Nossa colocação do manguito vascular permite o fluxo sanguíneo laminar e utilizamos um manguito maior para a artéria pulmonar doadora para garantir amplo retorno sanguíneo aos receptores. Essas modificações utilizadas neste protocolo diminuem a probabilidade de fluxo sanguíneo turbulento e formação de trombos e resultam em melhores taxas de sobrevivência. Este método fornece informações valiosas para o estudo de respostas imunes após o transplante, como lesão de isquemia reperfusão e rejeição do enxerto.
Além disso, nossa técnica permite um monitoramento ou retransplante pós-transplante mais fácil. Demonstrando este procedimento será o Dr. Wen Jun Li, um microcirurgião especialista em nosso laboratório que desenvolveu esta técnica. Prepare a área cirúrgica raspando o cabelo do peito e do abdômen usando uma navalha elétrica.
Administrar 100 unidades de heparina por via intravenosa na veia peniana para machos ou veia jugular externa para machos e fêmeas. Coloque os ratos em decúbito dorsal com os membros dianteiros por cima. Fixe os membros anteriores e posteriores com fita cirúrgica e desinfete a pele com iodo a 0,75% e etanol a 70%.
Realizar uma incisão para a laparoesternotomia mediana do umbigo ao ângulo esternal, seguida de uma toracotomia bilateral ao longo de cada margem costal. Dobre a parede torácica anterior sobre o pescoço para exposição total do mediastino. Extirpar o timo e expor a veia cava inferior intratorácica.
Para perfusão retrógrada, injete 1,5 mililitros de solução salina de quatro graus Celsius na veia cava inferior intratorácica com a agulha orientada superiormente em direção ao enxerto. Ligue a veia cava superior usando um 8-0 sutura de seda e dividir distalmente. Repita a perfusão retrógrada injetando mais 1,5 mililitros de solução salina de quatro graus Celsius através da veia cava inferior.
Ligue a veia cava inferior usando um 8-0 sutura de seda e dividir distalmente. Dissecar o arco aórtico e o tronco da artéria pulmonar para a retirada do enxerto e transecto ambos distalmente. Ligue as veias pulmonares na superfície posterior do coração usando uma sutura de seda 6-0 e divida distalmente.
Realize a preparação do enxerto removendo o coração do doador da cavidade torácica. Coloque o coração excisado em um recipiente de plástico cheio de solução salina heparinizada de quatro graus Celsius por um a dois minutos. Transferir o enxerto para um balão de plástico estéril cheio de gelo para colocação do manguito.
Coloque um manguito angiocateter de calibre 20 milímetros de comprimento sobre a artéria pulmonar para o manguito doador. Usando pinça fina, dobre suavemente as bordas da artéria de volta sobre o manguito. Prenda o recipiente dobrado ao manguito usando uma gravata de nylon 10-0.
Armazenar o coração do doador em solução salina heparinizada ou outra solução de preservação a quatro graus Celsius. Prepare a área cirúrgica raspando o cabelo da área cervical usando uma navalha elétrica. Aplique pomada oftálmica estéril não medicamentosa nos olhos para evitar a secagem da córnea.
Coloque o animal em decúbito dorsal com os membros anteriores adjacentes ao corpo e a cabeça ligeiramente virada para a esquerda. Prenda os membros anteriores e posteriores com fita cirúrgica. Desinfete a pele com iodo a 0,75% e etanol a 70%.
Depois de fazer uma incisão cervical da linha média da mandíbula inferior para o esterno, transecte o músculo esternocleidomastóideo direito. Extirpar o lobo direito da glândula inframandibular para criar espaço para o implante do enxerto. Amarre um nó escorregadio sobre a veia jugular externa proximal usando uma sutura de seda 6-0.
Ligue a veia jugular externa distal e os ramos adjacentes usando um 8-0 sutura de seda. Sutura sob a veia e cubra com gaze. Faça uma incisão transversal através da parede anterior da veia jugular externa.
Coloque uma sutura de nylon 10-0 através da borda da veia jugular externa proximal e do tecido subjacente para proteger a veia durante a inserção do manguito. Lige a artéria carótida comum direita distal usando um 8-0 sutura de seda logo inferior à bifurcação carotídea. Amarre um nó escorregadio sobre a artéria carótida comum proximal usando uma sutura de seda 6-0.
Transectar a artéria distalmente entre as suturas. Em seguida, coloque um manguito angiocateter de calibre 24 de 0,6 mililitro de comprimento sobre a artéria carótida comum direita do receptor. Usando pinça fina, dobre suavemente as bordas da artéria de volta sobre o manguito.
Prenda o recipiente dobrado ao manguito usando uma gravata de nylon 10-0. Coloque o coração do doador superior à área cervical direita. Goteje solução salina fria no enxerto cardíaco a cada poucos minutos durante a implantação.
Coloque uma sutura de nylon 10-0 através da borda da aorta do doador e através de uma mordida superficial do tecido subjacente para fixar o enxerto no lugar. Lavar a aorta doadora com 0,5 mililitros de solução salina heparinizada a 0,9%. Insira o manguito comum da artéria carótida do receptor na aorta do doador.
Proteja a anastomose com um 8-0 gravata de seda. Remova a sutura da âncora aórtica. Desaire a veia jugular externa lavando a veia jugular externa do receptor com 0,5 mililitros de solução salina heparinizada a 0,9%.
Realizar anastomose da artéria pulmonar inserindo o manguito da artéria pulmonar doadora na veia jugular externa do receptor e segurar com um 8-0 gravata de seda. Remova a sutura da âncora da veia jugular externa e transecte a parede posterior restante da veia jugular externa para liberar o enxerto do tecido subjacente. Certifique-se de que o enxerto esteja devidamente orientado sem torção ou torção da anastomose.
Solte os nós escorregadios na veia jugular externa do receptor, seguido pela artéria carótida comum para iniciar a reperfusão do enxerto cardíaco. A técnica demonstrada neste protocolo mostrou uma taxa de sobrevida de aproximadamente 97%Isso poderia ser potencialmente atribuído ao manguito maior de calibre 20 colocado na artéria pulmonar doadora para garantir amplo retorno do fluxo sanguíneo para o receptor. Além disso, o alinhamento do fluxo sanguíneo com a colocação do manguito na presente técnica minimiza o risco de trombose e turbulência anastomótica.
O tempo médio de operação do receptor foi de aproximadamente 37 minutos, com um tempo médio de isquemia fria de 20 minutos. Para os estudos de sobrevida, os enxertos cardíacos foram avaliados diariamente por visualização direta e palpação digital dos batimentos cardíacos. Imagens intravitais de dois fótons foram realizadas logo após o transplante para avaliar o tráfico de leucócitos.
É importante verificar se o enxerto está devidamente posicionado e orientado antes do fechamento da pele para evitar torções. Este método pode ser usado em modelos de retransplante para identificar células imunes residentes em enxertos transplantados que medeiam respostas aloimunes.
