פרוטוקול זה מדגים מדידות סטנדרטיות, המשקפות כושר, אצל יתושי aedes aegypti, פרמטרי כושר אלה נבחרו מכיוון שהם משקפים הצלחה במערכת הרבייה, פשוטים למדידה, ומדווחים בדרך כלל בספרות. כדי להתחיל, הניחו את ניירות הביצים במים סטריליים למשך הלילה באזור האינסקטורי כדי לבקוע יתושים מהונדסים ופראיים. אפשרו לזחלים להאכיל אד ליביטום, על ידי מתן מספר טיפות של מזון דגים טחונים.
כדי לוודא שהבוגרים בתולים, הפרידו את הגלמים לפי מין ברגע שהם מגיחים, העבירו את הגלמים למגלשת מיקרוסקופ זכוכית והוציאו עודפי מים עם רקמה כדי לשתק את הגולם. תחת סטריאוסקופ בהגדלה של פי שניים עד פי ארבעה, באמצעות מברשת צבע בעלת קצוות עדינים, מקמו את הגלמים עם הפנים כלפי מעלה. לאחר מכן לנתח חזותית את הזנב עבור הבדלים בצורת האונה איברי המין.
הניחו את הגלמים הזכרים והנקבות בכוסות מים נפרדות להכלה נכונה. כדי לחצות סוג בר או גן מהונדס מניע אחד או גן מניע שני זכרים על מסה עם נקבות בר בתוליות, להוסיף יתושים מורדמים ביחס של חמישה זכרים לנקבה אחת לתוך קרטוני יתושים המכילים כ -150 יתושים. לאחר יומיים-שלושה, ספקו מקור דם על הכלוב כדי להאכיל את הנקבות בהתאם לשיטות הגידול הסטנדרטיות.
מיין את נקבות הדם המוזנות מנקבות שלא ניזונו על ידי סינון חזותי של הבטן שלהן לגודש והשלכת הלא מוזנות חלקית, מוזנות וזכרים. החזירו את הנקבות המאורגנות לכלובים שלהן. לאחר יומיים-שלושה, הניחו את הנקבות הבודדות בתוך צינורות חרוטיים בגודל 50 מיליליטר המרופדים בנייר סינון מסומן מראש בעיפרון.
ממלאים את כל הצינורות בחמישה מיליליטר מי ברז. מניחים חתיכה קטנה של צימוקים או כדור צמר גפן ספוג סוכר על כל צינור חרוט. השאירו את הנקבות במגזר למשך יום עד יומיים ואפשרו להן לבצע אוביפוזיט.
לאחר מכן ספרו את מספר הביצים על כל נייר וחשבו את הפריון הממוצע, כמספר הביצים שנספרו על כל נייר חלקי מספר הנקבות שנבדקו. כדי לייבש את ניירות הביצים, לנקז מים מן הצינורות ולהחזיר אותם לתוך insectory. כדי להקפיא את הנקבות הניזונות מדם ממחקר הצואה שהושלם, הניחו את כלובי היתושים על מינוס 20 מעלות צלזיוס למשך כ-15 דקות.
מנתחים את הכנף השמאלית של כל יתוש, כורתים את מפרק הכנף ובית החזה ומסירים את כל הכנף. בעזרת מלקחיים, הניחו את הכנף שטוחה על מגלשת זכוכית, ולאחר מכן הוסיפו טיפה אחת מתמיסת 15 מיליליטר המכילה 70% אתנול וטיפה אחת של סבון כלים לכנף במגלשה באמצעות פיפטה העברה. לאחר מכן, הוסיפו טיפה אחת של 80% גליצרול לחלקת הכיסוי והניחו אותה על גבי הכנף בתמיסת סבון אתנול.
צלמו את הכנפיים המותקנות על המגלשות באמצעות מצלמה בעלת עדשת 65 מ"מ. השתמש בתוכנת TpsDig כדי לזהות קואורדינטות קרטזיות דו-ממדיות עבור ציוני הדרך. חשב את אורך הכנף ושטחה באמצעות סקריפט R המופיע בכתב היד.
חישוב גודל צנטרויד הכנף, שהוא מדד לגודל, שאינו תלוי סטטיסטית בצורה המוגדרת כשורש הריבועי של סכום המרחקים הריבועים של כל נקודת ציון מנקודת מרכז הכנף בוקעות ביצי F1 בודדות מהניירות שנאספו מנקבות בודדות למיכלי מעדנייה שקופים מפוליפרופילן המכילים 100 מיליליטר מים מעוקרים טריים. ביומיים-שלושה לאחר הבקיעה, הוציאו את ניירות הביצים מהמים והניחו להם להתייבש למשך הלילה. בקעו מחדש את ניירות הביצים באותם מיכלים שבהם בקעו לראשונה.
שלושה עד חמישה ימים לאחר הבקיעה הראשונית, בדקו ויזואלית את הזחלים לאיתור סמן מהונדס. רשום את מספר הזחלים הטרנסגניים החיוביים או השליליים. השליכו את הזחלים השליליים.
חישוב פוריות כמספר הזחלים הטרנסגניים או זחלי הבקרה חלקי המספר הכולל של הביציות. כדי לקבוע את יחס המינים, הוסף את מספר הנקבות או את מספר הזכרים שנאספו לאורך ציר הזמן של המחקר לכל יתוש בוגר בודד. חלק מספר זה במספר הגלמים שנאספו עבור אותו קו יתושים שנוצר על ידי נקבה אחת.
כדי לקבוע את כדאיות הזחלים, הוסף את המספר הכולל של הגלמים שנאספו לאורך ציר הזמן של המחקר לכל יתוש בוגר. חלק מספר זה במספר הזחלים שנספרו לכל יתוש בוגר בודד עבור אותה שורה שנספרה קודם לכן. חישוב התפתחות הזחלים לגלמים כזמן הממוצע להתפתחות הגלמים לאחר הבקיעה.
כדי לקבוע את תרומת הזכר, חצו 50 זכרים טרנסגניים או זכרי ביקורת עם 100 נקבות ביקורת לקרטונים של 64 אונקיות, כך שיהיו 50 זכרים עם 100 נקבות. לאחר ההזדווגות, הציעו ליתושים ארוחת דם, בהתאם לשיטות הגידול הסטנדרטיות. לאחר מכן הפרידו נקבות בודדות חרוטות לחלוטין לצינורות חרוטיים של 50 מיליליטר המרופדים בנייר סינון לבן מסומן מראש.
השאירו את הנקבות למשך יום עד יומיים במגזר ואפשרו להן לבצע ביציות. הניחו לניירות להתייבש בצינורות באזור האינסקטורי למשך חמישה ימים לפחות. השתמש במלקחיים כדי להסיר את הניירות ולהניח אותם לבקיעה.
ביומיים-שלושה לאחר הבקיעה, מוציאים את ניירות הביצים מהמים ומניחים להם להתייבש. בקעו מחדש את ניירות הביצים באותם מיכלים. שלושה עד חמישה ימים לאחר הבקיעה הראשונית, בדקו ויזואלית את הזחלים לאיתור סמן מהונדס.
חשב את תרומת הזכר כמספר הזחלים הטרנסגניים F2 חלקי מספר הזחלים הכולל לכל קו יתושים. העבירו 50 זכרים ו-50 נקבות מסוג בר או גיל מהונדס הותאמו יתושים שאינם ניזונים מדם למתחם מתאים. עקוב אחר מספר היתושים הזכרים והנקבות המתים בכל יום.
חשבו את תוחלת החיים כמספר הימים הממוצע שחלפו לפני שהיתושים מתים על פני הכלובים, תוך השמטת יתושים שמתו מסיבות שאינן אינפורמטיביות. זחלים לגלמים בוגרים וגלמים לזמני התפתחות בוגרים הוערכו באמצעות השוואות פוסט-הוק של קרוסקל-ואליס'אנובה ודאן. ליתושים זכרים מסוג בר היה זמן קצר יותר לגור מאשר לנקבות מסוג בר, בעוד שזכר אחד D7L1 לא היה שונה באופן משמעותי בזמן הרבייה שלהם ביחס לנקבות D7L1.
לנקבות D7L1 לקח זמן רב יותר להגיע לגור מאשר לנקבות מסוג בר, וכך גם לזכרים מסוג D7L1, יחסית לזכרים מסוג בר. באשר לזמן ההתפתחות של הגלמים לבוגרים, נקבות מסוג בר ונקבות D7L1 לא היו שונות באופן משמעותי, זכרים מסוג בר מתרבים מהר יותר מנקבות מסוג בר וזכרי D7L1. נקבות יתושים מסוג בר מעולם לא הגיעו לזמן ההישרדות החציוני שלהן במהלך המחקר.
כל שאר הקבוצות הגיעו להישרדות החציונית שלהן לפני 40 יום, עם הפרדה זמנית ברורה של זמני ההישרדות החציוניים. ליתושי הנוקאאוט D7L1 היה שטח כנף קטן משמעותית מאשר לעמיתיהם מסוג בר, אך לא היו הבדלים בגודל הכנף או הצנטרואיד. יתושים המכילים עותק אחד של קלטת כונן גנים תחת ביטוי של מקדמי ננו או ZPG לא היו בעלי כושר שונה באופן משמעותי בהשוואה לקו העיניים הרחב של היגס, למעט הבולט של יכולת הקיום של הזחלים.
נתוני כושר שנאספו כאן יכולים לשמש ביישומים במורד הזרם, כגון מודלים מתמטיים. עבור מחקרים המעריכים אסטרטגיות בקרה גנטית חדשניות, מחקרי כלוב גדולים יותר בתנאי שדה למחצה יהיו נחוצים לאחר מחקרי הכושר הקטנים המתוארים כאן. מחקרי כושר גופני במעבדה מסייעים לזהות השפעות לא מכוונות של נוקאאוטים או נוק-אאוטים גנטיים.
סילוק חלבון רוק יכול לגרום לעקה התפתחותית, בעוד שהדחף הגנטי בדחיפת הגן יתוש אחד ושניים הראה שיעורי הישרדות נמוכים יותר של הזחלים. מדידת כושר הדחף הגנטי השפיעה מאוד על התמדתו בסימולציה של אוכלוסיות לאחר מידול מתמטי.
