Des études antérieures montrent que la kératectomie photoréfractive ou PKR transépithéliale est l’un des meilleurs modèles animaux pour l’étude de la cicatrisation cornéenne, ainsi que des changements associés au débridement histopathologique de la cornée épithéliale. Travailler avec des gerbilles mongoles comme modèle animal présente plusieurs avantages par rapport aux autres rongeurs. Premièrement, la cornée a les mêmes couches histologiques que la cornée humaine.
Deuxièmement, l’œil est anatomiquement plus grand que l’œil des autres rongeurs, ce qui permet une manipulation plus facile. Toutes ces recherches ont été effectuées dans les installations du Centre de recherche et de développement en immunologie et maladies infectieuses de l’Université Catolica De Cordoba. La première étape consistait à désinfecter la surface de travail de l’armoire à flux laminaire.
À cette fin, 70% d’alcool a été utilisé. Instruments chirurgicaux à utiliser. Des matériaux jetables tels que des aiguilles et des seringues, ainsi que des médicaments pour anesthésier le rongeur, ont été placés dans la zone de travail.
Un champ chirurgical jetable doit également être placé pour contenir les sécrétions et les poils de rongeurs si nécessaire. Trois gerbilles mongoles mâles de six mois de taille et de poids similaires, environ 90 grammes ont été utilisées dans l’expérience. Les procédures à effectuer ultérieurement ont été effectuées sur les yeux droits uniquement.
La cage avec le rongeur est prise et placée à l’intérieur de l’armoire à flux laminaire. Nous ouvrons la boîte, identifions chacune des gerbilles et les pesons sur la balance. Ce sont des animaux inoffensifs mais délicats.
Des gants jetables doivent être portés en tout temps. Pour une manipulation correcte, l’opérateur doit utiliser sa main non qualifiée pour la tenir fermement par la queue et, avec la main habile, appuyer doucement avec un pouce et un index derrière les oreilles pour tenir l’animal et avec le petit doigt, tenir la queue. En fonction du poids de l’animal, la quantité d’anesthésie nécessaire pour chacune des gerbilles est calculée.
Une seringue d’un millilitre doit être remplie de kétamine, 50 à plus de 100 milligrammes par kilogramme, et de xylazine, deux milligrammes par kilogramme. Avant d’effectuer la tomographie par cohérence optique, des champs chirurgicaux stériles ont été placés pour protéger l’équipement des sécrétions ou des poils d’animaux. Pendant que l’un des opérateurs tient l’animal, un autre opérateur doit prendre les captures.
L’œil a été photographié au microscope et plusieurs tranches ont été faites du segment intérieur du rongeur. La cornée entière, la chambre antérieure, l’iris, l’angle irido-cornéen et le cristallin, qui fait saillie dans la chambre antérieure peuvent être observés. En outre, des mesures d’épaisseur cornéenne centrale et périphérique ont été prises montrant une épaisseur centrale de 160 micromètres diminuant à environ 110 micromètres dans la périphérie.
Avant d’effectuer le PTK laser excimer, des champs chirurgicaux stériles ont été placés pour protéger l’équipement des sécrétions ou des poils d’animaux. Entre 60 et 62 micromètres d’épaisseur cornéenne ont été ablés à un diamètre de trois millimètres. La cornée a été photographiée pour évaluer les changements morphologiques immédiats.
Sur cette photo, on peut voir, le globe oculaire de l’œil droit de la gerbille. Une surface irrégulière du globe oculaire normal est observée. B, photographie prise cinq minutes après la réalisation de la PTK montrant que la surface cornéenne présente des irrégularités.
Voir la preuve de l’ulcère cornéen coloré à la fluorescéine. Sur l’OCT, la flèche droite marque la zone où les détritus se sont accumulés au centre et la flèche gauche marque le bord de l’ulcère cornéen. La méthode de sacrifice utilisée dans cette expérience était l’utilisation d’une chambre de dioxyde de carbone.
Ils ont été sacrifiés à différents intervalles de temps et l’énucléation du globe oculaire normal et post-opératoire a été effectuée 24 et 96 heures après la chirurgie pour observer la cicatrisation cornéenne. Chaque globe oculaire énucléé a été placé dans du formaldéhyde et traité par un pathologiste. Plusieurs sections, mesures et photographies ont été prises.
Histologiquement, l’épaisseur cornéenne est constituée par celle obtenue par OCT, et il y a un amincissement progressif vers la périphérie. C’est parce que les couches d’épithélium et de fibres stromales diminuent à la périphérie. La cornée de gerbille mongole a les mêmes couches que l’épithélium antérieur stratifié humain avec quatre à six couches de cellules représentant 28% de l’épaisseur totale de la cornée.
Couche de Bowman, stroma représentant 66% de l’épaisseur totale. Cela cimente la membrane et l’endothélium. 24 heures après la chirurgie, l’ulcère cornéen peut être vu là où la flèche est marquée.
On a également observé de multiples plaques d’achantholyse épithéliale et de dyskératoce isolée, un infiltrat inflammatoire sous-épithélial aigu, un œdème au niveau stromal. Les changements observés dans la gerbille opérée 96 heures après PTK sont, la présence d’un œdème accru, la désagrégation des fibres stromales et des cellules, et il convient de noter que l’épithélium intérieur était déjà complètement régénéré et ne présentait pas d’infiltrat inflammatoire. La présente étude montre le résultat positif du modèle animal actuel chez les gerbilles et le confirme comme une nouvelle option de recherche dans la cicatrisation des plaies cornéennes.
À ce jour, il n’existe aucune publication analysant en détail l’anatomie et l’histologie de la cornée de gerbille de Mongolie. Par conséquent, nous espérons que ce modèle animal servira de base à de futures recherches scientifiques.
