Questo lavoro è stato sostenuto in parte da (1), il Dipartimento della Difesa Breast Cancer Research Program (US Army Medical Research Acquisition Attività) premio # W81XVVH-10-1-0781 a LAL e VE, e (2) la concessione Susan G. Komen Foundation IR122224446 a Lal e VE. Supporto Patologia e di espansione del tessuto è stato gentilmente fornito da Inova Fairfax Dipartimento di Patologia, il dottor Hassan Nayer, il dottor Gita A. Menezes, e il dottor Charles Bechert. Il consenso del paziente e gli appalti del campione è stata sapientemente guidati da Inova Fairfax Hospital coordinatori di ricerca clinica Agrifoglio Gallimore, Heather Huryk, e Emil Kamar.

Tessuto mammario umano è stato raccolto da pazienti arruolati in uno studio di ricerca, con il consenso informato scritto, in seguito Dipartimento della Difesa, George Mason University, e protocolli approvati di Inova Health System Institutional Review Board. 1. Preparare nutrienti Rich Media con fattori di crescita e antibiotici <ol><li> Preparare soluzioni di riserva di insulina, fattore di crescita epidermico (EGF), solfato di streptomicina e gentamicina solfato. <ol><li> Ricostituire insulina in acqua filtrata sterile a una concentrazione finale di 10 mg / ml. Aspirare 10 ml di tipo 1 acqua distillata in una sterile 10 ml siringa monouso. Collegare un filtro da 0,22 micron polietersulfone alla siringa. Versare l&#39;acqua filtrata sterile, in un tubo da 15 ml sterile. </li><li> Aggiungere 10 ml di acqua filtrata sterile per un flaconcino da 100 mg di insulina. Mescolare il contenuto brevemente su un vortex. Conservare il flaconcino dell&#39;insulina sul ghiaccio. Dispensare 450 ml di insulina magazzino Soluzione in etichetta, microprovette sterili e conservare a -20 ° C. L&#39;insulina soluzione madre è stabile fino alla data di scadenza sul flacone. </li><li> Preparare soluzione madre del fattore di crescita epidermico (EGF): Aggiungere 500 ml di acqua sterile a 500 mg FEG (azione 1 mg / mL). Mescolare il contenuto brevemente su un vortex. Conservare il flaconcino FEG sul ghiaccio. <ol><li> Preparare una soluzione madre di lavoro del FEG: Aggiungere 100 ml di soluzione madre FEG a 900 microlitri terreno nutritivo (brodo di lavoro sarà di 0,1 mg / mL). Mescolare il contenuto brevemente su un vortex. Dispensare 50 ml di soluzione di FEG di lavoro stock in etichetta, microprovette sterili e conservare a -80 ° C. NOTA: soluzione madre EGF (1 mg / mL) è stabile per 1 anno a -80 ° C; lavora soluzione madre (0.1 mg / mL) è stabile per 2 mesi a -80 ° C. </li></ol></li><li> Pesare 40 mg di solfato di streptomicina su una bilancia analitica. Posizionare il int streptomicina solfatooa sterili tubo da 15 ml. Aggiungere 4 ml di terreno di coltura. Mescolare il contenuto brevemente su un vortex. La soluzione deve essere leggermente rosa. Conservare a 4 ° C al riparo dalla luce. Soluzione di solfato di streptomicina è stabile per 7 giorni. </li><li> Pesare 20 mg di solfato di gentamicina su una bilancia analitica. Posizionare il solfato di gentamicina in un tubo da 15 ml sterile. Aggiungere 2 ml di terreno di coltura. Mescolare il contenuto brevemente su un vortex. La soluzione deve essere di colore giallo. Conservare a 4 ° C al riparo dalla luce. Soluzione di solfato di gentamicina è stabile per 7 giorni. </li></ol></li><li> Preparare due 200 ml lotti di terreno nutriente addizionato con EGF umano ricombinante (10 ng / ml conc def.), Insulina (10 mcg / ml conc def.), Solfato di streptomicina (100 mcg / ml conc def.) E solfato di gentamicina (20 ug / ml conc def.). <ol><li> Aggiungere mezzo 200 ml di nutrienti una beuta per filtrazione a vuoto equipaggiato con una beuta per filtrazione 0,2 micron polietersulfone e ricevere flacone 250 ml. Aggiungere 20 &amp;# 181; l stock di lavoro FEG, 200 ml brodo di insulina, 2 ml di brodo di streptomicina solfato, e 400 microlitri magazzino gentamicina solfato ai 200 ml di terreno di coltura. Attaccare beuta per filtrazione a vuoto. Filtrare il mezzo. Eliminare il filtro e l&#39;etichetta del pallone come &quot;terreno ricco di sostanze nutritive&quot;. Conservare a 4 ° C per un massimo di 14 giorni. </li></ol></li></ol> 2. Acquisizione dei tessuti e di incassi <ol><li> In sala operatoria, mantenere una tecnica sterile dopo procurare il tessuto del seno. Posizionare il tessuto del seno in un vassoio sterile e coprire il vassoio con pellicola trasparente sterile. <ol><li> Trasportare il tessuto nel vassoio coperto di Radiologia / patologia come richiesto dal vostro istituto. Non aprire il cassetto. Tempi di trasporto variano all&#39;interno delle istituzioni. Tessuto può rimanere vitale in questo vassoio coperto a temperatura ambiente per un massimo di 45 minuti dopo l&#39;escissione. Tuttavia, rapida trasformazione del tessuto in terreno ricco di sostanze nutritive offre le condizioni ottimali per la successiva cultura organoide. </li></ol></li><li> Dissezione dei tessuti lordo per identificare le aree di carcinoma duttale in situ all&#39;interno del tessuto del seno: Utilizzare guanti sterili, lame, bisturi, tessuto coloranti marcatura e aceto durante la dissezione dei tessuti per mantenere la sterilità dei tessuti. <ol><li> Pulire l&#39;area di lavoro con il 70% di etanolo o 1% di candeggina. Aprire i guanti sterili e posizionare l&#39;involucro guanto sul piano di lavoro. Posizionare l&#39;interno del guanto sterile involucro a faccia in su. Indossare i guanti sterili. <ol><li> Pulire la superficie del contenitore del campione con il 70% di etanolo. Rimuovere la pellicola trasparente dal contenitore del campione del tessuto e posizionare il campione sulla confezione guanto. </li></ol></li><li> Immergere due tamponi di cotone con punta nella tintura dei tessuti marcatura. Applicare il colorante alla superficie del tessuto facendo rotolare i tamponi sulla superficie del tessuto. NOTA: Ogni reparto di patologia ha un protocollo di orientamento colore della tintura / tessuto standardizzato. Tissue è etichettato con la tintura per orientare il tessuto in relazione alla sua posizione nel paziente. Il colorante viene cancellato odipinto sul tessuto. Non versare il colorante sul tessuto. Versare il colorante può causare il colorante per eseguire / goccia a goccia in fessure del tessuto confondendo in tal modo l&#39;orientamento dei margini chirurgici. Orientamento tessuto fornisce al chirurgo e patologo con reperi anatomici ad a) descrive il campione di tessuto, e b) determinare la posizione dei margini chirurgici in relazione al tumore. </li><li> Versare aceto bianco distillato (5% di acido acetico) su garze sterili. Asciugare il tessuto tinta con la garza imbevuta di aceto. Eliminare la garza. L&#39;aceto è usato per fissare la marcatura tinture dei tessuti. </li><li> Tagliare il tessuto mammario a fette verticali spesse circa 5 mm. Non tagliare tutto il percorso attraverso il tessuto (Figura 2). Osservare / palpare il tessuto per le aree di calcificazione. Identificare le lesioni DCIS dalla loro impresa caratteristico, pallido aspetto circondato da rossastro, confini gommose che si sentono grintoso (a causa di spicole di calcio). NOTA: In alcuni casi, comedo (brufolo-like) aree possono esserevisto come puntini bianchi, che rappresentano il materiale necrotico dal grande diametro lesioni DCIS. </li><li> Tagliare le aree di carcinoma duttale in situ / tessuto mammario calcificata, tra cui una piccola quantità di tessuto mammario circostante. Posizionare il tessuto del seno in una provetta sterile da 50 ml contenente 20-30 ml di terreno ricco di sostanze nutritive preparato al punto 1. <ol><li> Mescolare il tessuto e medie capovolgendo delicatamente il tubo più volte. Eliminare il medio e aggiungere mezzo fresco. Posizionare il tubo contenente il tessuto e medio in un contenitore coibentato e trasportare il tessuto al laboratorio coltura tissutale. </li></ol></li></ol></li></ol> Cultura 3. Tessuto <ol><li> Lavorando in una cappa di sicurezza biologica, versare il tessuto e una piccola quantità del mezzo nutritivo in una piastra di Petri sterile. Usando un bisturi sterile tagliato via ed eliminare il tessuto fibroso. Tagliare il tessuto del seno in pezzi (organoidi) circa 3 mm 2 (Figura 1C-D). Prova a tagliare il tessuto in modo che ciascun organooid contiene almeno un segmento di condotto distinguibile con stroma circostante. </li><li> Aprire il coperchio del pallone di coltura tissutale. Con una pinzetta sterili o pinze, inserire i organoidi nel pallone. Chiudere il coperchio. Gettare la capsula di Petri. </li><li> Aggiungere 11 ml di terreno ricco di nutrienti privo di siero (preparato al punto 1) al pallone di coltura tissutale. Chiudere il flacone e agitare il pallone in modo che i organoidi e le medie sono distribuiti uniformemente su tutta la superficie pallone (Figura 1E-F). </li><li> Incubare il matraccio a 37 ° C in un umidificata 5,0% di CO 2 ambiente per 2 giorni. Non spostare il pallone durante questo periodo. </li><li> Il giorno 2 dopo incubazione, togliere il pallone dal termostato per controllare la potenziale contaminazione batterica / fungina. Evitare improvvisi, movimenti bruschi, o vorticoso del pallone. Porre il pallone su una fase microscopio invertito. <ol><li> Osservare il mezzo per batteri, lieviti e / o funghi. Se si nota nessuna contaminazione, restituire il pallone incubatore per un addgiorno transi-. Se si nota la contaminazione, scartare il matraccio con il contenuto in un apposito contenitore. </li></ol></li><li> Il giorno 3 dopo incubazione, sostituire il terreno condizionato con terreno fresco. <ol><li> Porre 11 ml di terreno in una provetta sterile a 37 ° C per 20-30 min. Togliere il pallone di coltura di tessuto dal termostato. Senza scomodare i organoidi, rimuovere ed eliminare il supporto nel pallone con una pipetta sierologica sterile. </li><li> Utilizzando una nuova sierologica pipetta sterile, aggiungere 11 ml di mezzo fresco preriscaldata. Ruotare molto delicatamente il pallone di distribuire il mezzo attraverso la superficie matraccio. </li><li> Incubare il matraccio a 37 ° C in un umidificata 5,0% di CO 2 nell&#39;atmosfera. </li></ol></li></ol> 4. Manutenzione del Fondata colonie di cellule organoide / epiteliali <ol><li> Preparare terreno fresco ogni 2 settimane e sostituire il supporto nel pallone di coltura tissutale 3 volte alla settimana. <ol><li> Porre 11 ml di terreno in un contenitore sterile a 37° C per 20-30 min. Togliere la beuta dal termostato. Usando una pipetta sierologica sterili, rimuovere ed eliminare il medium condizionato dal pallone, facendo attenzione a non disturbare i organoidi. </li><li> Utilizzando una nuova sierologica pipetta sterile, aggiungere 11 ml di mezzo fresco preriscaldata. Ruotare molto delicatamente il pallone di distribuire il mezzo attraverso la superficie matraccio. Incubare il matraccio a 37 ° C in un umidificata 5,0% di CO 2 nell&#39;atmosfera. </li></ol></li><li> Dopo 10 - 14 giorni in coltura, rimuovere tutti i pezzi di tessuto nel pallone di coltura che non sono aderenti. <ol><li> Cellule Periodicamente raccolta e / o organoidi dal pallone per la propagazione in nuove fiasche di coltura, per il trapianto di xenotrapianto, o per fenotipica e / o l&#39;analisi molecolare. </li><li> Togliere il pallone di coltura di tessuto dal termostato. Spruzzare il pallone con il 70% di etanolo. Rimuovere l&#39;eccesso di etanolo sul pallone con un tovagliolo di carta pulito che è stato spruzzato con il 70% di etanolo. </li><li> Propagazione organoide: &lt;ol&gt; <li> Aprire il coperchio della muffola e posizionare il coperchio rivolto verso l&#39;alto nella cappa di sicurezza biologica. Sotto la visualizzazione microscopica, individuare il organoide (s) per essere raccolto. Utilizzare le pinzette sterili o pinze per pick-up di un organoide. </li><li> Per propagare la organoide in un nuovo pallone di coltura, posizionare il organoide nel nuovo fiasco. Aggiungere 11 ml di fresco, di medio caldo. Incubare a 37 ° C, in un umidificata al 5% di CO 2 nell&#39;atmosfera come descritto ai punti 3.3 - 3.6.3. Sostituire il terreno di coltura cellulare in coltura tissutale pallone a tre volte alla settimana. </li></ol></li><li> Raccolta delle cellule: <ol><li> Sotto vixualization microscopico diretto, raschiare delicatamente e le cellule aspirare e mammospheres con una pipetta 1000 ml con puntali per pipette sterili monouso. Aspirare le cellule e mezzo circostante. Erogare il cellule / medio in una provetta sterile. </li></ol></li><li> Spin le cellule brevemente un mini-centrifugare a 12.100 xg per 5 sec. Rimuovere e gettare il medium. &lt;ol&gt; <li> Per l&#39;analisi del DNA, congelare immediatamente il pellet di cellule in ghiaccio secco, in un piccolo volume di terreno (10 ml), con una lunga conservazione a -80 ° C. </li><li> Per l&#39;analisi proteomica, lisare le cellule in 10 ml di 8 M urea per la spettrometria di massa o 2x SDS tampone Tris-glicina per blotting / inversione di microarrays della proteina di fase occidentali. In alternativa, far girare le cellule in una citocentrifuga per fare strisci cellulari per l&#39;analisi immunoistochimica. </li></ol></li><li> Dopo la raccolta le cellule da un pallone, rimuovere ed eliminare il supporto rimanente. Aggiungere 11 ml di caldo, terreno ricco di nutrienti freschi. Incubare il matraccio a 37 ° C, in un umidificata al 5% di CO 2 nell&#39;atmosfera. </li></ol></li></ol>

<ol>
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Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Il sistema di coltura qui descritto costituisce un nuovo modello per la generazione che vivono le cellule del seno neoplastiche pre-invasive per gli studi di ricerca di base e traslazionale. In passato, la progressione del cancro al seno pre-maligne è tipicamente stata studiata utilizzando tre metodi differenti. Il primo metodo è istopatologica e analisi genetica di microdissezionate congelati o fissi campioni umani 12-14. Il secondo metodo utilizza modelli murini che contengono noduli alveolari iperplastic...

Proliferazione delle cellule epiteliali entro i confini di dotti mammari e alveoli (carcinoma duttale in situ) è riconosciuto come un precursore obbligato a duttale invasivo e carcinoma mammario lobulare. Tuttavia, i meccanismi molecolari e dinamica delle popolazioni di cellule che consentono la progressione a carcinoma invasivo sono poco conosciuti. Chiarire i meccanismi di sopravvivenza utilizzate da cellule di carcinoma mammario pre-invasive, o qualsiasi tumore pre-invasivo, può rivelare strategie terapeutiche per l&#39;uccisione, o addirittura prevenire, neoplasie pre-invasive 1. Tuttavia, i metodi a basso costo per semplici funzionalmente studiano lesioni pre-invasive umani sono mancati. Sebbene monostrato coltura in vitro di linee cellulari trasformate è un metodo di laboratorio stabilita, il fenotipo e il genotipo di queste linee cellulari immortalizzate riesce ricapitolare lo stato molecolare delle cellule tumorali umane primarie 2. Inoltre, anche la linea cellulare MCF-10A non oncogeno, che Recapitulates 3-D architettura della ghiandola mammaria, non riesce a rappresentare adeguatamente il fenotipo funzionale e le caratteristiche molecolari di pre-invasiva della lesione al seno di un singolo paziente 3,4. Per determinare se le cellule staminali neoplastiche, come in grado di invasione esistevano all&#39;interno del carcinoma duttale in situ (DCIS) popolazione di cellule, abbiamo sviluppato una metodologia per la raccolta e la coltura di tessuto mammario umano sterili al momento dell&#39;intervento chirurgico (Figura 1) 5. Il nostro ex vivo seno sistema di coltura organoide non si basa sulla rottura enzimatica dei tessuti, estratto di membrana basale della matrice, o fibroblasti esaurimento, per isolare e propagare le cellule che formano mammosphere dal fresco duttale mammario umano carcinoma tessuto 6-8. Il nuovo sistema si basa sul principio della cella di flusso / migrazione 5. I dotti mammari discernibili e stroma circostante vengono immersi in un volume minimo di mezzo privo di siero nutriente (solo postanough per coprire i frammenti cassone) per massimizzare lo scambio di gas, con la superficie di taglio del condotto esposta al mezzo di coltura, ma in nessun orientamento specifico nel pallone (Figura 1E-F). Questo sistema di coltura consente alle cellule di migrare dal condotto e nella / sulla stroma e la cultura matraccio autologo. Il mezzo nutriente, integrato solo con Epidermal Growth Factor (EGF), l&#39;insulina, e gli antibiotici, sostiene la crescita di popolazioni cellulari miste provenienti dalla organoide. Il pallone di coltura tissutale ha un coperchio richiudibile rimovibile che permette ai organoidi e / o cellule per essere raccolti senza interrompere l&#39;intero boccetta adiacente organoidi, pur mantenendo un ambiente umidificato sterile.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1024">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:187px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:365px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">Ethanol</td>
			<td style="width:187px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">A405-P</td>
			<td>prepare a 70% solution in Type 1 reagent grade water</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">18 M&#937;-cm water, sterile filtered</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>sterile filtered, Type 1 reagent grade water</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10cc plastic disposable syringe, sterile</td>
			<td style="width:187px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">305482</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.2&#181;m polyethersulfone (PES) syringe filter, sterile</td>
			<td style="width:187px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">194-2520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">15ml polypropylene conical tubes, sterile</td>
			<td style="width:187px;">Fisher</td>
			<td>14-959-49B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">50ml polypropylene conical tubes, sterile</td>
			<td style="width:187px;">Fisher</td>
			<td>05-539-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">1.5ml low retention microcentrifuge tubes,sterile</td>
			<td style="width:187px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">02-681-331</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">nutrient medium, DMEM-F12/HEPES</td>
			<td style="width:187px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">11330-032</td>
			<td>with L-glutamine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insulin, human recombinant</td>
			<td style="width:187px;">Roche</td>
			<td style="width:119px;">11376497001</td>
			<td>10mg/ml stock</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Epidermal Growth Factor (EGF), human recombinant</td>
			<td style="width:187px;">Millipore</td>
			<td style="width:119px;">GF144</td>
			<td>100&#181;g/ml stock</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Streptomycin sulfate</td>
			<td style="width:187px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">S1567</td>
			<td>10mg/ml stock</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gentamicin sulfate</td>
			<td style="width:187px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">G19114</td>
			<td>10mg/ml stock</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Filtration flask and filter top, sterile</td>
			<td style="width:187px;">Millipore</td>
			<td>SCGPU02RE</td>
			<td>0.22&#181;m PES membrane</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">25ml sterile, disposable pipettes</td>
			<td style="width:187px;">Fisher</td>
			<td>4489</td>
			<td>paper-plastic wrapped</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10ml sterile, disposable pipettes</td>
			<td style="width:187px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">4488</td>
			<td>paper-plastic wrapped</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:353px;">Tissue marking dyes (black, blue, red, green, yellow and orange)</td>
			<td style="width:187px;">CDI</td>
			<td style="width:119px;">MD2000</td>
			<td style="width:365px;">after opening use only with single-use, sterile cotton tipped applicators, or use once and discard</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">Cotton tipped applicators, sterile</td>
			<td style="width:187px;">Fisher</td>
			<td>23-400-115</td>
			<td>single use only</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">Gauze pads, 10x10cm, sterile</td>
			<td style="width:187px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">2187</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plastic transfer pipettes, sterile, disposable</td>
			<td style="width:187px;">Samco</td>
			<td>202-20S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;">Vinegar, white distilled</td>
			<td style="width:187px;">household use</td>
			<td></td>
			<td style="width:365px;">5% acetic acid; after opening use only with sterile pipettes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">#10 scalpels, sterile, disposable&#160;</td>
			<td style="width:187px;">Thermo Scientific</td>
			<td>31-200-32&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">petri dish, sterile</td>
			<td style="width:187px;">Fisher</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">TPP 115cm2 flask, with removable lid</td>
			<td style="width:187px;">MidSci</td>
			<td style="width:119px;">90652</td>
			<td>screw cap with filter</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:353px;">CO2 incubator</td>
			<td style="width:187px;">Fisher</td>
			<td>13-998-074</td>
			<td>5% CO2, 37 oC, humidified chamber</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">inverted light microscope</td>
			<td style="width:187px;">Olypmus</td>
			<td>IX51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">8M urea</td>
			<td style="width:187px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">BP169-500</td>
			<td>optional, for mass spectrophotometric analysis of cultured cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">2X SDS tris-glycine buffer</td>
			<td style="width:187px;">Life Technologies</td>
			<td>LC2676</td>
			<td>optional, for proteomic analysis of cultured cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">Cytocentrifuge</td>
			<td style="width:187px;">Thermo Scientific</td>
			<td>A78300003</td>
			<td>optional, for preparing cell smears</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

non-enzymatic, serum-free tissue culture of pre-invasive breast lesions for spontaneous generation of mammospheres

Breast carcinoma duttale in situ (DCIS), per definizione, è la proliferazione delle cellule epiteliali neoplastiche entro i confini del condotto del seno, senza violare la membrana basale collagene. Mentre carcinoma duttale in situ è ​​un precursore non obbligato a tumori al seno invasivi, i meccanismi molecolari e le popolazioni di cellule che permettono la progressione a carcinoma invasivo non sono completamente noti. Per determinare se le cellule progenitrici capaci di invasione esistevano all&#39;interno della popolazione di cellule carcinoma duttale in situ, abbiamo sviluppato una metodologia per la raccolta e la coltura di tessuto mammario umano sterile al momento della chirurgia, senza interruzione enzimatica del tessuto. Tessuto del seno sterile contenente segmenti duttali è raccolto da tessuto mammario asportato chirurgicamente dopo esame patologico di routine. Tessuto contenente DCIS è posto in ricca di nutrienti, antibiotici contenenti, mezzo privo di siero, e trasportato al laboratorio di coltura di tessuti. Il tessuto del seno è più dissected per isolare le zone calcificate. Molteplici pezzi di tessuto mammario (organoidi) sono posti in un volume minimo di mezzo privo di siero in un pallone con un coperchio amovibile e coltivate in un incubatore umidificato CO 2. Popolazioni di cellule epiteliali e fibroblasti emergono dal organoide dopo 10 - 14 giorni. Mammospheres spontaneo formarsi intorno e sul monostrato di cellule epiteliali. Specifiche popolazioni cellulari possono essere raccolte direttamente dal pallone senza interrompere le cellule vicine. Il nostro sistema di coltura di tessuti non-enzimatica rivela affidabile citogeneticamente anormali, invasive cellule progenitrici di nuove lesioni DCIS umani.

Flusso di lavoro per l&#39;approvvigionamento e la coltura sterile carcinoma duttale mammario in situ dei tessuti Sterilità tessuto mammario viene mantenuta dalla sala operatoria al laboratorio di colture cellulari attraverso piccole modifiche in tipico flusso di lavoro patologia ospedale (Figura 1). Tessuto viene trasportato in un contenitore sterile con un coperchio film plastico che consente la valutazione radiologica pur mantenendo la sterilità dei tessuti. Proce...

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Non-enzymatic, Serum-free Tissue Culture of Pre-invasive Breast Lesions for Spontaneous Generation of Mammospheres

Coltura cellulare primaria utilizzando organoidi tessuto intatto fornisce un sistema modello che simula il microambiente multi-cellulare in vivo. Abbiamo sviluppato un primo modello di coltura di tessuti epitelio mammario senza siero che perpetua linee di colture cellulari miste e mostre differenziati morfologia, senza interruzione del tessuto enzimatico. Organoidi seno rimangono vitali per&gt; 6 mesi.

Non enzimatica, siero-libero Tissue Culture delle lesioni mammarie pre-invasive per la generazione spontanea di mammospheres

Breast ductal carcinoma in situ (DCIS), by definition, is proliferation of neoplastic epithelial cells within the confines of the breast duct, without ...

non-enzymatic-serum-free-tissue-culture-pre-invasive-breast-lesions

Research

JoVE Journal

Biology

12.5K Views.  George Mason University.  Coltura cellulare primaria utilizzando organoidi tessuto intatto fornisce un sistema modello che simula il microambiente multi-cellulare in vivo. Abbiamo sviluppato un primo modello di coltura di tessuti epitelio mammario senza siero che perpetua linee di colture cellulari miste e mostre differenziati morfologia, senza interruzione del tessuto enzimatico. Organoidi seno rimangono vitali per> 6 mesi. 