Viele Berichte, die das extrahepatische Gallensystem bewerteten, berichteten, dass sie die Proben erhielten, aber nicht, wie sie sie erhielten, was Fragen hinsichtlich der Vergleichbarkeit aufwarf. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass das gesamte extrahepatische Gallensystem seziert und kontaminierende Zellen atraumatisch entfernt werden können. Unser Dissektionsprotokoll kann allgemein auf experimentelle Ansätze angewendet werden, die an neonatalen Gallengangserkrankungen der Maus arbeiten und auf die Dissektion des extrahepatischen Gallensystems abzielen.
Einige Merkmale des Protokolls, zum Beispiel das Belassen des Magens am Zwölffingerdarm, könnten bei der Erforschung der Zwölffingerdarmatresie nützlich sein, um eine korrekte Orientierung durch die teilweise verdaute Milch zu ermöglichen, die vom Magen ausgedrückt wird. Zu Beginn kann die Technik etwas Zeit für das Training benötigen. Das Üben und Befolgen des schrittweisen Ansatzes erhöht die Geschwindigkeit und das Ergebnis.
Stellen Sie zunächst die desinfizierten und autoklavierten Instrumente auf eine sterile Oberfläche neben dem Operationstisch. Nachdem Sie einen Schnitt im Peritoneum gemacht haben, dehnen Sie den Schnitt bis zum Ort der Enthauptung aus und folgen Sie der linken frontalen Achsellinie. Entfernen Sie die Haut von links nach rechts mit einer schonenden Pinzette.
Halten Sie unter einem Mikroskop das Peritoneum, das die Milz umgibt. Heben Sie es vorsichtig an, bis das Peritoneum einer zeltartigen Struktur ähnelt, und schneiden Sie ein Loch von einem Millimeter in die Mitte. Warten Sie, bis das Peritonealzelt mit Luft gefüllt ist.
Schneiden Sie das Peritoneum in einem Fenster ab, das von den unteren Rippen, beiden seitlichen Bauchregionen und dem unteren Blasenbereich eingerahmt wird. Stellen Sie den vollen Zugang zu Leber, Gallengangssystem, Magen, Dünndarm und Dickdarm sicher. Untersuchen Sie die Gallenblase und die Gallenwege, indem Sie den Xiphoidfortsatz vorsichtig in eine kraniale ventrale Position ziehen.
Vermeiden Sie das Reißen des falciformen Bandes, das zum Reißen der Gallenblase aus dem Gallengangssystem führen kann. Lassen Sie dann den Zug des Xiphoid-Prozesses los. Ziehen Sie den Zwölffingerdarm vorsichtig nach unten, um das Gallengangssystem zu befreien.
Führen Sie dann die Mobilisierung des unteren En-Blocks durch, indem Sie die Zwölffingerdarmpapille identifizieren, die das Gallengangssystem mit dem Zwölffingerdarm verbindet. Schneiden Sie durch den Zwölffingerdarm etwa zwei Zentimeter zur rechten seitlichen Seite der Papille. Dann schneiden Sie durch den Pylorusbereich.
Stellen Sie sicher, dass der Mageninhalt im Pylorusbereich zwischen der Schnittstelle und der Zwölffingerdarmpapille vorhanden ist. Um die Mobilisierung des oberen En-Blocks durchzuführen, ziehen Sie vorsichtig den Xiphoid-Prozess und erhalten Sie Zugang zum falciformen Band. Machen Sie einen Zentimeter großen Schnitt durch das falciforme Band zwischen der Gallenblase und in der Nähe des Xiphoid-Prozesses.
Schneiden Sie durch die Verbindungsstrukturen zwischen Leber und Thorax, wie die Speiseröhre, die Vena cava inferior, die thorakale Aorta und alle Bänder, die den nackten Bereich der Leber umgeben. Schneiden Sie auch alle dorsal verbleibenden Gewebeverbindungen ab. Legen Sie die En-bloc-Probe unter der 20-fachen mikroskopischen Vergrößerung auf ein Schaumstoffpolster.
Setzen Sie die Probe zusammen, indem Sie sie in der richtigen anatomischen Position neu organisieren. Flachen Sie mit sanften Bewegungen den oralen und aboralen Teil des Zwölffingerdarms ab. Beginnen Sie mit einer atraumatischen Pinzette die Abflachbewegung an der Zwölffingerdarmpapille und fahren Sie mit den Schneidkanten fort.
Dann glätten Sie den weißen breiigen Inhalt des Magens im oralen Teil des Zwölffingerdarms. Identifizieren Sie den oralen und den aboralen Teil des Zwölffingerdarms, um eine wahrscheinliche Gallengangsrotation auszuschließen. Schneiden Sie große Reste von Lebergewebe weg, bevor Sie den Gallengang sezieren.
Nach einigen Schabenbewegungen wird die Probe in eine sauberere Position auf der Schaumstoffmatte gebracht. Verwenden Sie das weniger komprimierte Lebergewebe im Hintergrund, um die Ansicht für die Unterscheidung zwischen EBDS und unerwünschten Zellen zu optimieren. Verarbeiten Sie das hepatoduodenale Band, bis das isolierte EBDS verbleibt.
Beobachten Sie die Leberarterie und die Pfortader, die als weißes und sehr empfindliches Filament entstehen, etwa drei bis fünf Millimeter oral von der Zwölffingerdarmpapille entfernt. Entfernen Sie dieses empfindliche Filament vorsichtig mit einem sanften Zug zur linken Seitenseite. Stellen Sie sicher, dass die Schabenbewegungen vom Gallengangssystem ausgehen und zu den Lebergrenzen führen.
Mit diesem Protokoll wurde EBDS aus neun Tage alten murinen Neugeborenen seziert. Die Länge des isolierten EBDS von der Gallenblase bis zur Zwölffingerdarmpapille betrug weniger als 10 Millimeter, und der Durchmesser des empfindlichen Ductus choledochus variierte zwischen 0,05 und 0,2 Millimetern. Die Hämatoxylin-Eosin-Färbung wurde am Längsschnitt des EBDS mit offenem Lumen durchgeführt.
Die Cholangiozyten, die das Lumen umgeben, wurden als Monoschicht identifiziert und dunkler gefärbt. Forscher sollten Operationstechniken wie Dissektions- und Injektionsprotokolle teilen und standardisieren, um die Vergleichbarkeit und schnelle Verwendbarkeit ihrer Studien und Ergebnisse zu verbessern. Die vorhergehende Dissektion wird für histologische und einzellige Ansätze, wie die Isolierung von intra- und extraperiperi-Cholangiozyten, vorteilhaft sein, da sie zu einer Verringerung der Zellkulturkontamination führt.
