Nuestra colocación del manguito vascular permite el flujo sanguíneo laminar y utilizamos un manguito más grande para la arteria pulmonar del donante para garantizar un amplio retorno de sangre a los receptores. Estas modificaciones utilizadas en este protocolo disminuyen la probabilidad de flujo sanguíneo turbulento y la formación de trombos y dan como resultado mejores tasas de supervivencia. Este método proporciona información valiosa para estudiar las respuestas inmunes después del trasplante, como la lesión por isquemia de reperfusión y el rechazo del injerto.
Además, nuestra técnica permite un seguimiento más fácil después del trasplante o un nuevo trasplante. Demostrando este procedimiento estará el Dr. Wen Jun Li, un microcirujano experto en nuestro laboratorio que desarrolló esta técnica. Prepare el área quirúrgica afeitando el cabello del pecho y el abdomen con una maquinilla de afeitar eléctrica.
Administrar 100 unidades de heparina por vía intravenosa en la vena del pene para los hombres o la vena yugular externa para hombres y mujeres. Coloque los ratones en posición supina con las extremidades anteriores por encima. Asegure las extremidades anteriores y posteriores con cinta quirúrgica y desinfecte la piel con 0,75% de yodo y 70% de etanol.
Realizar una incisión para la laparosternotomía mediana desde el ombligo hasta el ángulo esternal, seguida de una toracotomía bilateral a lo largo de cada margen costal. Doble la pared torácica anterior sobre el cuello para una exposición completa del mediastino. Extirpar el timo y exponer la vena cava inferior intratorácica.
Para la perfusión retrógrada, inyecte 1,5 mililitros de solución salina a cuatro grados Celsius en la vena cava inferior intratorácica con la aguja orientada superiormente hacia el injerto. Ligate la vena cava superior con un 8-0 sutura de seda y dividir distalmente. Repita la perfusión retrógrada inyectando otros 1,5 mililitros de solución salina a cuatro grados centígrados a través de la vena cava inferior.
Ligate la vena cava inferior con un 8-0 sutura de seda y dividir distalmente. Diseccionar el arco aórtico y el tronco de la arteria pulmonar para la recolección del injerto y transecto ambos distalmente. Ligate las venas pulmonares en la superficie posterior del corazón usando una sutura de seda 6-0 y divídelas distalmente.
Realice la preparación del injerto extrayendo el corazón del donante de la cavidad torácica. Coloque el corazón extirpado en un recipiente de plástico lleno de solución salina heparinizada a cuatro grados centígrados durante uno o dos minutos. Transfiera el injerto a un matraz de plástico estéril lleno de hielo para colocarlo en el manguito.
Coloque un manguito angiocatéter de calibre 20 de un milímetro de largo sobre la arteria pulmonar para el manguito del donante. Con fórceps finos, doble suavemente los bordes de la arteria hacia atrás sobre el manguito. Asegure el recipiente plegado al manguito con un lazo de nylon 10-0.
Guarde el corazón del donante en solución salina heparinizada u otra solución de preservación a cuatro grados centígrados. Prepare el área quirúrgica afeitando el cabello del área cervical con una maquinilla de afeitar eléctrica. Aplique ungüento oftálmico estéril no medicado en los ojos para evitar el secado de la córnea.
Coloque al animal en posición supina con las extremidades anteriores adyacentes al cuerpo y la cabeza girada ligeramente hacia la izquierda. Asegure las extremidades anteriores y posteriores con cinta quirúrgica. Desinfectar la piel con 0,75% de yodo y 70% de etanol.
Después de hacer una incisión cervical en la línea media desde la mandíbula inferior hasta el esternón, transecto el músculo esternocleidomastoideo derecho. Extirpe el lóbulo derecho de la glándula inframandibular para crear espacio para la implantación del injerto. Ate un nudo deslizante sobre la vena yugular externa proximal con una sutura de seda 6-0.
Ligar la vena yugular externa distal y ramas adyacentes usando un 8-0 Sutura de seda. Sutura debajo de la vena y cúbrala con una gasa. Haga una incisión transversal a través de la pared anterior de la vena yugular externa.
Coloque una sutura de nylon 10-0 a través del borde de la vena yugular externa proximal y el tejido subyacente para asegurar la vena durante la inserción del manguito. Ligar la arteria carótida común derecha distal usando un 8-0 Sutura de seda justo inferior a la bifurcación carotídea. Ate un nudo deslizante sobre la arteria carótida común proximal usando una sutura de seda 6-0.
Transecto la arteria distalmente entre las suturas. Luego coloque un manguito angiocatéter de calibre 24 de 0.6 mililitros de largo sobre la arteria carótida común derecha del receptor. Con fórceps finos, doble suavemente los bordes de la arteria hacia atrás sobre el manguito.
Asegure el recipiente plegado al manguito con un lazo de nylon 10-0. Coloque el corazón donante superior a la zona cervical derecha. Gotea solución salina fría sobre el injerto cardíaco cada pocos minutos durante la implantación.
Coloque una sutura de nylon 10-0 a través del borde de la aorta del donante y a través de una mordida superficial del tejido subyacente para asegurar el injerto en su lugar. Enjuague la aorta del donante con 0,5 mililitros de solución salina heparinizada al 0,9%. Inserte el manguito de la arteria carótida común del receptor en la aorta del donante.
Asegurar la anastomosis con un 8-0 corbata de seda. Retire la sutura del anclaje aórtico. Desairee la vena yugular externa enjuagando la vena yugular externa del receptor con 0,5 mililitros de solución salina heparinizada al 0,9%.
Realizar anastomosis de la arteria pulmonar insertando el manguito de la arteria pulmonar del donante en la vena yugular externa del receptor y asegurar con un 8-0 corbata de seda. Retire la sutura de anclaje de la vena yugular externa y transecte la pared posterior restante de la vena yugular externa para liberar el injerto del tejido subyacente. Asegúrese de que el injerto esté orientado correctamente sin torcer o torcer la anastomosis.
Suelte los nudos deslizantes en la vena yugular externa del receptor, seguido de la arteria carótida común para iniciar la reperfusión del injerto cardíaco. La técnica demostrada en este protocolo mostró una tasa de supervivencia de aproximadamente el 97%Esto podría atribuirse potencialmente al manguito de calibre 20 más grande colocado en la arteria pulmonar del donante para garantizar un amplio retorno del flujo sanguíneo al receptor. Además, la alineación del flujo sanguíneo con la colocación del manguito en la presente técnica minimiza el riesgo de trombosis y turbulencia anastomótica.
El tiempo medio de operación del receptor fue de aproximadamente 37 minutos con un tiempo promedio de isquemia fría de 20 minutos. Para los estudios de supervivencia, los injertos cardíacos se evaluaron diariamente mediante visualización directa y palpación digital de los latidos del corazón. Las imágenes intravitales de dos fotones se realizaron temprano después del trasplante para evaluar el tráfico de leucocitos.
Es importante comprobar que el injerto esté correctamente posicionado y orientado antes del cierre de la piel para evitar torsiones. Este método se puede utilizar en modelos de retrasplante para identificar células inmunes residentes en injertos trasplantados que median respuestas aloinmunes.
