当社の血管カフ留置は層流を可能にし、ドナー肺動脈に大きなカフを利用して、レシピエントへの十分な血液還流を確保します。このプロトコルで使用されるこれらの変更は、乱流血流と血栓形成の可能性を減らし、生存率を改善します。この方法は、虚血再灌流障害や移植片拒絶反応などの移植後の免疫応答を研究するための貴重な洞察を提供します。
さらに、私たちの技術は、移植後のモニタリングまたは再移植を容易にします。この手順を実演するのは、この技術を開発した私たちの研究室の専門家のマイクロ外科医であるWen Jun Li博士です。電気かみそりを使用して胸と腹部から髪を剃ることによって手術領域を準備します。
100単位のヘパリンを男性の陰茎静脈に、男性と女性の場合は外頸静脈に静脈内投与します。.マウスを前肢を頭上にして仰臥位に置きます。前肢と後肢をサージカルテープで固定し、0.75%ヨウ素と70%エタノールで皮膚を消毒します。
臍から胸骨角までの正中開腹骨切開術の切開を行い、続いて各肋骨縁に沿って両側開胸術を行います。縦隔を完全に露出させるために、前胸壁を首の上に折ります。胸腺を切除し、胸腔内下大静脈を露出させる。
逆行性灌流の場合は、1.5ミリリットルの摂氏4度の生理食塩水を胸腔内下大静脈に注入し、針を移植片に上向きにします。8-0を使用して上大静脈を結紮する絹の縫合糸と遠位に分けます。下大静脈を介してさらに1.5ミリリットルの摂氏4度の生理食塩水を注入することにより、逆行性灌流を繰り返します。
8-0を使用して下大静脈を結紮する絹の縫合糸と遠位に分けます。移植片採取のために大動脈弓と肺動脈幹を解剖し、両方を遠位に横断します。6-0シルク縫合糸を使用して心臓の後面の肺静脈を結睭化し、遠位に分割します。
胸腔からドナー心臓を摘出して移植片の準備を行います。切除した心臓を摂氏4度のヘパリン化生理食塩水で満たされたプラスチック容器に1〜2分間入れます。カフを配置するために、氷で満たされた滅菌プラスチックフラスコに移植片を移します。
ドナーカフの肺動脈の上に長さ1ミリメートルの20ゲージの血管カテーテルカフを置きます。細かい鉗子を使用して、動脈の端をカフの上にそっと折り返します。10-0ナイロンタイを使用して、折りたたまれた容器を袖口に固定します。
ドナーの心臓をヘパリン化生理食塩水または摂氏4度の別の保存液に保管します。電気かみそりを使用して頸部から髪を剃ることによって手術領域を準備します。角膜の乾燥を防ぐために、滅菌済みの非薬用眼科用軟膏を目に塗ります。
前肢を体に隣接させ、頭をわずかに左に向け、動物を仰臥位に置きます。前肢と後肢をサージカルテープで固定します。0.75%ヨウ素と70%エタノールで皮膚を消毒します。
下顎骨から胸骨まで正中線頸部切開を行った後、右胸鎖乳突筋を横断します。移植片移植のためのスペースを作るために、下顎腺の右葉を切除します。6-0シルク縫合糸を使用して、近位外頸静脈の上にスリップノットを結びます。
遠位外頸静脈と隣接する枝を8-0を使用して結睭化しますシルク縫合糸。静脈の下に縫合し、ガーゼで覆います。外頸静脈の前壁を横切開します。
近位外頸静脈とその下にある組織のエッジに10-0ナイロン縫合糸を配置して、カフ挿入中に静脈を固定します。8-0を用いて右総頸動脈遠位位を結紮する絹縫合糸は頸動脈分岐部よりちょうど劣っている。6-0シルク縫合糸を使用して、近位総頸動脈にスリップノットを結びます。
縫合糸の間で動脈を遠位に横断します。次に、長さ0.6ミリリットルの24ゲージの血管カテーテルカフをレシピエントの右総頸動脈の上に置きます。細かい鉗子を使用して、動脈の端をカフの上にそっと折り返します。
10-0ナイロンタイを使用して、折りたたまれた容器を袖口に固定します。ドナーの心臓を右頸部より上に置きます。移植中は数分ごとに冷たい生理食塩水を心臓移植片に滴下します。
10-0ナイロン縫合糸をドナー大動脈の端と下にある組織の表面的な咬傷を通して配置して、移植片を所定の位置に固定します。ドナー大動脈を0.5ミリリットルの0.9%ヘパリン化生理食塩水で洗い流します。レシピエントの総頸動脈カフをドナー大動脈に挿入します。
8-0で吻合を確保シルクネクタイ。大動脈アンカー縫合糸を取り外します。レシピエントの外頸静脈を0.5ミリリットルの0.9%ヘパリン化生理食塩水で洗い流すことにより、外頸静脈の空気を抜く。
ドナー肺動脈カフをレシピエントの外頸静脈に挿入して肺動脈吻合を行い、8-0で固定しますシルクネクタイ。外頸静脈アンカー縫合糸を取り除き、外頸静脈の残りの後壁を横断して、移植片を下にある組織から解放します。吻合のねじれやねじれなしに、移植片が適切に向き付けられていることを確認してください。
レシピエントの外頸静脈のスリップノットを解放し、続いて総頸動脈を解放して心臓移植片の再灌流を開始します。このプロトコルで実証された技術は、約97%の生存率を示しましたこれは、レシピエントへの血流の十分な戻りを確保するためにドナー肺動脈に配置されたより大きな20ゲージのカフに起因する可能性があります。さらに、本技術における血流とカフの配置の調整は、血栓症および吻合部乱流のリスクを最小限に抑える。
平均レシピエント手術時間は約37分で、平均寒冷虚血時間は20分であった。生存研究のために、心臓移植片は、心拍の直接視覚化およびデジタル触診によって毎日評価された。白血球輸送を評価するために、移植後早期に生体内2光子イメージングを実施しました。
ねじれを防ぐために、皮膚を閉じる前に移植片が適切に配置され、方向付けられていることを確認することが重要です。この方法は、同種免疫応答を媒介する移植移植片中の常在免疫細胞を同定するために再移植モデルで使用することができる。
