity. The widespread use ...

Dissection of Saccharomyces Cerevisiae Asci

Yeast is a highly tractable model system that is used to study many different cellular processes. The common laboratory strain Saccharomyces cerevisiae exists in either a haploid or diploid state. The ability to combine alleles from two haploids and the ability to introduce modifications to the genome requires the production and dissection of asci. Asci production from haploid cells begins with the mating of two yeast haploid strains with compatible mating types to produce a diploid strain. This can be accomplished in a number of ways either on solid medium or in liquid. It is advantageous to select for the diploids in medium that selectively promotes their growth compared to either of the haploid strains. The diploids are then allowed to sporulate on nutrient-poor medium to form asci, a bundle of four haploid daughter cells resulting from meiotic reproduction of the diploid. A mixture of vegetative cells and asci is then treated with the enzyme zymolyase to digest away the membrane sac surrounding the ascospores of the asci. Using micromanipulation with a microneedle under a dissection microscope one can pick up individual asci and separate and relocate the four ascopores. Dissected asci are grown for several days and tested for the markers or alleles of interest by replica plating onto appropriate selective media.

Dissection of Saccharomyces Cerevisiae Asci

Micromanipulation of yeast cells is needed for meiotic genetic analysis or to select diploid zygotes. These micromanipulations are carried out using the microneedle of a dissection microscope. The microneedle is used to relocate cells and is controlled by a micromanipulator which are available with various degrees of automation.

Präparation Saccharomyces cerevisiae Asci

Yeast is a highly tractable model system that is used to study many different cellular processes. The common laboratory strain Saccharomyces cerevisiae ...

Cancer Borealis Stomatogastric Nervous System Dissection

The stomatogastric ganglion (STG) is an excellent model for studying cellular and network interactions because it contains a relatively small number of cells (approximately 25 in C. borealis) which are well characterized. The cells in the STG exhibit a broad range of outputs and are responsible for the motor actions of the stomach. The stomach contains the gastric mill which breaks down food with three internal teeth, and the pylorus which filters the food before it reaches the midgut. The STG produces two rhythmic outputs to control the gastric mill and pylorus known as central pattern generators (CPGs). Each cell in the STG can participate in one or both of these rhythms. These CPGs allow for the study of neuromodulation, homeostasis, cellular and network variability, network development, and network recovery.
The dissection of the stomatogastric nervous system (STNS) from the Jonah crab (Cancer borealis) is done in two parts; the gross and fine dissection. In the gross dissection the entire stomach is dissected from the crab. During the fine dissection the STNS is extracted from the stomach using a dissection microscope and micro-dissection tools (see figure 1). The STNS includes the STG, the oesophageal ganglion (OG), and the commissural ganglia (CoG) as well as the nerves that innervate the stomach muscles. Here, we show how to perform a complete dissection of the STNS in preparation for an electrophysiology experiment where the cells in the STG would be recorded from intracellularly and the peripheral nerves would be used for extracellular recordings. The proper technique for finding the desired nerves is shown as well as our technique of desheathing the ganglion to reveal the somata and neuropil.

Cancer Borealis Stomatogastric Nervous System Dissection

The stomatogastric nervous system (STNS) of the Jonah crab (C. borealis) can be used for electrophysiology, immunohistochemistry, and cell culture studies. The STNS extraction is done in two parts: the gross and fine dissection.

Cancer Borealis stomatogastrischen Nervous System Dissection

The stomatogastric ganglion (STG) is an excellent model for studying cellular and network interactions because it contains a relatively small number of ...

Gross Dissection of the Stomach of the Lobster, Homarus Americanus

The stomach of the American lobster (Homarus americanus) is located in the cephalothorax, between the rostrum and the cervical groove. The anterior end of the stomach is defined by the mouth opening and the posterior end by the bottom of the pylorus. Along the dorsal side of the stomach lies the stomatogastric nervous system (STNS). This nervous system, which contains rhythmic networks that underlie feeding behavior, is an established model system for studying rhythm generating networks and neuromodulation 1,2. While it is possible to study this system in vivo 3, the STNS continues to produce its rhythmic activity when isolated in vitro. In order to study this system in vitro the stomach must be removed from the animal. This video article describes how the stomach can be dissected from the American lobster. In an accompanying video article4 we demonstrate how the STNS can be isolated from the stomach.

Gross Dissection of the Stomach of the Lobster, Homarus Americanus

We describe the gross dissection of the stomach of the American lobster (Homarus americanus).

Gross Dissection der Magen der Lobster, Homarus americanus</em

The stomach of the American lobster (Homarus americanus) is located in the cephalothorax, between the rostrum and the cervical groove. The anterior end of ...

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

In Drosophila melanogaster, as in other insects, a waxy layer on the outer surface of the cuticle, composed primarily of hydrocarbon compounds, provides protection against desiccation and other environmental challenges. Several of these cuticular hydrocarbon (CHC) compounds also function as semiochemical signals, and as such mediate pheromonal communications between members of the same species, or in some instances between different species, and influence behavior. Specialized cells referred to as oenocytes are regarded as the primary site for CHC synthesis. However, relatively little is known regarding the involvement of the oenocytes in the regulation of the biosynthetic, transport, and deposition pathways contributing to CHC output. Given the significant role that CHCs play in several aspects of insect biology, including chemical communication, desiccation resistance, and immunity, it is important to gain a greater understanding of the molecular and genetic regulation of CHC production within these specialized cells. The adult oenocytes of D. melanogaster are located within the abdominal integument, and are metamerically arrayed in ribbon-like clusters radiating along the inner cuticular surface of each abdominal segment. In this video article we demonstrate a dissection technique used for the preparation of oenocytes from adult D. melanogaster. Specifically, we provide a detailed step-by-step demonstration of (1) how to fillet prepare an adult Drosophila abdomen, (2) how to identify the oenocytes and discern them from other tissues, and (3) how to remove intact oenocyte clusters from the abdominal integument. A brief experimental illustration of how this preparation can be used to examine the expression of genes involved in hydrocarbon synthesis is included. The dissected preparation demonstrated herein will allow for the detailed molecular and genetic analysis of oenocyte function in the adult fruit fly.

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

In insects, the oenocytes produce cuticular hydrocarbon compounds. These compounds protect against desiccation and facilitate chemical communication. Here we demonstrate a dissection technique used to isolate the oenocytes from adult Drosophila melanogaster, and illustrate how this preparation can be utilized to study genes involved in hydrocarbon synthesis.

Präparation Oenocytes von Adult Drosophila melanogaster</em

In Drosophila melanogaster, as in other insects, a waxy layer on the outer surface of the cuticle, composed primarily of hydrocarbon compounds, provides ...

Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries

Many organs depend on stem cells for their development during embryogenesis and for maintenance or repair during adult life. Understanding how stem cells form, and how they interact with their environment is therefore crucial for understanding development, homeostasis and disease. The ovary of the fruit fly Drosophila melanogaster has served as an influential model for the interaction of germ line stem cells (GSCs) with their somatic support cells (niche) 1, 2. The known location of the niche and the GSCs, coupled to the ability to genetically manipulate them, has allowed researchers to elucidate a variety of interactions between stem cells and their niches 3-12.
Despite the wealth of information about mechanisms controlling GSC maintenance and differentiation, relatively little is known about how GSCs and their somatic niches form during development. About 18 somatic niches, whose cellular components include terminal filament and cap cells (Figure 1), form during the third larval instar 13-17. GSCs originate from primordial germ cells (PGCs). PGCs proliferate at early larval stages, but following the formation of the niche a subgroup of PGCs becomes GSCs 7, 16, 18, 19. Together, the somatic niche cells and the GSCs make a functional unit that produces eggs throughout the lifetime of the organism.
Many questions regarding the formation of the GSC unit remain unanswered. Processes such as coordination between precursor cells for niches and stem cell precursors, or the generation of asymmetry within PGCs as they become GSCs, can best be studied in the larva. However, a methodical study of larval ovary development is physically challenging. First, larval ovaries are small. Even at late larval stages they are only 100&mu;m across. In addition, the ovaries are transparent and are embedded in a white fat body. Here we describe a step-by-step protocol for isolating ovaries from late third instar (LL3) Drosophila larvae, followed by staining with fluorescent antibodies. We offer some technical solutions to problems such as locating the ovaries, staining and washing tissues that do not sink, and making sure that antibodies penetrate into the tissue. This protocol can be applied to earlier larval stages and to larval testes as well.

Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries

How niches and stem cells form during development is an important question with practical implications. In the Drosophila ovary, germ line stem cells and their somatic niches form during larval development. This video demonstrates how to dissect, stain and mount female gonads from late third instar (LL3) Drosophila larvae.

Dissection und Färbung von Drosophila Larven Ovarien

Many organs depend on stem cells for their development during embryogenesis and for maintenance or repair during adult life. Understanding how stem cells ...

Homarus americanus stomatogastrischen Nervous System Dissection

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