אנו מודים לניפון בסרור, אדריאנה ק. רוזס וילגס, נדב שי וטרבור סורלס על הערותיהם על כתבי היד, ולז'ונגיאן גונג וקיירולוס ברסום על הסיוע הטכני. אנו מודים לאלכס ווילד על התצלומים בהם נעשה שימוש באיור 1. K.V. נתמך על ידי מלגת הדוקטורט של בוהרינג'ר אינגלהיים פונדס. V.J. נתמך בחלקו על ידי NIH T32-MH095246. עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי מענק לאוניברסיטת רוקפלר מהמכון הרפואי ע"ש הווארד יוז באמצעות מלגת ג'יימס ה. גיליאם למחקר מתקדם ל-V.J. חומר זה מבוסס על עבודה הנתמכת על ידי הקרן הלאומית למדע בוגרי תכנית מחקר תחת גרנט לא. NSF DGE-1325261 לוי.ג'יי. כל חוות דעת, ממצאים ומסקנות או המלצות המתבטאים בחומר זה הם של המחברים ואינם משקפים בהכרח את עמדות הקרן הלאומית למדע.

<ol>
	<li>Bhatt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+distribution+and+burden+of+dengue.">The global distribution and burden of dengue.</a> Nature. 496 (7446), 504-507 (2014).</li><li>Rogers, D. J., Wilson, A. J., Hay, S. I., Graham, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+distribution+of+yellow+fever+and+dengue.">The global distribution of yellow fever and dengue.</a> Advances in Parasitology. 62 (05), 181-220 (2006).</li><li>Chouin-Carneiro, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+susceptibilities+of+Aedes+aegypti+and+Aedes+albopictus+from+the+Americas+to+Zika+virus.">Differential susceptibilities of Aedes aegypti and Aedes albopictus from the Americas to Zika virus.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 10 (3), (2016).</li><li>Guerbois, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Outbreak+of+Zika+virus+infection,+Chiapas+State,+Mexico,+2015,+and+first+confirmed+transmission+by+Aedes+aegypti+mosquitoes+in+the+Amercias.">Outbreak of Zika virus infection, Chiapas State, Mexico, 2015, and first confirmed transmission by Aedes aegypti mosquitoes in the Amercias.</a> Journal of Infectious Diseases. 214 (9), 1349-1356 (2016).</li><li>Weaver, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+virus:+history,+emergence,+biology,+and+prospects+for+control.">Zika virus: history, emergence, biology, and prospects for control.</a> Antiviral Research. 130, 69-80 (2016).</li><li>Attardo, G. M., Hansen, I. A., Raikhel, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nutritional+regulation+of+vitellogenesis+in+mosquitoes:+implications+for+anautogeny.">Nutritional regulation of vitellogenesis in mosquitoes: implications for anautogeny.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 35 (7), 661-675 (2005).</li><li>Duvall, L. B., Ramos-Espiritu, L., Barsoum, K. E., Glickman, J. F., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small-molecule+agonists+of+Ae.+aegypti+neuropeptide+Y+receptor+block+mosquito+biting.">Small-molecule agonists of Ae. aegypti neuropeptide Y receptor block mosquito biting.</a> Cell. 176 (4), 687-701 (2019).</li><li>Dimond, J. B., Lea, A. O., Hahnert, W. F., DeLong, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+amino+acids+required+for+egg+production+in+Aedes+aegypti.">The amino acids required for egg production in Aedes aegypti.</a> The Canadian Entomologist. 88 (2), 57-62 (1956).</li><li>Guerrero, D., Cantaert, T., Miss&#233;, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aedes+mosquito+salivary+components+and+their+effect+on+the+immune+response+to+arboviruses.">Aedes mosquito salivary components and their effect on the immune response to arboviruses.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 10, 1-11 (2020).</li><li>Raquin, V., Lambrechts, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+virus+replicates+and+accumulates+in+Aedes+aegypti+salivary+glands.">Dengue virus replicates and accumulates in Aedes aegypti salivary glands.</a> Virology. 507, 75-81 (2017).</li><li>Farjana, T., Tuno, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+blood+feeding+and+host-seeking+behavior+in+Aedes+aegypti+and+Aedes+albopictus+(diptera:+Culicidae).">Multiple blood feeding and host-seeking behavior in Aedes aegypti and Aedes albopictus (diptera: Culicidae).</a> Journal of Medical Entomology. 50 (4), 838-846 (2013).</li><li>Scott, T. W., Takken, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+strategies+of+anthropophilic+mosquitoes+result+in+increased+risk+of+pathogen+transmission.">Feeding strategies of anthropophilic mosquitoes result in increased risk of pathogen transmission.</a> Trends in Parasitology. 28 (3), 114-121 (2012).</li><li>Ross, P. A., Lau, M. J., Hoffmann, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+membrane+feeding+compromise+the+quality+of+Aedes+aegypti+mosquitoes.">Does membrane feeding compromise the quality of Aedes aegypti mosquitoes.</a> PLoS ONE. 14 (11), 1-19 (2019).</li><li>Ross, P. A., Axford, J. K., Richardson, K. M., Endersby-Harshman, N. M., Hoffmann, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintaining+Aedes+aegypti+mosquitoes+infected+with+wolbachia.">Maintaining Aedes aegypti mosquitoes infected with wolbachia.</a> Journal of Visualized Experiments. 2017 (126), 1-8 (2017).</li><li>Briegel, H., Hefti, M., DiMarco, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+metabolism+during+sequential+gonotrophic+cycles+in+large+and+small+female+Aedes+aegypti.">Lipid metabolism during sequential gonotrophic cycles in large and small female Aedes aegypti.</a> Journal of Insect Physiology. 48 (5), 547-554 (2002).</li><li>McMeniman, C. J., Corfas, R. A., Matthews, B. J., Ritchie, S. A. S., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multimodal+integration+of+carbon+dioxide+and+other+sensory+cues+drives+mosquito+attraction+to+humans.">Multimodal integration of carbon dioxide and other sensory cues drives mosquito attraction to humans.</a> Cell. 156 (5), 1060-1071 (2014).</li><li>Pakes, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , (2011).</li><li>Deng, L., Koou, S. Y., Png, A. B., Ng, L. C., Lam-Phua, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mosquito+feeding+system+for+routine+blood-feeding+of+Aedes+aegypti+and+Aedes+albopictus.">A novel mosquito feeding system for routine blood-feeding of Aedes aegypti and Aedes albopictus.</a> Tropical Biomedicine. 29 (1), 169-174 (2012).</li><li>Gunathilaka, N., Ranathunge, T., Udayanga, L., Abeyewickreme, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+blood+sources+and+artificial+blood+feeding+methods+in+rearing+of+Aedes+aegypti+(Diptera:+Culicidae)+for+sterile+insect+technique+and+incompatible+insect+technique+approaches+in+Sri+Lanka.">Efficacy of blood sources and artificial blood feeding methods in rearing of Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) for sterile insect technique and incompatible insect technique approaches in Sri Lanka.</a> BioMed Research International. 2017, 3196924 (2017).</li><li>Costa-da-Silva, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glytube:+a+conical+tube+and+parafilm+M-based+method+as+a+simplified+device+to+artificially+blood-feed+the+Dengue+vector+mosquito,+Aedes+aegypti.">Glytube: a conical tube and parafilm M-based method as a simplified device to artificially blood-feed the Dengue vector mosquito, Aedes aegypti.</a> PLoS ONE. 8 (1), 53816 (2013).</li><li>Carvalho, D. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+production+of+genetically+modified+Aedes+aegypti+for+field+releases+in+Brazil.">Mass production of genetically modified Aedes aegypti for field releases in Brazil.</a> Journal of Visualized Experiments. 83 (83), 1-10 (2014).</li><li>Kogan, P. H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Substitute+blood+meal+for+investigating+and+maintaining+Aedes+aegypti+(Diptera:+Culicidae).">Substitute blood meal for investigating and maintaining Aedes aegypti (Diptera: Culicidae).</a> Journal of Medical Entomology. 27 (4), 1-4 (1990).</li><li>Gonzales, K. K., Hansen, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artificial+diets+for+mosquitoes.">Artificial diets for mosquitoes.</a> International Journal of Environmental Research and Public Health. 13 (12), (2016).</li><li>Baughman, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+highly+stable+blood+meal+alternative+for+rearing+Aedes+and+Anopheles+mosquitoes.">A highly stable blood meal alternative for rearing Aedes and Anopheles mosquitoes.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 11 (12), 0006142 (2017).</li><li>Galun, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+stimuli+and+artificial+feeding.">Feeding stimuli and artificial feeding.</a> Bulletin of the World Health Organization. 36, 590-593 (1967).</li><li>Galun, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+response+in+Aedes+aegypti:+stimulation+by+adenosine+triphosphate.">Feeding response in Aedes aegypti: stimulation by adenosine triphosphate.</a> Science. 142, 1674-1675 (1963).</li><li>Jov&#233;, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+Discrimination+of+Blood+and+Floral+Nectar+by+Aedes+aegypti+Mosquitoes.">Sensory Discrimination of Blood and Floral Nectar by Aedes aegypti Mosquitoes.</a> Neuron. 108, 1-18 (2020).</li><li>Petersen, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+the+age+of+first+blood+meal+and+Zika+virus+infection+on+Aedes+aegypti+egg+production+and+longevity.">The impact of the age of first blood meal and Zika virus infection on Aedes aegypti egg production and longevity.</a> PLoS ONE. 13 (7), 1-15 (2018).</li><li>Sissoko, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Frequent+sugar+feeding+behavior+by+Aedes+aegypti+in+Bamako,+Mali+makes+them+ideal+candidates+for+control+with+Attractive+Toxic+Sugar+Baits+(ATSB).">Frequent sugar feeding behavior by Aedes aegypti in Bamako, Mali makes them ideal candidates for control with Attractive Toxic Sugar Baits (ATSB).</a> PLoS ONE. 14 (6), 0214170 (2019).</li><li>Houseman, J. G., Downe, A. E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+of+measuring+blood+meal+size+and+proteinase+activity+for+determining+the+effects+of+mated+state+of+digestive+processes+of+female+Aedes+aegypti+(L.)+(Diperta:+Culicidae).">Methods of measuring blood meal size and proteinase activity for determining the effects of mated state of digestive processes of female Aedes aegypti (L.) (Diperta: Culicidae).</a> The Canadian Entomologist. 18, 241-248 (1986).</li><li>Redington, B. C., Hockmeyer, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+estimating+blood+meal+volume+in+Aedes+aegypti+using+a+radioisotope.">A method for estimating blood meal volume in Aedes aegypti using a radioisotope.</a> Journal of Insect Physiology. 22 (7), 961-966 (1976).</li><li>Gonzales, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+SkitoSnack,+an+artificial+blood+meal+replacement,+on+Aedes+aegypti+life+history+traits+and+gut+microbiota.">The effect of SkitoSnack, an artificial blood meal replacement, on Aedes aegypti life history traits and gut microbiota.</a> Scientific Reports. 8 (1), 1-14 (2018).</li><li>Klowden, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+endogenous+regulation+of+mosquito+reproductive+behavior.">The endogenous regulation of mosquito reproductive behavior.</a> Experientia. 46 (7), 660-670 (1990).</li><li>Liesch, J., Bellani, L. L., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+and+genetic+characterization+of+neuropeptide+Y-like+receptors+in+Aedes+aegypti.">Functional and genetic characterization of neuropeptide Y-like receptors in Aedes aegypti.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 7 (10), 22486 (2013).</li><li>Frances, S. P., Sithiprasasna, R., Linthicum, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+evaluation+of+the+response+of+Aedes+aegypti+and+Aedes+albopictus+uninfected+and+infected+with+Dengue+virus+to+Deet.">Laboratory evaluation of the response of Aedes aegypti and Aedes albopictus uninfected and infected with Dengue virus to Deet.</a> Journal of Medical Entomology. 48 (2), (2011).</li><li>Dennis, E. J., Goldman, O. V., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aedes+aegypti+mosquitoes+use+their+legs+to+sense+DEET+on+contact.">Aedes aegypti mosquitoes use their legs to sense DEET on contact.</a> Current Biology. 29 (9), 1551-1556 (2019).</li><li>Harrington, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneous+feeding+patterns+of+the+Dengue+vector,+Aedes+aegypti,+on+individual+human+hosts+in+rural+Thailand.">Heterogeneous feeding patterns of the Dengue vector, Aedes aegypti, on individual human hosts in rural Thailand.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 8 (8), 3048 (2014).</li><li>Hol, F. J., Lambrechts, L., Prakash, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BiteOscope,+an+open+platform+to+study+mosquito+biting+behavior.">BiteOscope, an open platform to study mosquito biting behavior.</a> eLife. 9, 1-24 (2020).</li></ol>

למחברים אין מה לחשוף.

עבור יישומי מעבדה רבים, מאכילי ממברנות מלאכותיות מציעים יתרונות ברורים בהשוואה למארחים חיים בכך שהם מאפשרים לחוקרים את היכולת לתפעל ישירות את תוכן הארוחה. למרות ששיטות מרובות זמינות להזנת קרום מלאכותי, השיטה המתוארת כאן מציעה יתרונות בגמישות, עלות ותפוקה. בהשוואה למאכילי קרום מסחריים אחרים, מבחני גליטוב דורשים נפח ארוחה קטן, מה שהופך אותו למנגנון אספקה יעיל עבור ריאגנטים יקרים, כולל תרופות או פתוגנים, על ידי מזעור הנפח הכולל הנדרש7,35. כמו גם מלוחים ללא חלבון וארוחות דם מלאכותיות לקדם engorgement, תרכובות או פתוגנים ניתן להוסיף לכל ארוחה כחלופה תפוקה גבוהה ולא פולשנית זריקות. בנוסף, ניתן לשטוף, להחליף או לשנות בקלות כל רכיב של גליטובה כדי לספק ולכמת סוגי ארוחות מרובים ללא זיהום צולב של מנגנון ההזנה.
כדי לכמת את נפחי הארוחות הנצרכים על ידי יתושים, השיטה המבוססת על פלואורסצנטיות מאפשרת כימות מדויק יותר של גודל הארוחה מאשר שקילה של היתושים לפני ואחרי האכלה. יש לציין כי שיטה זו היא חקירה נקודתית. לעומת זאת, שקילה מאפשרת לשמור על היתושים בחיים לניסויים נוספים. באמצעות קורא צלחות, ניתן לשנות בקלות את השיטה המבוססת על פלואורסצנטיות לכימות תפוקה גבוהה של ארוחות הנצרכות על ידי מאות נקבות בודדות.
כדי להשיג שיעורי הזנה גבוהים, שילוב של רמזים מארחים מספיק חייב להיות נוכח כדי להפעיל את ההתנהגות הנשית המארחת ולמשוך נקבות למאכיל. אם יתושים אינם מצטופפים מתחת לגלייטוב, ייתכן שהארוחה לא תחומם כראוי, או שמשלוח CO2 לא יספיק. הוספת ריח אנושי לפני השטח של הממברנה מגבירה באופן אמין את האטרקטיביות של הממברנה המלאכותית. אם יתושים נצפו מתחת לגליטוב אך אינם מצליחים להאכיל, הרכב הארוחה עשוי להיות אשם. הנקבות אינן רשאיות לאכול אם הארוחה עצמה אינה חמה, הדם ישן מדי, או אם התוספים לארוחה מרתיעים באופן מהותי או גורמים לתגובה כימית לא רצויה36. ATP נוסף גם מגדיל באופן אמין את שיעורי ההזנה וניתן לשנות את קנה המידה עד לריכוז סופי של 2 מ"מ בכל אחד מהמתכונים המסופקים. נקבות לא יכולות להאכיל אם הפרפילם לא נמשך מתוח על פני כובע גליטובה; הפרפילם צריך להיות שקוף באופן אחיד ולא צריך לקרוס, שכן זה מונע מהנקבה להיות מסוגל לנקב ביעילות את הפרפילם עם הסגנון שלה. אם הארוחה דולפת דרך גליטובה לרשת, ייתכן שהפרפילם נקרע במהלך תהליך המתיחה ויש להחליף אותו.
שינוי הרכב הארוחה יכול גם לאפשר לחוקרים לתפעל את משך הזמן הדרוש כדי לנקות את הארוחה מן midgut, כמו גם את ההתנהגות המארחת הבאים מחפש. הארוחות המוצגות כאן דורשות 24-36 שעות לעיכול7 בדומה לדם שמקורו בבעלי חיים. לאחר האכלה על כל הארוחות האלה, הנקבות ידכאו המארח מחפש במהלך חלון זמן העיכול. מכיוון שארוחת תמיסת מלח חסרה חלבון, הנקבות חוזרות למארחים לאחר פינוי הארוחה. אם חזרה מהירה יותר רצויה, החוקרים יכולים לבחור ארוחות מלוחות חלופיות "סליקה מהירה" המופרשות בכ 6 שעות27. בעוד ההרכב של הארוחה מלוחים המוצג כאן מותאם ישירות להשוות תוצאות עם ארוחת הדם המלאכותית, הארוחה "ניקוי מהיר" תואם באופן הדוק יותר את רמות המלח הפיזיולוגי נמצא בדם בעלי חוליות.
לשיטות המתוארות כאן יש מגבלות שיש לקחת בחשבון לפני בחירת ההסתעפות המתאימה ביותר למטרות הניסוי של החוקר. מדידות הפלואורסצנטין המתוארות אינן מאפשרות שימוש חוזר ביתושים לניסויים נוספים. עם זאת, מדידות משקל ניתן לבצע לפני כימות גודל הארוחה באמצעות מבחני פלואורסצנטין. אם משקל וגודל הארוחה עקביים על פני ניסויים מרובים לארוחה נתונה, משקל יכול לשמש פרוקסי בניסויים עתידיים. יתר על כן, פרוטוקול זה אינו מבחין בין ליקויים בהתנהגות המארחת לעומת האכלת הדם; יתושים המראים ליקויים במציאת מאכיל הממברנה יהיו ירידה בשיעורי האכלה ו / או גודל הארוחה. על ידי הוספת מצלמה כדי להקליט התנהגות לאורך כל ההסתערות, החוקרים יכולים לקבוע אם הנקבות לא יכולות למצוא את גליטובה, או אם הן מוצאות את גליטובה, אך אינן מזינות.
ניתן להתאים את ההסתעפות המתוארת כאן כדי לחקור שאלות רבות יוצאות דופן הקשורות להתנהגות האכלה אצל יתושים. לדוגמה, ניתן לחקור את תרומתם של חלבוני דם ספציפיים על ידי שינוי היחס בין חלבונים מרכיבים או ריכוז החלבון הכולל בארוחה המלאכותית בדם. כדי להעריך את גודל הארוחות מאירועי האכלה מרובים, ניתן להוסיף צבעים עם ספקטרום פלואורסצנטי מובהק כדי להבדיל בין ארוחות ממקורות ייחודיים37. פרוטוקול זה יכול גם להיות שונה כדי לעורר בנפרד את חלקי הפה הפנימיים המזהים דם ומשמשים לבליעה (כלומר, stylet), ואת נספחים כימוסנסוריים כי מגע העור (כלומר, labium, הרגליים) כמו אדמות יתוש להתחיל להאכילדם 36. לדוגמה, אם ליגנדים מתווספים ישירות לארוחה, הם אינם יוצרים קשר עם הלביום והרגליים, שכן הממברנה מנוקבת רק על ידי הסגנון. אם ליגנדים מתווספים לפני השטח החיצוניים של הפרפילם במקום, הם נשארים מופרדים מהארוחה וניתן ליצור קשר עם השפתיים והרגליים36. לבסוף, הקינטיקה המפורטת של התנהגות האכלת הדם אינה מובנת היטב ואת השיטה המוצגת כאן ניתן לשנות לשלב מעקב ברזולוציה גבוהה עם כלי למידת מכונה כדי לחלץ קריאות התנהגותיות של תנועה, יציבה, ודינמיקת האכלה38.
פרוטוקול זה נועד להיות ידידותי למשתמש וחסכוני, עם היכולת לשרת חוקרים המשתמשים במניפולציות תרופתיות וגנטיות כדי לחקור האכלת דם של יתושים והתנהגות שלאחר האכלת דם.

אנו מציגים פרוטוקול להאכלת ארוחות דם מותאמות ליתושים Aedes aegypti באמצעות מאכיל קרום מלאכותי ומדידה מדויקת של נפח הארוחה הנצרכת על ידי כל יתוש בודד. פרוטוקול זה יכול להיות מותאם בגמישות כדי לשנות את התוכן של הארוחה או להשוות את נפח הארוחה הנצרכת על ידי קבוצות ניסיוניות שונות של יתושים.
יתוש Ae. aegypti מאיים על הבריאות העולמית על ידי הפצת פתוגנים הגורמים למחלות כולל קדחת צהובה, קדחת דנגה, chikungunya, ו זיקה1,2,3,4,5. נקבות Ae. aegypti מחייבות מאכילי דם; הם חייבים לצרוך דם בעלי חוליות כדי להשיג את החלבון הדרוש להתפתחות הביצית, וכל מצמד ביצים דורש ארוחתדםמלאה לפחות ממארח אחד 6,7,8. היתוש הנשי נושך לראשונה את המארח שלה על ידי פירסינג העור עם סגנון שלה הזרקת רוק, אשר מכיל תרכובות המפעילות את התגובה החיסונית של המארח9. לאחר מכן היא ניזון על ידי שאיבת דם דרך הסגנון שלה לתוך midgut שלה. בזמן שהיא צורכת ארוחת דם ממארח נגוע, היא עלולה לבלוע פתוגנים המועברים בדם6,8, אשר לאחר מכן נודדים מן midgut של היתוש אל בלוטות הרוק שלה10. יתושים נקבה נגועים בדרך זו יכול להפיץ מחלות על ידי הזרקת פתוגנים יחד עם רוק כאשר נושך המארחים הבאים11,12. הבנה וכימות המנגנונים של התנהגות האכלת דם הם צעדים חיוניים בשליטה על העברת מחלות המועברות על ידי יתושים.
פרוטוקולי מעבדה רבים לגידול יתושים וניסויים משתמשים בבעלי חיים כולל עכברים, שרקנים או בני אדם כמקורדם 13,14,15,16. השימוש בבעלי חיים מטיל חששות אתיים כמו גם דרישות מורכבות להכשרת כוח אדם, דיור וטיפול בבעלי חיים, ועמידה במדיניות הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC). זה גם מגביל את סוגי תרכובות שניתן להעביר יתושים, אשר מגביל את המחקרים שניתן לבצע17.
מנגנוני הזנת דם מלאכותיים, אשר בדרך כלל משתמשים במערכת קרום כדי לדמות עור מארח, הם כלים שימושיים לחקר התנהגויות האכלת דם העוקפות את הצורך בשמירה על מארחים חיים. דם שלם ניתן לרכוש ממספר ספקים ולהאכיל יתושים באמצעות מחומם, מאכילי קרום מלאכותי מעיל מים או מכשירים דומים18,19. בפרוטוקול זה, אנו מדגימים את השימוש במאכילי קרום חד פעמיים קטנים המונחים "גליטובים". מאכיל קרום זה, שפורסם בעבר על ידי קוסטה דה סילבה ואח '(2013)20, ניתן להרכיב בקלות מציוד מעבדה סטנדרטי, מה שהופך אותו אידיאלי עבור אספקת ארוחות דם למספר מתון של יתושים וישיר כדי להגדיל את לבדיקת קבוצות גדולות יותר או ניסוחים ארוחה מרובים. Glytube היא חלופה זולה ויעילה מאכילים מלאכותיים מסחריים אחרים, אשר עשוי לדרוש נפחי ארוחות גדולים יותר והם מתאימים יותר עבור אצווה להאכיל קבוצות גדולות של יתושים על ניסוח ארוחה אחת21.
פרוטוקול זה כולל שני סעיפים: הכנה/אספקה של ארוחות מלאכותיות וכימות הצריכה. בחלק הראשון, גליטובים משמשים כאמצעי יעיל כדי לספק דיאטות מניפולציה. דם שלם עשוי להיות מוחלף בארוחה מלאכותית לחלוטין כדי להשוות את ההשפעות של תחליפי דם במקום ארוחת דם. מתכון מותאם קוגן (1990)22 מוצג כאן, אם כי ניסוחים ארוחה מלאכותית מרובים פותחו23,24. יתר על כן, האכלה היא שיטה פחות פולשנית ופחות מייגעת להציג תרכובות פרמקולוגיות מאשר הזרקה. בשל הנפח הכולל הנמוך הנדרש עבור כל ארוחה (1-2 מ"ל), פרוטוקול זה מספק שיטת משלוח אטרקטיבית כדי להפחית את כמויות ריאגנטים יקרים. Ae. נקבות aegypti צורכות בקלות ארוחות ללא חלבון של תמיסת מלח עם אדנוזין 5′-טריפוספט (ATP)25,26, אשר מספק בסיס למדידת ההשפעות של רכיבי ארוחה אחת. לדוגמה, נוירופפטיד Y כמו קולטן 7 (NPYLR7) ב Ae. aegypti ידוע לתווך דיכוי מחפש מארח לאחר ארוחת דם עשירה בחלבון, וכאשר אגוניסטים NPYLR7 מתווספים לארוחה מלוחה ללא חלבון, יתושים נקבה להפגין דיכוי מחפש מארח דומה לאלה שצרכו דם שלם7.
בחלק השני, צעדים לכימות הנפח של כל ארוחה הנצרכת על ידי יתוש נקבה בודדים מוצגים. בדיקה זו מבוססת פלואורסצנטיות ולוכדת את מעמד ההזנה ברזולוציה גבוהה יותר מאשר שיטות שבהן נקבות מסווגות כ"מוזנות" או "unfed" בהתבסס על הערכה חזותית של התנפחות הבטן בלבד. על ידי הוספת פלואורסצנטין לארוחה לפני האכלה, נפחי הארוחות שנבלעו על ידי אנשים יכולים להיות מכמתים על ידי הומוגניזציה של כל יתוש בצלחת של 96 באר ומדידת עוצמת הפלואורסצנטיות כקריאה. בדיקה זו יכולה למדוד הבדלים במרץ האכלה בתגובה למשתנים כגון הרכב הארוחות או הרקע הגנטי של היתושים. כימות מדויק הוא קריטי עבור גדלי ארוחות ביניים, למשל כאשר הנקבות מוצעות ארוחות תת אופטימליות המכילות הרתעת האכלה או כאשר הם צורכים ארוחות סוכרוז בגדלים משתנים27. אם יתושים ניזונים נדרשים למבחנים התנהגותיים עוקבים לאחר כימות גודל הארוחה, ניתן לחשב את גודל הארוחה במקום זאת על ידי שקילה של נקבות מורדמות בקבוצות ולהעריך את המסה המוגברת הממוצעת לאדם. למרות שפחות מדויק מסימון פלואורסצנטין, שקילה עדיין מספקת הערכה מצטברת של נפח הארוחות ומאפשרת לבחון את השפעת הארוחה על תהליכים במורד הזרם, כגון פוריות או משיכה מארחת עוקבת. בעוד גודל ארוחת הדם משתנה והוא יכול להיות מושפע על ידי מספר עצום של גורמים11,28,29, בלע את גודל הארוחה נמדד עם השיטות המתוארות כאן עולים בקנה אחד עם כימותיםקודמים 7,30,31.

<table><tbody><tr><td>15 mL conical tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-70C</td><td></td></tr><tr><td>3 mm diameter borosilicate solid-glass bead</td><td>MilliporeSigma</td><td>Z143928</td><td>For use for bead mill homogenizer; not required if using pellet pestle grinder</td></tr><tr><td>32 oz. high-density polyethylene (HDPE) plastic cup</td><td>VWR</td><td>89009-668</td><td>Example mosquito container used for feeding assays shown; alternate options can be used</td></tr><tr><td>50 mL conical tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-49A</td><td></td></tr><tr><td>96-well black polystyrene plate</td><td>ThermoFisher</td><td>12-566-09</td><td></td></tr><tr><td>96-well PCR plate sealing film</td><td>Bio-Rad</td><td>MSB1001</td><td>Alternate options can be used</td></tr><tr><td>96-well PCR plates</td><td>Bio-Rad</td><td>HSP9621</td><td>Alternate options can be used</td></tr><tr><td>Adenosine 5&amp;prime;-triphosphate (ATP) disodium salt hydrate</td><td>MilliporeSigma</td><td>A6419</td><td></td></tr><tr><td>Albumin (human serum)</td><td>MilliporeSigma</td><td>A9511</td><td></td></tr><tr><td>Aluminum foil</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-213</td><td>Alternate options can be used to block light entering fluorescein container</td></tr><tr><td>Balance</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-911</td><td>Alternate options can be used</td></tr><tr><td>Bead mill homogenizer</td><td>Qiagen</td><td>85300</td><td>Not required if using pellet pestle grinder</td></tr><tr><td>Cotton ball</td><td>Fisher Scientific</td><td>22456880</td><td>For nectar-feeding; alternate options can be used</td></tr><tr><td>Defibrinated sheep blood</td><td>Hemostat Laboratories</td><td>DSB100</td><td>Alternate options can be used</td></tr><tr><td>Drosophila CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; fly pad</td><td>Tritech Research</td><td>MINJ-DROS-FP</td><td>Alternate options can be used</td></tr><tr><td>Fluorescein</td><td>MilliporeSigma</td><td>F6377</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescence plate-reader</td><td>ThermoFisher</td><td>VL0000D0</td><td>Alternate options can be used</td></tr><tr><td>Gamma-globulin (human blood)</td><td>MilliporeSigma</td><td>H7379</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>MilliporeSigma</td><td>G7893</td><td></td></tr><tr><td>Hemoglobin (human)</td><td>MilliporeSigma</td><td>G4386</td><td></td></tr><tr><td>Laboratory wrapping film - parafilm</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-374</td><td></td></tr><tr><td>Magnetic stirrer</td><td>Fisher Scientific</td><td>90-691</td><td>Alternate magnetic stirrers can be used</td></tr><tr><td>Microcentrifuge for 96-well plate</td><td>VWR</td><td>80094-180</td><td>Alternate options can be used</td></tr><tr><td>Microcentrifuge Tubes</td><td>MilliporeSigma</td><td>2236412</td><td>Alternate options can be used</td></tr><tr><td>Pellet pestle grinder</td><td>VWR</td><td>KT749521-1500</td><td>Not required if using bead mill homogenizer</td></tr><tr><td>Phosphate buffered solution (PBS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BW17-516F</td><td>Optional</td></tr><tr><td>Razor blades</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-640</td><td>Alternate options can be used, such as a lathe for better consistency of cutting</td></tr><tr><td>Rubber bands</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Silicone tubing</td><td>McMaster Carr</td><td></td><td>Needed if using a fly pad for CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; delivery</td></tr><tr><td>Sodium bicarbonate (NaHCO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;)</td><td>Fisher Scientific</td><td>S233</td><td></td></tr><tr><td>Sodium chloride (NaCl)</td><td>MilliporeSigma</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>Stir bars</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-512</td><td>Alternate magnetic stir bars can be used</td></tr><tr><td>Translucent polypropylene storage box with removable lid</td><td></td><td></td><td>Example box used for feeding assays shown</td></tr><tr><td>Vortex mixer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Water bath</td><td></td><td></td><td>Alternate heating device may be used</td></tr><tr><td>White 0.8 mm polyester mosquito netting</td><td>American Home &amp;amp; Habit Inc.</td><td>F03A-PONO-MOSQ-M008-WT</td><td>Alternate options can be used</td></tr></tbody></table>

feeding and quantifying animal-derived blood and artificial meals in aedes aegypti mosquitoes

נקבות ממין יתושים מסוימים יכולות להפיץ מחלות תוך נשיכת מארחי בעלי חוליות כדי להשיג ארוחות דם עשירות בחלבון הנדרשות להתפתחות ביצים. במעבדה, חוקרים יכולים לספק ארוחות דם שמקורן בבעלי חיים ומלאכותיות ליתושים באמצעות מאכילי קרום, המאפשרים מניפולציה של הרכב הארוחות. כאן, אנו מציגים שיטות להאכלת דם וארוחות דם מלאכותיות ליתושים Aedes aegypti וכימות הנפח הנצרך על ידי נקבות בודדות.
האכלה ממוקדת וכימות של ארוחות מלאכותיות /דם יש שימושים נרחבים, כולל בדיקת ההשפעות של מרכיבי ארוחה על התנהגות יתושים ופיזיולוגיה, אספקת תרכובות פרמקולוגיות ללא הזרקה, והדבקת יתושים עם פתוגנים ספציפיים. הוספת צבע פלואורסצנטי לארוחה לפני האכלה מאפשרת כימות גודל הארוחה הבאים. נפח הארוחה הנצרכת על ידי יתושים ניתן למדוד גם לפי משקל, אם הנקבות ישמשו מאוחר יותר לניסויים התנהגותיים, או על ידי הומוגניזציה של נקבות בודדות בצלחות 96 באר ומדידת רמות פלואורסצנטיות באמצעות קורא צלחת כמו בדיקת נקודת קצה. כימות גודל הארוחה יכול לשמש כדי לקבוע אם שינוי מרכיבי הארוחה משנה את נפח הארוחה לבלוע או אם צריכת הארוחה שונה בין זני יתושים. כימות מדויק של גודל הארוחה הוא קריטי גם למבחנים במורד הזרם, כגון אלה המודדים השפעות על משיכה מארחת או על פוריות. השיטות המוצגות כאן יכולות להיות מותאמות עוד יותר כדי לעקוב אחר עיכול הארוחות במהלך הימים או לכלול סמנים בולטים מרובים שנוספו לארוחות שונות (כמו צוף ודם) כדי לכמת את הצריכה של כל ארוחה על ידי יתוש אחד.
שיטות אלה מאפשרות לחוקרים לבצע לבדו מדידות תפוקה גבוהה כדי להשוות את נפח הארוחות הנצרך על ידי מאות יתושים בודדים. כלים אלה יהיו אפוא שימושיים באופן נרחב לקהילת חוקרי היתושים למענה על שאלות ביולוגיות מגוונות.

איור 1 מציג סכמטי להרכבת ה-Glytube, ואילו איור 2 מציג סקירה כללית של העיצוב הניסיוני למדידת גודל הארוחה באמצעות ההסתעפות המבוססת על פלואורסצנטיות המתוארת כאן. איור 3 מספק מדידות מייצגות של גודל ארוחות פלואורסצנטיות מניסוי להזנת דם. איור 4, איור 5 ואיור 6 ממחישים מדגם של שאלות ביולוגיות שניתן לטפל בהן באמצעות פרוטוקול זה. היישומים של הפרוטוקול הם נרחבים וכוללים שינוי הרכב ארוחות הדם, האכלת תרכובות תרופתיות, כימות מדויק של ארוחות דם תת אופטימליות או ארוחות צוף קטנות יותר, והשוואת התנהגות האכלה על פני גנוטיפים יתושים.
כדי ליצור עקומה סטנדרטית לחישוב נפח הארוחות, קריאות הפלואורסצנטיות מותוות מבארות הייחוס הייעודיות שכל אחת מהן מכילה יתוש לא מזוהה ונפח ידוע של הארוחה עם 0.002% פלואורסצנטין(איור 3A). קריאות פלואורסצנטיות מהבארות הנותרות, המכילות יתושים מקבוצת הביקורת השלילית של יתושים לא משוחדים או מקבוצת היתושים הניסיונית שהציעה ארוחה, מושווים לעקומה סטנדרטית זו כדי לכמת את נפח הארוחות (μL) הנצרך על ידי כל יתוש(איור 3B). כדי לאמת את הקריאות הבסיסיות במבחן זה, יש לאשר כי יתושים מקבוצת הביקורת השלילית unfed אינם מוקצים ערך חיובי של μL הנצרך (איור 3B, שמאל). למרות שלכל הנקבות בקבוצת הניסוי הוצעה ארוחת הדם, חלק מהיתושים האכילו(איור 3B, אמצע)וחלקם לא (איור 3B, נכון). תוצאה זו מוכיחה כי ניתן לקבל שני סוגים של נתונים מפרוטוקול זה: 1) אחוז הנשים הכוללות הניזנות מארוחה נתונה, ו -2) הנפח שנבלע על ידי הנקבות הניזונים מארוחה נתונה.
פרוטוקול זה יכול לשמש כדי לספק ולכמת ארוחות עם קומפוזיציות חלבון שונות. איור 4A,B מציג נתונים שנאספו באמצעות ארוחות עם פלואורסצנטין נוסף. שיעור היתושים שהאכילו ונפח הארוחות שהם בלעו, בהתאמה, חושבו מקריאות הפלואורסצנטיות. קריאות אלה רגישות מאוד ומאפשרות כימות מדויק של μL, אך יש להן מגבלה שלא ניתן להשתמש ביתושים לניסויים חיים עתידיים. איור 4C,D מציג נתונים שנאספו מניסוי עצמאי עם יתושים שקיבלו ציון של מזון או unfed על ידי העין לאחר שהוצעו להם ארוחות ללא פלואורסצנטין. גודל הארוחה חושב כמשקל ממוצע / נקבה מקבוצות של 5 יתושים. למרות שמדידות משקל אלה רגישות פחות ממדידות פלואורסצנטיות, הן מאפשרות לנקבות להתאושש ולהשתמש בהן לניסויים חיים נוספים. שיעור היתושים הניזונים יכול להשתנות בימים ניסיוניים שונים, כפי שמשתקף באיור 4A ובאיור 4C.
איור 5 מראה את הנפח הנצרך של ארוחות המכילות תרופות המווסתות התנהגות של מארח יתושים. בניסויים אלה, הנקבות הוצעו דם, מלוחים + ATP, או מלוחים + ארוחות ATP עם 100 מיקרומטר של אגוניסט קולטן NPY Y2 האנושי, TM30338. תרופה זו משנה התנהגות המארח מחפש באמצעות הפעלה של Ae. aegypti NPY כמו קולטן 7. מדידת גודל הארוחות היא קריטית עבור הפרשנות של ניסויים כדי להעריך את ההשפעה של תרופה זו על התנהגות לאחר האכלת דם כי זה מאפשר לחוקר לחשב את המינון הנצרך על ידי כל נקבה.
בדוגמאות הקודמות הוזנו הנקבות בדם או בארוחות דם חלופיות, שכולן הביאו לארוחות של 3-5 מיקרומטר(איור 3, איור 4, איור 5). ניתן להשתמש בפקודה מבוססת פלואורסצנטיות זו גם למדידת גדלי ארוחות קטנים יותר ו/או משתנים יותר שלא ניתן להבחין בהם במדויק ממדידות המשקל הקבוצתי הממוצעות. באיור 6, אותו פרוטוקול כימות פלואורסצנטי שימש למדידת התנהגות האכלת צוף על ידי החלפת גליטוב לכדור צמר גפן רווי ב-10% סוכרוז המכיל 0.002% פלואורסצנטין. סוכרי צוף לא ניתן להציג ב- Glytube assay כי הנקבות לא יכול לזהות את נוכחותם של סוכרים צוף עם סגנון ולא ליזום האכלה27. נתונים אלה מאפשרים לחוקר לקבוע כי ארוחות הסוכר קטנות באופן עקבי מארוחות דם, בהתאם לעבודההקודמת 34 (איור 6).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61835/61835fig1v2.png"> איור 1: הגדרת שיטת גליטוב המשמשת להזנת ארוחות ליתושים. (A)סכמטי של גליטובה מפורקת המשמשת להזנת דם וארוחות אחרות ליתושים. (B)סכמטי של גליטובה הציג על גבי מיכל של יתושים עם מכסה רשת. נקבת יתושים יכולה לנקב דרך מכסה הרשת כדי להאכיל. (ג)תצלומים של הגליטובה (למעלה), ונקבת יתושים Aedes aegypti לפני, במהלך ואחרי האכלה (למטה, משמאל לימין) על ארוחה שנמסרה על ידי גליטובה. יתושים מוצגים פירסינג דרך הרשת מכסה את המיכל שלהם כדי לגשת מאכיל הממברנה. (ד)תצלומים המראים את המראה של יתושים Ae. aegypti נקבה כי הם unfed (שמאל) וכי יש engorged על ארוחת דם מלאכותית (ימין, למעלה) או מלוחים + ארוחת ATP (ימין, למטה). שיטת גליטובה פורסמה בעבר בקוסטה-דה-סילבה ואח ' (2013)20. הצילומים ב-( C) ו- (D) באדיבות אלכס ויילד. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61835/61835fig1v2large.png" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61835/61835fig2v4.png"> איור 2: סכמטי כיצד לכמת את גודל הארוחה לאחר פרוטוקול האכלת הדם של גליטוב. (A)יתושים מוצעים ארוחה עם פלואורסצנטין (למעלה, קבוצת ניסיוני) או לא ארוחה (למטה, קבוצת ביקורת שלילית unfed). (B)יתושים בודדים מתווספים לצלחת של 96 באר לאחר סיום ניסוי ההאכלה. (C) עקומה סטנדרטית נוצרת באמצעות כמויות ידועות של ארוחה המכילה 0.002% פלואורסצנטין. (D)יתושים הם הומוגניים כדי לשחרר את כל פלואורסצנטין נצרך, ורמות פלואורסצנטיות בכל באר מכמתים באמצעות קורא צלחת. שיטת כימות פלואורסצנטיות זו משתנה מ- Liesch et al. (2013)34. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61835/61835fig2v4large.png" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61835/61835fig3v2.png"> איור 3: ניסוי האכלת דם של גליטובה עם כימות מבוסס פלואורסצנטין. (A)מדידות עקומה סטנדרטיות שהתקבלו מהבארות שבהן יתוש מקבוצת הביקורת unfed התווסף לכמות ידועה של ארוחה המכילה 0.002% פלואורסצנטין (סולם ציר y = יחידות שרירותיות). (ב)נפח הארוחה מחושב באמצעות קריאות פלואורסצנטיות לנקבות בקבוצת הביקורת unfed (שמאל, שחור, n = 40), הקבוצה הניסיונית שניזונה מדם (אמצע, אדום, n = 37), וקבוצת הניסוי שלא ניזון מדם (ימין, אדום, n = 23). כל נקודה מייצגת מדידה של נקבה בודדת. הנתונים מוצגים כחציון עם טווח. מכתבים מצביעים על קבוצות שונות סטטיסטית, מבחן קרוסקל-וואליס עם ההשוואה המרובת של דאן, p<0.01. נתונים אלה פורסמו ב Jové et al. (2020)27. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61835/61835fig3v5large.png" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61835/61835fig4v2.png"> איור 4: כימות ארוחות עם הרכב חלבונים שונה. לנקבות הוצעו ארוחות של דם כבשים (אדום), דם מלאכותי עם חלבוני דם אנושיים (קוגן (1990)22) (כתום), או מלוחים ללא חלבון + ארוחת ATP (אקווה)7. (A)אחוז הנקבות שניזונו מציון באמצעות קריאות פלואורסצנטיות. כל נקודה מייצגת קבוצה של 12-16 נקבות. הנתונים מוצגים כחציבונים עם טווחים, n = 12. (B) נפח הארוחה מחושב באמצעות קריאות פלואורסצנטיות. כל נקודה מייצגת מדידה של נקבה בודדת במשפט אחד מאיור 4A. הנתונים מוצגים כחציבונים עם טווחים, n = 12. (ג)אחוז הנקבות ספוג לחלוטין לאחר הזנת קרום מלאכותי, הבקיע על ידי העין. כל נקודה מייצגת את אחוז הנקבות המחולקות מקבוצות של 20-30 נקבות. הנתונים מוצגים כחציבונים עם טווחים, n = 23. (D)מידות הארוחה הבקיע כמשקל / נקבה לאחר מצב האכלה היה הבקיע על ידי העין. משקולות חושבו כממוצע של קבוצות של 5 יתושים. הנתונים מוצגים כחציבונים עם טווחים, n = 23. A–D: אותיות מצביעות על קבוצות שונות סטטיסטית, מבחן קרוסקל-וואליס עם ההשוואה המרובות של דאן, p<0.05. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61835/61835fig4v5large.png" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61835/61835fig5v2.png"> איור 5: כימות ארוחות בתרכובות תרופתיות. נקבות צורכות ארוחות באותו גודל של דם כבשים (אדום), מלוחים + ATP (אקווה), מלוחים + ATP + 100 מינון מיקרומטר של אגוניסט קולטן NPY Y2 אנושי TM30338 (כחול כהה). נפח הארוחות מחושב באמצעות קריאות פלואורסצנטיות. כל נקודה מייצגת מדידה של נקבה בודדת. הנתונים מוצגים כחציבונים עם טווחים, n = 12. מכתבים מצביעים על קבוצות שונות סטטיסטית, מבחן קרוסקל-וואליס עם ההשוואה המרובת של דאן, p<0.05. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61835/61835fig5v5large.png" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61835/61835fig6v2.png"> איור 6: כימות ארוחות צוף קטנות יותר. (A)סכמטי של מבחני האכלת צוף. (B) נפח הארוחה מחושב באמצעות קריאות פלואורסצנטיות עבור נקבות מסוג בר הציע ארוחות של מים או (כחול, n = 36) או 10% סוכרוז (ירוק, n = 53), כל אחד עם 0.002% פלואורסצנטין, בצריף האכלה מבחנים. כל נקודה מייצגת מדידה של נקבה בודדת. הנתונים מוצגים כחציון עם טווחים. מכתבים מצביעים על קבוצות שונות סטטיסטית, מבחן מאן-וויטני, p<0.05. נתונים אלה פורסמו ב Jové et al. (2020)27. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61835/61835fig6v5large.png" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td colspan="4">ארוחת דם מלאכותית</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>ריכוז תמיסת מלאי (מ"ג/מ"ל)</td>
			<td>נפח של פתרון מלאי בארוחה (μL / מ"ל)</td>
			<td>ריכוז ארוחה סופי (מ"ג/מ"ל)</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="4">רכיבי חלבון*</td>
		</tr>
<tr>
<td>γ-גלובולין</td>
			<td>50</td>
			<td>300</td>
			<td>15</td>
		</tr>
<tr>
<td>המוגלובין</td>
			<td>35</td>
			<td>230</td>
			<td>8</td>
		</tr>
<tr>
<td>אלבומין (שם)</td>
			<td>300</td>
			<td>340</td>
			<td>102</td>
		</tr>
<tr>
<td>סה"כ חלבון</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>125</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="4">רכיבים שאינם חלבונים</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>ריכוז פתרון מלאי (mM)</td>
			<td>נפח של פתרון מלאי בארוחה (μL / מ"ל)</td>
			<td>ריכוז הארוחה הסופית (mM)</td>
		</tr>
<tr>
<td>נקלה (נקל)</td>
			<td>במניית γ גלובולין</td>
			<td>-</td>
			<td>5-10</td>
		</tr>
<tr>
<td>נהקו3
</td>
			<td>במניית γ גלובולין</td>
			<td>-</td>
			<td>120</td>
		</tr>
<tr>
<td>Atp</td>
			<td>200</td>
			<td>5</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>מים</td>
			<td>-</td>
			<td>125</td>
			<td>-</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="4">*רכיבי החלבון מוכנים בתמיסת מלאי של מים מזוקקים כפולים, למעט γ-גלובולין, המומסים ב-400 מ"מ NaHCO3 וכוללים כמות משתנה של NaCl (2-4%) במוצר.</td>
		</tr>
</tbody></table>טבלה 1: מתכון להכנת ארוחות דם מלאכותיות (מותאם מקוגן (1990)22). דם מלאכותי מורכב מרכיבי חלבון ולא חלבון המצויים באופן קבוע בדם אנושי ומספק את האפשרות לשנות את היחסים בין רכיבים אלה. יתושים יכולים לייצר ביצים לאחר האכלה עלדםמלאכותי 7,22.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td colspan="4">ארוחה מלוחה</td>
		</tr>
<tr>
<td>רכיב</td>
			<td>ריכוז פתרון מלאי (mM)</td>
			<td>נפח של פתרון מלאי בארוחה (μL / מ"ל)</td>
			<td>ריכוז הארוחה הסופית (mM)</td>
		</tr>
<tr>
<td>נקלה (נקל)</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
<tr>
<td>נהקו3
</td>
			<td>400</td>
			<td>300</td>
			<td>120</td>
		</tr>
<tr>
<td>Atp</td>
			<td>200</td>
			<td>5</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>מים</td>
			<td>-</td>
			<td>695</td>
			<td>-</td>
		</tr>
</tbody></table>טבלה 2: מתכון לארוחה מלוחה עם ATP (מותאם מ-Duvall et al. (2019)7). ניתן להשתמש בארוחות מלוחות נטולות חלבונים כדי לספק תרכובות מעניינות ליתושים ועדיין לחקות את התפזרות הבטן המתרחשת לאחר האכלת הדם, אך מבלי לעורר את התפתחות הביצית המתרחשת כאשר חלבונים נבלעים.

Watch this Scientific Journal Video about Feeding and Quantifying Animal-Derived Blood and Artificial Meals in Aedes aegypti Mosquitoes at JoVE.com

Feeding and Quantifying Animal-Derived Blood and Artificial Meals in Aedes aegypti Mosquitoes

מטרת פרוטוקול זה היא לספק ארוחות דם שמקורן בבעלי חיים ומלאכותיות ליתושים Aedes aegypti באמצעות מאכיל קרום מלאכותי ולכמת במדויק את נפח הארוחה שנבלעה.

האכלה וכימות של דם שמקורו בבעלי חיים וארוחות מלאכותיות יתושים Aedes aegypti

Females of certain mosquito species can spread diseases while biting vertebrate hosts to obtain protein-rich blood meals required for egg development. In ...

feeding-quantifying-animal-derived-blood-artificial-meals-aedes

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Feeding and Quantifying Animal-Derived Blood and Artificial Meals in Aedes aegypti Mosquitoes

7.7K Views.  The Rockefeller University. מטרת פרוטוקול זה היא לספק ארוחות דם שמקורן בבעלי חיים ומלאכותיות ליתושים Aedes aegypti באמצעות מאכיל קרום מלאכותי ולכמת במדויק את נפח הארוחה שנבלעה.

Video: Feeding and Quantifying Animal-Derived Blood and Artificial Meals in Aedes aegypti Mosquitoes

Alphavirus Transducing System:  Tools for Visualizing Infection in Mosquito Vectors

Alphavirus transducing systems (ATSs) are important tools for expressing genes of interest (GOI) during infection. ATSs are derived from cDNA clones of mosquito-borne RNA viruses (genus Alphavirus; family Togaviridae). The Alphavirus genus contains about 30 different mosquito-borne virus species. Alphaviruses are enveloped viruses and contain single-stranded RNA genomes (~11.7 Kb). Alphaviruses transcribe a subgenomic mRNA that encodes the structural proteins of the virus required for encapsidation of the genome and maturation of the virus. Alphaviruses are usually highly lytic in vertebrate cells, but persistently infect susceptible mosquito cells with minimal cytopathology. These attributes make them excellent tools for gene expression in mosquito vectors. The most common ATSs in use are derived from Sindbis virus (SINV). The broad species tropism of SINV allows for infection of insect, avian, and mammalian cells8. However, ATSs have been derived from other alphaviruses as well9,10,20. Foreign gene expression is made possible by the insertion of an additional viral subgenomic RNA initiation site or promoter. ATSs in which an exogenous gene sequence is positioned 5' to the viral structural genes is used for stable protein expression in insects. ATSs, in which a gene sequence is positioned 3' to the structural genes, is used to trigger RNAi and silence expression of that gene in the insect.
ATSs have proven to be valuable tools for understanding vector-pathogen interactions, molecular details of viral replication and maintenance infectious cycles3,4,11,19,21. In particular, the expression of fluorescent and bioluminescent reporters has been instrumental tracking the viral infection in the vector and virus transmission5,14-16,18. Additionally, the vector immune response has been described using two strains of SINV engineered to express GFP2,9.
Here, we present a method for the production of SINV containing a fluorescent reporter (GFP) from the cDNA infectious clone. Infectious, full-length RNA is transcribed from the linearized cDNA clone. Infectious RNA is introduced into permissive target cells by electroporation. Transfected cells generate infectious virus particles expressing the GOI. Harvested virus is used to infect mosquitoes, as described here, or other host species (not shown herein). Vector competence is assessed by detecting fluorescence outside the midgut or by monitoring virus transmission7. Use of a fluorescent reporter as the GOI allows for convenient estimation of virus spread throughout a cell culture, for determination of rate of infection, dissemination in exposed mosquitoes, virus transmission from the mosquito and provides a rapid gauge of vector competence.

Methods for using alphavirus transducing systems to express fluorescent reporters in vitro and in adult mosquitoes are described. This technique may be adapted to express any protein of interest in lieu of or in addition to a reporter.

מערכת Alphavirus Transducing: כלי המאפשר הדמיה זיהום ווקטורים יתוש

Alphavirus transducing systems (ATSs) are important tools for expressing genes of interest (GOI) during infection.  ATSs are derived from cDNA clones of ...

Protocol for Mosquito Rearing (A. gambiae)

This protocol describes mosquito rearing in the insectary. The insectary rooms are maintained at 28&deg;C and ~80% humidity, with a 12 hr. day/night cycle. For this procedure, you'll need mosquito cages, 10% sterile sucrose solution, paper towels, beaker, whatman filter paper, glass feeders, human blood and serum, water bath, parafilm, distilled water, clean plastic trays, mosquito food (described below), mosquito net to cover the trays, vacuum, and a collection chamber to collect adults.

Protocol for Mosquito Rearing A. gambiae

This video illustrates the general techniques used to rear Anopheles gambiae in the laboratory. The methods for caring for laboratory mosquitoes are demonstrated through all stages of the organism's life cycle from larvae to pupae to blood-feeding adults.

פרוטוקול לגידול יתושים (א gambiae)

This protocol describes mosquito rearing in the insectary. The insectary rooms are maintained at 28&deg;C and ~80% humidity, with a 12 hr. day/night ...

Biology

Reproducible dsRNA Microinjection and Oviposition Bioassay in Mosquitoes and House Flies

Synthetic dsRNAs, used to induce RNA interference, may have dose dependent phenotypic effects. These effects are difficult to define if the dsRNAs are delivered using a non-quantitative method. Accurate delivery of known quantities of nucleic acids or other chemicals is critical to measure the efficacy of the compound being tested and to allow reliable comparison between compounds.
Here we provide a reproducible, quantitative microinjection protocol that ensures accurate delivery of specific doses of dsRNA, reducing the mortality typically induced by injection injury. These modifications include the addition of Rhodamine B, a graduated injection needle, and an improved recovery method borrowed from Isoe and Collins. This method allows calculation of dose responses and facilitates comparisons between compounds. Versions of this method have been successfully used on three genera of mosquitoes as well as house flies to assess the reduction in fecundity resulting from gene silencing of ribosomal RNA transcripts.
This protocol provides strategies to reduce several challenges of small insect microinjection. Together, mechanical delivery of dsRNAs accompanied by visual verification, identification of effective locations for delivery, and inclusion of a post-injection recovery period ensure accurate dosing and low injury mortality. This protocol also describes an oviposition bioassay for uniform determination of effects on fecundity.

This protocol describes a microinjection methodology that we have standardized and used for several years to deliver specific quantities of nucleic acids directly to the hemolymph of mosquitoes and house flies. This protocol results in minimal injection mortality and allows dose correlated measurements of fecundity.

DsRNA לשחזור Microinjection, ההטלה Bioassay של יתושים וזבובים הבית

Synthetic dsRNAs, used to induce RNA interference, may have dose dependent phenotypic effects. These effects are difficult to define if the dsRNAs are ...

Environment

Vector Competence Analyses on Aedes aegypti Mosquitoes using Zika Virus

The procedures presented describe a generalized methodology to infect Aedes aegypti mosquitoes with Zika virus under laboratory conditions to determine the rate of infection, disseminated infection, and potential transmission of the virus in the mosquito population in question. These procedures are widely utilized with various modifications in vector competence evaluations globally. They are important in determining the potential role that a given mosquito (i.e., species, population, individual) may play in the transmission of a given agent.

Vector Competence Analyses on Aedes aegypti Mosquitoes using Zika Virus

The presented protocol can determine the vector competence of Aedes aegypti mosquito populations for a given virus, such as Zika, in a containment setting.

וקטור יכולת ניתוחים על יתושים Aedes aegypti באמצעות וירוס זיקה

The procedures presented describe a generalized methodology to infect Aedes aegypti mosquitoes with Zika virus under laboratory conditions to determine ...

Experimental Viral Infection in Adult Mosquitoes by Oral Feeding and Microinjection

Mosquito-borne viruses (MBVs), which are infectious pathogens to vertebrates, are spread by many mosquito species, posing a severe threat to public health. Once ingested, the viruses must overcome the mosquito midgut barrier to reach the hemolymph, from where they might potentially spread to the salivary glands. When a mosquito bites, these viruses are spread to new vertebrate hosts. Similarly, the mosquito may pick up different viruses. In general, only a tiny portion of viruses may enter the salivary glands via the gut. The transmission efficiency of these viruses to the glands is be affected by the two physical barriers found in different mosquito species: midgut barriers and salivary glands barriers. This protocol presents a method for virus detection in salivary glands of Aedes aegypti&#39;s&#160;following oral feeding and intrathoracic injection infection. Furthermore, determining whether the guts and/or salivary glands hinder viral spread can aid in the risk assessments of MBVs transmitted by Aedes aegypti.

This methodology, which included oral feeding and intrathoracic injection infection, could effectively assess the influence of midgut and/or salivary gland barriers on arbovirus infection.

זיהום ויראלי ניסיוני ביתושים בוגרים על ידי האכלה אוראלית ומיקרו-הזרקה

Mosquito-borne viruses (MBVs), which are infectious pathogens to vertebrates, are spread by many mosquito species, posing a severe threat to public ...

Forced Salivation As a Method to Analyze Vector Competence of Mosquitoes

Vector competence is defined as the potential of a mosquito species to transmit a mosquito-borne virus (mobovirus) to a vertebrate host. Viable virus particles are transmitted during a blood meal via the saliva of an infected mosquito. Forced salivation assays allow determining the vector potential on the basis of single mosquitoes, avoiding the use of animal experiments. The method is suitable to analyze a large number of mosquitoes in one experiment within a short period of time. Forced salivation assays were used to analyze 856 individual mosquitoes trapped in Germany, including two different Culex pipiens pipiens biotypes, Culex torrentium as well as Aedes albopictus, which were experimentally infected with Zika virus (ZIKV) and incubated at 18 &#176;C or 27 &#176;C for two and three weeks. The results indicated the lack of vector competence of the different Culex taxa for ZIKV. In contrast, Aedes albopictus was susceptible to ZIKV, but only at 27 &#176;C, with transmission rates similar to an Aedes aegypti laboratory colony tested in parallel.

For efficient control of mosquito borne virus transmission, the knowledge of the vector potential of respective mosquitoes is of particular interest. We describe forced salivation as a method to analyze vector competence of Aedes albopictus and three different Culex taxa for the transmission of Zika virus.

הכריחו ריור כשיטה לנתח מיומנות וקטור של יתושים

Vector competence is defined as the potential of a mosquito species to transmit a mosquito-borne virus (mobovirus) to a vertebrate host. Viable virus ...

A Blood-Free Diet to Rear Anopheline Mosquitoes

Malaria research requires large-scale breeding and production conditions for mosquitoes (Anopheles spp.) in captivity. The sustainable and reliable production of mosquitoes is currently inhibited by the supply of fresh vertebrate blood. Alternatives to blood are required to promote efficient control strategies for malaria and other vector borne diseases that are transmitted by blood feeding insects. With this in mind, artificial liquid diets were formulated as substitutes for fresh vertebrate blood. Herein we report a blood-free artificial liquid diet that delivers feeding rates similar to blood and mimics the physiological effects of a fresh vertebrate blood meal. The diet induces ovarian and egg maturation of Anopheles mosquitoes and also produces good larval survival and development of functional adults. The formulated blood-free liquid diet is an important advance towards sustainable mosquito breeding in captivity and will reduce the maintenance costs of mosquito colonies and eliminate the need for fresh vertebrate blood.

A protocol is presented for formulation of a blood-free artificial diet to feed Anopheles mosquitoes in captivity. This diet has a similar performance to vertebrate blood and triggers oogenesis and egg maturation and produces viable adult progeny.

דיאטה ללא דם ליתושים Anopheline אחוריים

Malaria research requires large-scale breeding and production conditions for mosquitoes (Anopheles spp.) in captivity. The sustainable and reliable ...

Improved Fecundity and Fertility Assay for Aedes aegypti using 24 Well Tissue Culture Plates (EAgaL Plates)

Mosquitoes represent a significant public health problem as vectors of various pathogens. For those studies that require an assessment of mosquito fitness parameters, in particular egg production and hatch rates at the individual level, conventional methods have put a substantial burden on investigators due to high labor intensity and laboratory space requirements. Described is a simple method using 24 well tissue culture plate with agarose in each well and digital imaging of each well to determine egg numbers and hatch rates at an individual level with substantially reduced time and space requirements.

Improved Fecundity and Fertility Assay for Aedes aegypti using 24 Well Tissue Culture Plates EAgaL Plates

Described is a time and space-saving method to count eggs and determine hatch rates of individual mosquitoes using 24 well tissue culture plates, which can substantially increase the scale and speed of fecundity and fertility assays.

מבחני פוריות ופוריות משופרים עבור Aedes aegypti באמצעות 24 צלחות תרבית רקמה באר (צלחות EAgaL)

Mosquitoes represent a significant public health problem as vectors of various pathogens. For those studies that require an assessment of mosquito fitness ...

A Bacterial Oral Feeding Assay with Antibiotic-Treated Mosquitoes

The mosquito midgut harbors a highly dynamic microbiome that affects the host metabolism, reproduction, fitness, and vector competence. Studies have been conducted to investigate the effect of gut microbes as a whole; however, different microbes could exert distinct effects toward the host. This article provides the methodology to study the effect of each specific mosquito gut microbe and the potential mechanism.
This protocol contains two parts. The first part introduces how to dissect the mosquito midgut, isolate cultivable bacteria colonies, and identify bacteria species. The second part provides the procedure to generate antibiotic-treated mosquitoes and reintroduce one specific bacteria species.

This article presents a protocol to investigate the effect of individual mosquito gut bacteria, including isolation and identification of mosquito midgut cultivable microbes, antibiotic depletion of mosquito gut bacteria, and reintroduce one specific bacteria species.

תסכולת הזנה דרך הפה חיידקית עם יתושים שטופלו באנטיביוטיקה

The mosquito midgut harbors a highly dynamic microbiome that affects the host metabolism, reproduction, fitness, and vector competence. Studies have been ...

Quantifying Fitness Costs in Transgenic Aedes aegypti Mosquitoes

Transgenic mosquitoes often display fitness costs compared to their wild-type counterparts. In this regard, fitness cost studies involve collecting life parameter data from genetically modified mosquitoes and comparing them to mosquitoes lacking transgenes from the same genetic background. This manuscript illustrates how to measure common life history traits in the mosquito Aedes aegypti, including fecundity, wing size and shape, fertility, sex ratio, viability, development times, male contribution, and adult longevity. These parameters were chosen because they reflect reproductive success, are simple to measure, and are commonly reported in the literature. The representative results quantify fitness costs associated with either a gene knock-out or a single insertion of a gene drive element. Standardizing how life parameter data are collected is important because such data may be used to compare the health of transgenic mosquitoes generated across studies or to model the transgene fixation rate in a simulated wild-type mosquito population. Although this protocol is specific for transgenic Aedes aegypti, the protocol may also be used for other mosquito species or other experimental treatment conditions, with the caveat that certain biological contexts may require special adaptations.

Quantifying Fitness Costs in Transgenic Aedes aegypti Mosquitoes

The present protocol describes how to measure common life parameter data in Aedes aegypti mosquitoes, including fecundity, wing size, fertility, sex ratio, viability, development times, male contribution, and adult longevity. These measurements can be used to assess the fitness of transgenic mosquitoes.

כימות עלויות כושר ביתושים מהונדסים, Aedes aegypti

Transgenic mosquitoes often display fitness costs compared to their wild-type counterparts. In this regard, fitness cost studies involve collecting life ...