Предыдущие исследования показывают, что фоторефракционная кератэктомия, или трансэпителиальная PRK, является одной из лучших животных моделей для изучения заживления роговицы, а также, изменений, связанных с гистопатологической санацией эпителиальной роговицы. Работа с монгольскими песчанками в качестве животной модели имеет ряд преимуществ перед другими грызунами. Во-первых, роговица имеет те же гистологические слои, что и роговица человека.
Во-вторых, глаз анатомически больше, чем глаз других грызунов, что позволяет легче манипулировать. Все эти исследования проводились в помещениях Центра исследований и разработок в области иммунологии и инфекционных заболеваний Католического университета Кордовы. Первым шагом была дезинфекция рабочей поверхности ламинарного проточного шкафа.
Для этого использовалось 70% алкоголя. Хирургические инструменты, которые будут использоваться. Одноразовые материалы, такие как иглы и шприцы, а также препараты для обезболивания грызунов, были помещены в рабочую зону.
Одноразовое хирургическое поле также должно быть размещено, чтобы содержать секреты и волосы грызунов, если это необходимо. В эксперименте использовались три шестимесячных самца монгольских песчанок аналогичного размера и веса, примерно 90 граммов. Процедуры, которые должны были быть выполнены позже, выполнялись только на правых глазах.
Клетка с грызуном берется и помещается внутрь ламинарного проточного шкафа. Приступаем к открытию коробки, идентификации каждой из песчанок и взвешиваем их на весах. Это безобидные, но деликатные животные.
Одноразовые перчатки следует носить постоянно. Для правильного обращения оператор должен использовать свою неквалифицированную руку, чтобы крепко держать ее за хвост, и умелой рукой осторожно надавить большим и указательным пальцами за уши, чтобы держать животное и мизинцем, держать хвост. Исходя из веса животного, рассчитывается количество анестезии, необходимое для каждой из песчанок.
Один миллилитр шприца должен быть заполнен кетамином, 50 свыше 100 миллиграммов на килограмм, и ксилазином, два миллиграмма на килограмм. Перед выполнением оптической когерентной томографии были размещены стерильные хирургические шторы для защиты оборудования от выделений или шерсти животных. В то время как один из операторов держит животное, другой оператор должен взять захват.
Глаз был сфотографирован микроскопически и несколько срезов были сделаны из внутреннего сегмента грызуна. Можно наблюдать всю роговицу, переднюю камеру, радужную оболочку, иридокорневый угол и хрусталик, который выступает в переднюю камеру. Кроме того, были проведены измерения толщины центральной и периферической роговицы, показывающие, что центральная толщина 160 микрометров уменьшается примерно до 110 микрометров на периферии.
Перед выполнением эксимерного лазера ПТК были размещены стерильные хирургические шторы для защиты оборудования от выделений или шерсти животных. От 60 до 62 микрометров толщины роговицы были удалены диаметром три миллиметра. Роговица была сфотографирована для оценки немедленных морфологических изменений.
На этой фотографии видно глазное яблоко песчанки правым глазом. А, наблюдается неправильная поверхность нормального глазного яблока. B, фотография, сделанная через пять минут после выполнения PTK, показывающая, что поверхность роговицы имеет неровности.
См. доказательства язвы роговицы, окрашенной флуоресцеином. На ОКТ стрелка вправо отмечает область, где детрит скопился в центре, а стрелка влево отмечает край язвы роговицы. Метод жертвоприношения, используемый в этом эксперименте, заключался в использовании камеры углекислого газа.
Они приносились в жертву в разные промежутки времени, а энуклеация нормального глазного яблока и послеоперационных глазных яблок выполнялась через 24 и 96 часов после операции для наблюдения за заживлением роговицы. Каждое энуклеированное глазное яблоко помещалось в формальдегид и обрабатывалось патологоанатомом. Было сделано несколько секций, измерений и фотографий.
Гистологически толщина роговицы складывается из полученной ОКТ, и происходит прогрессирующее истончение по направлению к периферии. Это связано с тем, что слои эпителия и стромальных волокон уменьшаются на периферии. Роговица монгольской песчанки имеет те же слои, что и человеческий, стратифицированный передний эпителий с четырьмя-шестью слоями клеток, составляющих 28% от общей толщины роговицы.
Слой Боумена, строма составляет 66% от общей толщины. Это цементирует мембрану и эндотелий. Через 24 часа после операции можно увидеть язву роговицы там, где отмечена стрелка.
Также наблюдаются множественные участки эпителиального ахантолиза и изолированный дискератоцид, острый субэпителиальный воспалительный инфильтрат, отеки на стромальном уровне. Изменения, наблюдаемые у прооперированной песчанки через 96 часов после ПТК, заключаются в наличии повышенного отека, дезагрегации стромальных волокон и клеток, и следует отметить, что внутренний эпителий уже был полностью регенерирован и не присутствовал воспалительного инфильтрата. Настоящее исследование показывает положительный результат текущей животной модели у песчанок и подтверждает его как новый вариант исследования в области заживления ран роговицы.
На сегодняшний день нет публикаций, детально анализирующих анатомию и гистологию роговицы монгольской песчанки. Поэтому мы надеемся, что эта животная модель станет основой для будущих научных исследований.
