Unsere Gefäßmanschette ermöglicht einen laminaren Blutfluss und wir verwenden eine größere Manschette für die Spenderpulmonalarterie, um eine ausreichende Blutrückführung zu den Empfängern zu gewährleisten. Diese in diesem Protokoll verwendeten Modifikationen verringern die Wahrscheinlichkeit eines turbulenten Blutflusses und der Thrombusbildung und führen zu verbesserten Überlebensraten. Diese Methode liefert wertvolle Erkenntnisse für die Untersuchung von Immunantworten nach Transplantationen wie Ischämie-Reperfusionsverletzungen und Transplantatabstoßung.
Darüber hinaus ermöglicht unsere Technik eine einfachere Überwachung oder Retransplantation nach der Transplantation. Dieses Verfahren wird von Dr. Wen Jun Li demonstriert, einem erfahrenen Mikrochirurgen in unserem Labor, der diese Technik entwickelt hat. Bereiten Sie den Operationsbereich vor, indem Sie die Haare mit einem elektrischen Rasierer von Brust und Bauch rasieren.
Verabreichen Sie 100 Einheiten Heparin intravenös in die Penisvene für Männer oder externe Jugularvene für Männer und Frauen. Setzen Sie die Mäuse in Rückenlage mit den Vorderbeinen darüber. Sichern Sie die Vorder- und Hinterbeine mit chirurgischem Klebeband und desinfizieren Sie die Haut mit 0,75% Jod und 70% Ethanol.
Führen Sie einen Schnitt für die mediane Laparosternotomie vom Nabel bis zum Sternalwinkel durch, gefolgt von einer bilateralen Thorakotomie entlang jedes Rippenrands. Falten Sie die vordere Brustwand über den Hals, um das Mediastinum vollständig freizulegen. Schneiden Sie den Thymus heraus und legen Sie die intrathorakale Vena cava inferior frei.
Für eine retrograde Perfusion injizieren Sie 1,5 Milliliter von vier Grad Celsius Kochsalzlösung in die intrathorakale untere Hohlvene, wobei die Nadel überlegen auf das Transplantat ausgerichtet ist. Ligate die obere Hohlvene mit einem 8-0 Seidennaht und distal teilen. Wiederholen Sie die retrograde Perfusion, indem Sie weitere 1,5 Milliliter vier Grad Celsius Kochsalzlösung über die untere Hohlvene injizieren.
Ligieren Sie die untere Hohlvene mit einem 8-0 Seidennaht und distal teilen. Sezieren Sie den Aortenbogen und den Lungenarterienstamm für die Transplantaternte und transektieren Sie beide distal. Ligieren Sie die Lungenvenen auf der hinteren Oberfläche des Herzens mit einer 6-0-Seidennaht und teilen Sie distal.
Führen Sie die Transplantatvorbereitung durch, indem Sie das Spenderherz aus der Brusthöhle entfernen. Legen Sie das herausgeschnittene Herz für ein bis zwei Minuten in einen Plastikbehälter, der mit vier Grad Celsius heparinisierter Kochsalzlösung gefüllt ist. Übertragen Sie das Transplantat auf einen sterilen Kunststoffkolben, der zur Platzierung der Manschette mit Eis gefüllt ist.
Legen Sie eine einen Millimeter lange 20-Gauge-Angiokathetermanschette über die Lungenarterie für die Spendermanschette. Falten Sie die Ränder der Arterie mit einer feinen Pinzette vorsichtig über die Manschette zurück. Befestigen Sie das gefaltete Gefäß mit einer 10-0-Nylonbinde an der Manschette.
Lagern Sie das Spenderherz in heparinisierter Kochsalzlösung oder einer anderen Konservierungslösung bei vier Grad Celsius. Bereiten Sie den Operationsbereich vor, indem Sie die Haare mit einem elektrischen Rasierer aus dem Halsbereich rasieren. Tragen Sie sterile, nicht medikamentöse Augensalbe auf die Augen auf, um das Austrocknen der Hornhaut zu verhindern.
Stellen Sie das Tier in Rückenlage, wobei die Vorderbeine neben dem Körper liegen und der Kopf leicht nach links gedreht ist. Sichern Sie die Vorder- und Hinterbeine mit chirurgischem Klebeband. Desinfizieren Sie die Haut mit 0,75% Jod und 70% Ethanol.
Nach einem Mittellinienschnitt des Gebärmutterhalses vom unteren Unterkiefer zum Brustbein transektieren Sie den rechten Musculus sternocleidomastoideus. Schneiden Sie den rechten Lappen der Unterkieferdrüse heraus, um Platz für die Transplantatimplantation zu schaffen. Binden Sie einen Slipknot über die proximale äußere Halsvene mit einer 6-0-Seidennaht.
Ligieren Sie die distale äußere Jugularvene und die angrenzenden Äste mit einem 8-0 Seidennaht. Vernähen Sie unter der Vene und bedecken Sie sie mit Gaze. Machen Sie einen Querschnitt über die Vorderwand der äußeren Halsvene.
Legen Sie eine 10-0-Nylonnaht durch den Rand der proximalen äußeren Jugularvene und das darunter liegende Gewebe, um die Vene während des Einführens der Manschette zu sichern. Ligieren Sie die distale rechte Halsschlagader mit einem 8-0 Seidennaht knapp schlechter als die Karotisbifurkation. Binden Sie einen Slipknot über die proximale gemeinsame Halsschlagader mit einer 6-0-Seidennaht.
Transektieren Sie die Arterie distal zwischen den Nähten. Legen Sie dann eine 0,6 Milliliter lange 24-Gauge-Angiokathetermanschette über die rechte Halsschlagader des Empfängers. Falten Sie die Ränder der Arterie mit einer feinen Pinzette vorsichtig über die Manschette zurück.
Befestigen Sie das gefaltete Gefäß mit einer 10-0-Nylonbinde an der Manschette. Platzieren Sie das Spenderherz oberhalb des rechten Halsbereichs. Tropfen Sie während der Implantation alle paar Minuten kalte Kochsalzlösung auf das Herztransplantat.
Legen Sie eine 10-0-Nylonnaht durch den Rand der Spenderaorta und durch einen oberflächlichen Biss des darunter liegenden Gewebes, um das Transplantat an Ort und Stelle zu sichern. Spülen Sie die Spenderaorta mit 0,5 Milliliter 0,9% heparinisierter Kochsalzlösung. Führen Sie die allgemeine Halsschlagadermanschette des Empfängers in die Spenderaorta ein.
Sichern Sie die Anastomose mit einem 8-0 Seidenkrawatte. Entfernen Sie die Aortenankernaht. Entlüften Sie die äußere Halsvene, indem Sie die äußere Halsvene des Empfängers mit 0,5 Milliliter 0,9% heparinisierter Kochsalzlösung spülen.
Führen Sie eine Lungenarterienanastomose durch, indem Sie die Lungenarterienmanschette des Spenders in die äußere Halsvene des Empfängers einführen und mit einem 8-0 sichern Seidenkrawatte. Entfernen Sie die äußere Jugularvenesankernaht und transektieren Sie die verbleibende hintere Wand der äußeren Jugularvene, um das Transplantat aus dem darunter liegenden Gewebe zu befreien. Stellen Sie sicher, dass das Transplantat richtig ausgerichtet ist, ohne die Anastomose zu verknicken oder zu verdrehen.
Lösen Sie die Slipknots an der äußeren Halsvene des Empfängers, gefolgt von der gemeinsamen Halsschlagader, um die Reperfusion des Herztransplantats einzuleiten. Die in diesem Protokoll demonstrierte Technik zeigte eine Überlebensrate von etwa 97%Dies könnte möglicherweise auf die größere 20-Gauge-Manschette zurückzuführen sein, die an der Spenderpulmonalarterie platziert wurde, um eine ausreichende Rückkehr des Blutflusses zum Empfänger zu gewährleisten. Darüber hinaus minimiert die Ausrichtung des Blutflusses auf die Manschettenplatzierung in der vorliegenden Technik das Risiko von Thrombosen und anastomotischen Turbulenz.
Die mittlere Empfängeroperationszeit betrug etwa 37 Minuten mit einer durchschnittlichen Erkältungsischämiezeit von 20 Minuten. Für Überlebensstudien wurden Herztransplantate täglich durch direkte Visualisierung und digitale Palpation des Herzschlags beurteilt. Intravitale Zwei-Photonen-Bildgebung wurde früh nach der Transplantation durchgeführt, um den Leukozytentransport zu bewerten.
Es ist wichtig zu überprüfen, ob das Transplantat vor dem Hautverschluss richtig positioniert und ausgerichtet ist, um ein Verdrehen zu vermeiden. Diese Methode kann in Retransplantationsmodellen verwendet werden, um residente Immunzellen in transplantierten Transplantaten zu identifizieren, die alloimmune Reaktionen vermitteln.
