Estudios previos demuestran que la queratectomía fotorrefractiva o PRK transepitelial, es uno de los mejores modelos animales para el estudio de la cicatrización corneal, y también, los cambios asociados al desbridamiento histopatológico de la córnea epitelial. Trabajar con jerbos mongoles como modelo animal tiene varias ventajas sobre otros roedores. Primero, la córnea tiene las mismas capas histológicas que la córnea humana.
En segundo lugar, el ojo es anatómicamente más grande que el ojo de otros roedores, lo que permite una manipulación más fácil. Toda esta investigación se llevó a cabo en las instalaciones del Centro de Investigación y Desarrollo en Inmunología y Enfermedades Infecciosas de la Universidad Católica de Córdoba. El primer paso fue desinfectar la superficie de trabajo del gabinete de flujo laminar.
Para este propósito, se utilizó alcohol al 70%. Instrumentos quirúrgicos a utilizar. Se colocaron materiales desechables como agujas y jeringas, y medicamentos para anestesiar al roedor, en el área de trabajo.
También se debe colocar un campo quirúrgico desechable para contener secreciones y pelo de roedor si es necesario. Tres jerbos mongoles machos de seis meses de edad de tamaño y peso similares, aproximadamente 90 gramos fueron utilizados en el experimento. Los procedimientos que se realizarían más tarde se realizaron solo en los ojos derechos.
La jaula con el roedor se toma y se coloca dentro del gabinete de flujo laminar. Procedemos a abrir la caja, identificar cada uno de los jerbos y pesarlos en la balanza. Son animales inofensivos pero delicados.
Se deben usar guantes desechables en todo momento. Para su correcto manejo, el operador debe usar su mano inexperta para sostenerla firmemente por la cola, y con la mano experta, presionar suavemente hacia abajo con un pulgar y el índice detrás de las orejas para sujetar al animal y con el dedo meñique, sujetar la cola. Según el peso del animal, se calcula la cantidad de anestesia necesaria para cada uno de los jerbos.
Una jeringa de un mililitro debe llenarse con ketamina, 50 sobre 100 miligramos por kilogramo, y xilazina, dos miligramos por kilogramo. Antes de realizar la tomografía de coherencia óptica, se colocaron cortinas quirúrgicas estériles para proteger el equipo de secreciones o pelos de animales. Mientras uno de los operadores sostiene al animal, otro operador debe tomar las capturas.
El ojo fue fotografiado microscópicamente y se hicieron múltiples cortes del segmento interior del roedor. Se puede observar toda la córnea, la cámara anterior, el iris, el ángulo iridocorneal y el cristalino, que sobresale en la cámara anterior. Además, se tomaron medidas de espesor corneal central y periférico mostrando un espesor central de 160 micrómetros disminuyendo a aproximadamente 110 micrómetros en la periferia.
Antes de realizar el láser excimer PTK, se colocaron cortinas quirúrgicas estériles para proteger el equipo de secreciones o pelos de animales. Entre 60 y 62 micrómetros de espesor corneal fueron ablacionados con un diámetro de tres milímetros. La córnea fue fotografiada para evaluar los cambios morfológicos inmediatos.
En esta fotografía, se puede ver, el globo ocular del ojo derecho del jerbo. A, se observa una superficie irregular del globo ocular normal. B, fotografía tomada cinco minutos después de la realización de PTK que muestra que la superficie corneal presenta irregularidades.
Ver evidencia de la úlcera corneal teñida con fluoresceína. En la OCT, la flecha derecha marca el área donde se han acumulado detritos en el centro y la flecha izquierda marca el borde de la úlcera corneal. El método de sacrificio utilizado en este experimento fue mediante el uso de una cámara de dióxido de carbono.
Se sacrificaron en diferentes intervalos de tiempo y la enucleación del globo ocular normal y los globos oculares postquirúrgicos se realizaron a las 24 y 96 horas después de la cirugía para observar la curación corneal. Cada globo ocular enucleado se colocó en formaldehído y fue procesado por un patólogo. Se tomaron múltiples secciones, mediciones y fotografías.
Histológicamente, el grosor corneal consiste en el obtenido por OCT, y se produce un adelgazamiento progresivo hacia la periferia. Esto se debe a que las capas de epitelio y fibras estromales disminuyen en la periferia. La córnea del jerbo mongol tiene las mismas capas que el epitelio anterior estratificado humano con cuatro a seis capas de células que representan el 28% del grosor total de la córnea.
Capa de Bowman, estroma que representa el 66% del espesor total. Esto cementa la membrana y el endotelio. A las 24 horas después de la cirugía, la úlcera corneal se puede ver donde se marca la flecha.
También se observaron múltiples parches de achantholysis epitelial y disqueratocis aislada, infiltrado inflamatorio subepitelial agudo, edema a nivel estromal. Los cambios observados en el jerbo operado a las 96 horas después de PTK son, presencia de aumento del edema, desagregación de fibras y células estromales, y cabe destacar que el epitelio interior ya estaba completamente regenerado y no presentaba infiltrado inflamatorio. El presente estudio muestra el resultado positivo del modelo animal actual en jerbos y lo confirma como una nueva opción de investigación en la cicatrización de heridas corneales.
Hasta la fecha, no existen publicaciones que analicen, en detalle, la anatomía e histología de la córnea del jerbo mongol. Por lo tanto, esperamos que este modelo animal sea la base para futuras investigaciones científicas.
