Frühere Studien zeigen, dass die photorefraktive Keratektomie oder transepitheliale PRK eines der besten Tiermodelle für die Untersuchung der Hornhautheilung ist, und auch für die Veränderungen, die mit dem histopathologischen Debridement der Epithelhornhaut verbunden sind. Die Arbeit mit mongolischen Rennmäusen als Tiermodell hat mehrere Vorteile gegenüber anderen Nagetieren. Erstens hat die Hornhaut die gleichen histologischen Schichten wie die menschliche Hornhaut.
Zweitens ist das Auge anatomisch größer als das Auge anderer Nagetiere, was eine einfachere Manipulation ermöglicht. All diese Forschungen wurden in den Einrichtungen des Zentrums für Forschung und Entwicklung in Immunologie und Infektionskrankheiten der Universidad Catolica De Cordoba durchgeführt. Der erste Schritt bestand darin, die Arbeitsfläche des Laminar-Flow-Schranks zu desinfizieren.
Zu diesem Zweck wurde 70% Alkohol verwendet. Zu verwendende chirurgische Instrumente. Einwegmaterialien wie Nadeln und Spritzen sowie Medikamente zur Betäubung des Nagetiers wurden im Arbeitsbereich platziert.
Ein Einweg-Operationsfeld sollte auch platziert werden, um bei Bedarf Sekrete und Nagetierhaare zu enthalten. Drei sechs Monate alte männliche mongolische Rennmäuse ähnlicher Größe und Gewicht, etwa 90 Gramm wurden in dem Experiment verwendet. Die später durchzuführenden Eingriffe wurden nur an den rechten Augen durchgeführt.
Der Käfig mit dem Nagetier wird genommen und in den Laminar-Flow-Schrank gelegt. Wir öffnen die Box, identifizieren jede der Rennmäuse und wiegen sie auf der Waage. Sie sind harmlose, aber empfindliche Tiere.
Einweghandschuhe sollten immer getragen werden. Für die richtige Handhabung sollte der Bediener seine ungelernte Hand benutzen, um es fest am Schwanz zu halten, und mit der fachkundigen Hand sanft mit Daumen und Zeigefinger hinter die Ohren drücken, um das Tier zu halten, und mit dem kleinen Finger den Schwanz halten. Basierend auf dem Gewicht des Tieres wird die Menge an Anästhesie berechnet, die für jede der Rennmäuse benötigt wird.
Eine Ein-Milliliter-Spritze sollte mit Ketamin gefüllt werden, 50 über 100 Milligramm pro Kilogramm, und Xylazin, zwei Milligramm pro Kilogramm. Vor der Durchführung der optischen Kohärenztomographie wurden sterile OP-Abdecktücher platziert, um die Geräte vor Sekreten oder Tierhaaren zu schützen. Während einer der Bediener das Tier hält, muss ein anderer Bediener die Fänge übernehmen.
Das Auge wurde mikroskopisch fotografiert und es wurden mehrere Scheiben vom inneren Segment des Nagetiers gemacht. Die gesamte Hornhaut, die Vorderkammer, die Iris, der iridokorneale Winkel und die Linse, die in die Vorderkammer hineinragt, können beobachtet werden. Zusätzlich wurden zentrale und periphere Hornhautdickenmessungen durchgeführt, die eine zentrale Dicke von 160 Mikrometern zeigten, die in der Peripherie auf etwa 110 Mikrometer abnahm.
Vor der Durchführung von Excimer-Laser-PTK wurden sterile chirurgische Abdecktücher platziert, um das Gerät vor Sekreten oder Tierhaaren zu schützen. Zwischen 60 und 62 Mikrometer Hornhautdicke wurden bei einem Durchmesser von drei Millimetern abgetragen. Die Hornhaut wurde fotografiert, um sofortige morphologische Veränderungen zu bewerten.
Auf diesem Foto ist der Augapfel des rechten Auges der Rennmaus zu sehen. A, unregelmäßige Oberfläche des normalen Augapfels wird beobachtet. B, Foto, das fünf Minuten nach der PTK-Durchführung aufgenommen wurde und zeigt, dass die Hornhautoberfläche Unregelmäßigkeiten aufweist.
Siehe Beweise für das Hornhautgeschwür, das mit Fluorescein gefärbt ist. Auf dem OCT markiert der rechte Pfeil den Bereich, in dem sich Detritus in der Mitte angesammelt hat, und der linke Pfeil markiert den Rand des Hornhautgeschwürs. Die in diesem Experiment verwendete Opfermethode war die Verwendung einer Kohlendioxidkammer.
Sie wurden in unterschiedlichen Zeitintervallen geopfert und die Enukleation des normalen Augapfels und die postoperativen Augäpfel wurden 24 und 96 Stunden nach der Operation durchgeführt, um die Hornhautheilung zu beobachten. Jeder enukleierte Augapfel wurde in Formaldehyd gelegt und von einem Pathologen verarbeitet. Es wurden mehrere Schnitte, Messungen und Fotos aufgenommen.
Histologisch besteht die Hornhautdicke aus der durch OCT erhaltenen, und es kommt zu einer fortschreitenden Ausdünnung in Richtung Peripherie. Dies liegt daran, dass die Schichten von Epithel- und Stromafasern in der Peripherie abnehmen. Die mongolische Rennmaushornhaut hat die gleichen Schichten wie das menschliche, geschichtete vordere Epithel mit vier bis sechs Zellschichten, die 28% der Gesamtdicke der Hornhaut ausmachen.
Bowman-Schicht, Stroma, das 66% der Gesamtdicke ausmacht. Dies zementiert Membran und Endothel. 24 Stunden nach der Operation ist das Hornhautgeschwür dort zu sehen, wo der Pfeil markiert ist.
Beobachtete auch mehrere Flecken von epithelialer Achantholyse und isolierten Dyskeratocis, akutem subepithelialem entzündlichem Infiltrat, Ödemen auf Stromaebene. Die Veränderungen, die in der operierten Rennmaus 96 Stunden nach PTK beobachtet wurden, sind das Vorhandensein von erhöhten Ödemen, die Disaggregation von Stromafasern und -zellen, und es sollte beachtet werden, dass das innere Epithel bereits vollständig regeneriert wurde und kein entzündliches Infiltrat darstellte. Die vorliegende Studie zeigt das positive Ergebnis des aktuellen Tiermodells bei Rennmäusen und bestätigt es als neue Forschungsoption in der Hornhautwundheilung.
Bis heute gibt es keine Publikationen, die die Anatomie und Histologie der mongolischen Rennmaushornhaut im Detail analysieren. Daher hoffen wir, dass dieses Tiermodell die Grundlage für zukünftige wissenschaftliche Untersuchungen sein wird.
