يسمح وضع الكفة الوعائية لدينا بتدفق الدم الصفحي ونستخدم صفعة أكبر للشريان الرئوي للمتبرع لضمان عودة الدم بشكل وفير إلى المتلقين. تقلل هذه التعديلات المستخدمة في هذا البروتوكول من احتمالية تدفق الدم المضطرب وتكوين الجلطة وتؤدي إلى تحسين معدلات البقاء على قيد الحياة. توفر هذه الطريقة رؤية قيمة لدراسة الاستجابات المناعية بعد الزرع مثل إصابة نقص التروية ورفض الكسب غير المشروع.
بالإضافة إلى ذلك ، تسمح تقنيتنا بمراقبة أسهل بعد الزرع أو إعادة الزرع. سيوضح هذا الإجراء الدكتور ون جون لي ، جراح مجهري خبير في مختبرنا طور هذه التقنية. تحضير المنطقة الجراحية عن طريق حلق الشعر من الصدر والبطن باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية.
تطبيق 100 وحدة من الهيبارين عن طريق الوريد في الوريد القضيبي للذكور أو الوريد الوداجي الخارجي للذكور والإناث. ضع الفئران في وضع ضعيف مع الأطراف الأمامية فوقها. تأمين الأطراف الأمامية والخلفية بشريط جراحي وتطهير الجلد بنسبة 0.75٪ من اليود و 70٪ من الإيثانول.
قم بإجراء شق لبضع البطن المتوسط من السرة إلى الزاوية القصية ، متبوعا ببضع الصدر الثنائي على طول كل هامش ضلعي. قم بطي جدار الصدر الأمامي فوق الرقبة للتعرض الكامل للمنصف. استئصال الغدة الصعترية وفضح الوريد الأجوف السفلي داخل الصدر.
للتروية المرتجعة ، قم بحقن 1.5 ملليلتر من محلول ملحي بأربع درجات مئوية في الوريد الأجوف السفلي داخل الصدر مع توجيه الإبرة بشكل متفوق نحو الكسب غير المشروع. ربط الوريد الأجوف العلوي باستخدام 8-0 خياطة الحرير وتقسيمها بعيدا. كرر التروية الرجعية عن طريق حقن 1.5 ملليلتر أخرى من المحلول الملحي بأربع درجات مئوية عبر الوريد الأجوف السفلي.
ربط الوريد الأجوف السفلي باستخدام 8-0 خياطة الحرير وتقسيمها بعيدا. تشريح قوس الأبهر وجذع الشريان الرئوي لحصاد الكسب غير المشروع وعرضهما بعيدا. ربط الأوردة الرئوية على السطح الخلفي للقلب باستخدام خياطة الحرير 6-0 وتقسيمها بعيدا.
قم بإعداد الكسب غير المشروع عن طريق إزالة قلب المتبرع من تجويف الصدر. ضع القلب المستأصل في وعاء بلاستيكي مملوء بأربع درجات مئوية من محلول ملحي هيبارين لمدة دقيقة إلى دقيقتين. انقل الكسب غير المشروع إلى قارورة بلاستيكية معقمة مملوءة بالثلج لوضع الكفة.
ضع صفعة قسطرة بطول ملليمتر واحد قياس 20 على الشريان الرئوي لسوار المتبرع. باستخدام ملقط ناعم ، قم بطي حواف الشريان برفق فوق الكفة. قم بتأمين الوعاء المطوي في الكفة باستخدام ربطة عنق من النايلون 10-0.
قم بتخزين قلب المتبرع في محلول ملحي هيبارين أو محلول حفظ آخر عند أربع درجات مئوية. تحضير المنطقة الجراحية عن طريق حلق الشعر من منطقة عنق الرحم باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية. ضع مرهم عيون معقم غير طبي على العينين لمنع جفاف القرنية.
ضع الحيوان في وضع ضعيف مع الأطراف الأمامية المجاورة للجسم وتحول الرأس قليلا إلى اليسار. تأمين الأطراف الأمامية والخلفية بشريط جراحي. تطهير الجلد مع 0.75 ٪ من اليود و 70 ٪ من الإيثانول.
بعد إجراء شق عنق الرحم في خط الوسط من الفك السفلي إلى القص ، قم بنقل العضلة القصية الترقوية الخشائية اليمنى. استئصال الفص الأيمن من الغدة تحت الفك السفلي لخلق مساحة لزرع الكسب غير المشروع. اربط عقدة منزلقة فوق الوريد الوداجي الخارجي القريب باستخدام خياطة حريرية 6-0.
ربط الوريد الوداجي الخارجي البعيد والفروع المجاورة باستخدام 8-0 خياطة الحرير. خياطة تحت الوريد وتغطي مع الشاش. قم بعمل شق عرضي عبر الجدار الأمامي للوريد الوداجي الخارجي.
ضع خياطة نايلون 10-0 عبر حافة الوريد الوداجي الخارجي القريب والأنسجة الكامنة لتأمين الوريد أثناء إدخال الكفة. ربط الشريان السباتي المشترك الأيمن البعيد باستخدام 8-0 خياطة الحرير فقط أدنى من تشعب السباتي. اربط عقدة منزلقة فوق الشريان السباتي المشترك القريب باستخدام خياطة حريرية 6-0.
اقطع الشريان بعيدا بين الغرز. ثم ضع كفة قسطرة بطول 24 ملليلتر على الشريان السباتي المشترك الأيمن للمتلقي. باستخدام ملقط ناعم ، قم بطي حواف الشريان برفق فوق الكفة.
قم بتأمين الوعاء المطوي في الكفة باستخدام ربطة عنق من النايلون 10-0. ضع قلب المتبرع أعلى من منطقة عنق الرحم اليمنى. قم بتقطير محلول ملحي بارد على طعم القلب كل بضع دقائق أثناء الزرع.
ضع خياطة نايلون 10-0 عبر حافة الشريان الأورطي للمتبرع ومن خلال لدغة سطحية من الأنسجة الكامنة لتثبيت الطعم في مكانه. اغسل الشريان الأورطي المتبرع ب 0.5 ملليلتر من محلول ملحي بالهيبارين بنسبة 0.9٪. أدخل صفعة الشريان السباتي المشتركة للمتلقي في الشريان الأورطي للمتبرع.
تأمين مفاغرة مع 8-0 ربطة عنق من الحرير. قم بإزالة خياطة مرساة الأبهر. قم بإزالة الهواء من الوريد الوداجي الخارجي عن طريق شطف الوريد الوداجي الخارجي للمتلقي ب 0.5 ملليلتر من محلول ملحي بنسبة 0.9٪ هيبارين.
إجراء مفاغرة الشريان الرئوي عن طريق إدخال صفعة الشريان الرئوي للمتبرع في الوريد الوداجي الخارجي للمتلقي وتأمينها ب 8-0 ربطة عنق من الحرير. قم بإزالة خياطة مرساة الوريد الوداجي الخارجي وعبر الجدار الخلفي المتبقي من الوريد الوداجي الخارجي لتحرير الكسب غير المشروع من الأنسجة الكامنة. تأكد من توجيه الكسب غير المشروع بشكل صحيح دون التواء أو التواء مفاغرة.
حرر العقد المنزلقة على الوريد الوداجي الخارجي للمتلقي ، متبوعا بالشريان السباتي المشترك لبدء إعادة تروية الكسب غير المشروع للقلب. أظهرت التقنية الموضحة في هذا البروتوكول معدل بقاء يبلغ حوالي 97٪ ويمكن أن يعزى ذلك إلى الكفة الأكبر 20 التي تم وضعها على الشريان الرئوي للمتبرع لضمان عودة تدفق الدم إلى المتلقي. بالإضافة إلى ذلك ، فإن محاذاة تدفق الدم مع وضع الكفة في التقنية الحالية تقلل من خطر تجلط الدم والاضطراب المفاغرة.
كان متوسط وقت عملية المتلقي حوالي 37 دقيقة بمتوسط وقت نقص تروية بارد يبلغ 20 دقيقة. بالنسبة لدراسات البقاء على قيد الحياة ، تم تقييم الطعوم القلبية يوميا عن طريق التصور المباشر والجس الرقمي لنبضات القلب. تم إجراء التصوير ثنائي الفوتون داخل الجسم في وقت مبكر بعد الزرع لتقييم الاتجار بالكريات البيض.
من المهم التحقق من وضع الكسب غير المشروع وتوجيهه بشكل صحيح قبل إغلاق الجلد لمنع الالتواء. يمكن استخدام هذه الطريقة في نماذج إعادة الزرع لتحديد الخلايا المناعية المقيمة في الطعوم المزروعة التي تتوسط في الاستجابات المناعية الخيفية.
