Öffnen Sie zunächst das Programm und initialisieren Sie die Injektorpumpe, indem Sie auf die Dispenser-Steuerung klicken, Pumpe 2 auswählen und dann auf Init klicken. Um den Schlauch mit dem ionisierten Wasser zu spülen, klicken Sie auf Spülen und drücken Sie dann Weiter. Wählen Sie Pumpe 2 und stellen Sie die Spitzenhalterung auf die gewünschte Spitze ein.
Klicken Sie dann erneut auf Weiter. Klicken Sie auf Start, um mit dem Spülen des Röhrchens zu beginnen. Wiederholen Sie das Spülen mit Methanol.
Bereiten Sie in der Zwischenzeit eine funktionierende Substratlösung vor, indem Sie das Substratmaterial um 1 bis 100 verdünnen. Zum Schluss spülen Sie den Schlauch mit der Arbeitsverdünnung des Substratmaterials in PBS. Legen Sie die Platte in den Plattenleser ein.
Wählen Sie dann in den Messeinstellungen die Blende für die US-Lumineszenzöffnung von 384 Platten aus, gefolgt von dem Abstand zwischen Platte und Detektor auf 0,6 Millimeter und der Messzeit auf 0,5 Sekunden. Nachdem die Messeinstellungen festgelegt wurden, wählen Sie auf der Registerkarte Protokoll-Allgemeine Einstellungen den Plattentyp als 384 Nunc aus, und wählen Sie die Option Bidirektional nach Spalten als Messmodus. Geben Sie 1 in die Registerkarte Anzahl der Assay-Wiederholungen ein.
Wählen Sie nun auf der Registerkarte Dispense die gewünschte Dosiermessung aus. Stellen Sie dann die Messzeit für jede Vertiefung auf eine Sekunde ein und wählen Sie die gewünschte verwendete Pumpe aus. Dosiergeschwindigkeit von 200 Mikrolitern pro Sekunde.
Und das Dosiervolumen auf 50 Mikroliter. Wählen Sie Dosiervolumen als Spritzenfüllvolumen für Pumpe 2 aus. Und dann setzen Sie die Messzahl Start dispensing at auf 1.
Verwenden Sie auf der Registerkarte Well-Auswahl das Dropdown-Menü Proben hinzufügen/entfernen, wählen Sie den gewünschten Probentyp und die zu messenden Wells aus. Starten Sie danach die Messung, indem Sie auf Ausführen klicken. Das basale Lumineszenzsignal von DMSO ist in Spalte 1 zu sehen, und die Abnahme des Lumineszenzsignals bei Vorhandensein des ATG4B-Inhibitors FMK-9a ist in Spalte 24 zu sehen.
