Analyse von Wirtszellproteinen unter Verwendung von Anreicherungskügelchen in Verbindung mit begrenztem Verdau

Wir haben eine hochempfindliche Methode entwickelt, um diese Wirtszellproteine mit geringer Häufigkeit aus dem Arzneimittel mit Hilfe der Proteom-Anreicherungskügelchen nachzuweisen. Dieser Ansatz hilft uns, die Grundursache und das mit dem Arzneimittel verbundene Risiko zu finden. Es gibt mehrere Möglichkeiten, die Nachweisgrenze der HCP-Analyse zu verbessern, die ungezielte Methode, einschließlich, aber nicht beschränkt auf die Protein-A-Depletion, die begrenzte Verdauung, die Molekulargewichtsgrenze, die Immunpräzipitation.

Die gezielte Methode zum Nachweis des Wirtszellproteins, einschließlich Flüssigkeitschromatographie, Mehrfachreaktionsüberwachung und der parallelen Reaktionsüberwachung der Nicht-Flüssigkeitschromatographie. Die größte Herausforderung bei diesen HCP-Analysen ist der signifikante dynamische Bereich zwischen Antikörper-, Wirkstoff- und Wirtszellproteinen. Daher zielen die meisten Methoden darauf ab, die Menge an Antikörpern zu reduzieren und das HCP vor der LCMS-Analyse anzureichern, um den dynamischen Bereich zwischen Antikörperpeptiden und HCP-Peptiden zu verringern.

So verbessern die ProteoMiner-Technologie und das begrenzte Aufschlussprotokoll die Nachweisgrenze der HCP-Analyse im Vergleich zu anderen Methoden erheblich. Es ist im Vergleich zur Immunpräzipitation unvoreingenommen und kann im Vergleich zur Protein-A-Depletionsmethode auf verschiedene Wirkstoffmodule angewendet werden. Auch dieses Protokoll ist einfach und unkompliziert.

Die ProteoMiner-Technologie und das begrenzte Verdauungsprotokoll helfen uns dabei, mehrere HCPs zu identifizieren, die Polysorbat und das Fragment-Antikörper-Medikament abbauen. In Kombination mit der Nano-LCMPRM-Methode kann die Anreicherungsmethode auch quantitative Ergebnisse liefern, um die biologisch relevante Konzentration problematischer Wirtszellproteine zu finden.