Estudos prévios mostram que a ceratectomia fotorrefrativa ou PRK transepitelial, é um dos melhores modelos animais para o estudo da cicatrização da córnea, e também, as alterações associadas ao desbridamento histopatológico da córnea epitelial. Trabalhar com gerbos mongóis como modelo animal tem várias vantagens sobre outros roedores. Primeiro, a córnea tem as mesmas camadas histológicas que a córnea humana.
Em segundo lugar, o olho é anatomicamente maior do que o olho de outros roedores, permitindo uma manipulação mais fácil. Toda esta pesquisa foi realizada nas instalações do Centro de Pesquisa e Desenvolvimento em Imunologia e Doenças Infecciosas da Universidad Catolica De Cordoba. O primeiro passo foi desinfetar a superfície de trabalho do gabinete de fluxo laminar.
Para tanto, utilizou-se álcool 70%. Instrumentos cirúrgicos a serem utilizados. Materiais descartáveis, como agulhas e seringas, e medicamentos para anestesiar o roedor, foram colocados na área de trabalho.
Um campo cirúrgico descartável também deve ser colocado para conter secreções e pelos de roedores, se necessário. Três gerbilos mongóis machos de seis meses de idade de tamanho e peso semelhantes, aproximadamente 90 gramas foram usados no experimento. Os procedimentos a serem realizados posteriormente foram realizados apenas no olho direito.
A gaiola com o roedor é retirada e colocada dentro do gabinete de fluxo laminar. Passamos a abrir a caixa, identificar cada um dos gerbos e pesá-los na balança. São animais inofensivos, mas delicados.
Luvas descartáveis devem ser usadas em todos os momentos. Para o manuseio correto, o operador deve usar sua mão não habilidosa para segurá-lo firmemente pela cauda e, com a mão habilidosa, pressionar suavemente para baixo com um polegar e um dedo indicador atrás das orelhas para segurar o animal e, com o dedo mínimo, segurar a cauda. Com base no peso do animal, a quantidade de anestesia necessária para cada um dos gerbilos é calculada.
Uma seringa de um mililitro deve ser preenchida com cetamina, 50 sobre 100 miligramas por quilograma, e xilazina, dois miligramas por quilograma. Antes da realização da tomografia de coerência óptica, cortinas cirúrgicas estéreis foram colocadas para proteger o equipamento de secreções ou pelos de animais. Enquanto um dos operadores segura o animal, outro operador deve fazer as capturas.
O olho foi fotografado microscopicamente e várias fatias foram feitas do segmento interior do roedor. Toda a córnea, a câmara anterior, a íris, o ângulo iridocorneano e o cristalino, que se projeta para a câmara anterior podem ser observados. Além disso, foram realizadas medidas de espessura corneana central e periférica, mostrando uma espessura central de 160 micrômetros diminuindo para aproximadamente 110 micrômetros na periferia.
Antes da realização do excimer laser PTK, cortinas cirúrgicas estéreis foram colocadas para proteger o equipamento de secreções ou pelos de animais. Entre 60 e 62 micrômetros de espessura corneana foram ablados com o diâmetro de três milímetros. A córnea foi fotografada para avaliar alterações morfológicas imediatas.
Nesta fotografia, pode ser visto, o globo ocular do olho direito gerbil. A, superfície irregular do globo ocular normal é observada. B, fotografia tirada cinco minutos após a realização da PTK mostrando que a superfície corneana apresenta irregularidades.
Veja evidências da úlcera de córnea corada com fluoresceína. Na OCT, a seta para a direita marca a área onde os detritos se acumularam no centro e a seta para a esquerda marca a borda da úlcera de córnea. O método de sacrifício utilizado neste experimento foi através do uso de uma câmara de dióxido de carbono.
Eles foram sacrificados em diferentes intervalos de tempo e a enucleação do globo ocular normal e dos globos oculares pós-cirúrgicos foi realizada em 24 e 96 horas após a cirurgia para observar a cicatrização da córnea. Cada globo ocular enucleado foi colocado em formaldeído e processado por um patologista. Múltiplas seções, medidas e fotografias foram tiradas.
Histologicamente, a espessura da córnea consiste na obtida pela OCT, e há um afinamento progressivo em direção à periferia. Isso ocorre porque as camadas de epitélio e fibras estromais diminuem na periferia. A córnea gerbil mongol tem as mesmas camadas que o epitélio anterior estratificado humano, com quatro a seis camadas de células representando 28% da espessura total da córnea.
Camada de Bowman, estroma representando 66% da espessura total. Isso cimenta membrana e endotélio. Às 24 horas após a cirurgia, a úlcera de córnea pode ser vista onde a seta é marcada.
Também foram observadas múltiplas manchas de acantólise epitelial e disqueratocis isoladas, infiltrado inflamatório subepitelial agudo, edema ao nível do estromal. As alterações observadas no gerbil operado 96 horas após a PTK são, presença de edema aumentado, desagregação de fibras e células estromais, devendo-se ressaltar que o epitélio interior já estava completamente regenerado e não apresentava infiltrado inflamatório. O presente estudo mostra o resultado positivo do modelo animal atual em gerbilos e confirma-o como uma nova opção de pesquisa na cicatrização de feridas corneanas.
Até o momento, não há publicações que analisem, em detalhes, a anatomia e a histologia da córnea gerbil mongol. Portanto, esperamos que este modelo animal seja a base para futuras investigações científicas.
