再生医療の臨床フェロー研修グラント（）のためのカリフォルニア工科大学、国立科学財団（MW）、アイリーンPerstein賞（TCM）、米国外科学会（TCM）、アメリカ小児外科学会（：私達は私達の資金源に感謝TCM）、およびダイムの月（TCM）。

1。インジェクションピペットの準備<ol><li>ガラスピペットの分離は15秒（キャリブレーションについては、製造元の指示を参照）内で発生するようにピペットプラーをキャリブレーション。ピペットは、それが分離テーパーを持つことになります。 </li><li>テーパーの初めからピペットの端までの距離が1.05センチメートルに1.04センチメートルになるようにピペットの先端をカット。ピペットの長さは、ピペットのオリフィスの口径に反比例します。注入時の破損を受けやすい弱い先端でも、結果長いピペットを作ることに注意してください。 </li><li>ピペットを作るための次のステップでは、ダイヤモンドシャープホイールの先端をシャープで滑らかなベベルを作成することです。適切なサイズにピペットを切断の時に、ピペットは、多くの場合、ホイールにピペットを配置する際に使用されている必要があります、その先端に自然のベベルで分割されます。このプロセス中に、それは静かにシャープホイールのピペットを休ませ、定期的にピペットはまだホイールに触れている（ベベルがスムーズになると、それはシャープホイールとの接触を失うことになる）を確認するために再評価することが重要です。 </li><li>ベベルがスムーズになると、ピペットの先端を（図1）鮮鋭化されている必要があります。それはもはやシャープホイールに触れていないようにピペットを高める、それが10から50度時計回りに回転させる、と〜10秒間回転するシャープホイールにピペットを取り付けなおします。シャープホイールからピペットを撤回し、今エッジを調べます。このステップでは、通常、鋭いエッジを作成するには、いくつかの小さな調整を繰り返す必要があります。ピペットが長すぎるために、そのエッジに配置されている場合、それは表面に凹凸（図1）を開発する可能性が高くなります。片側が完了したら、上記手順を繰り返すことで、反対側のエッジをシャープに進むことができます。 </li><li>すべての4ミリメートルピペットのテーパーが始まる場所を開始円周線を描画するために永久的なマーカーを使用してください。これら境界は、ボリュームの5ULに対応しています。 </li></ol> （2） 子宮内移植で <ol><li>注射材料（例えば、細胞、ウイルス、等）を準備した後に、注射のために設定することができます。私たちは、次の設定で圧縮空気に接続されているマイクロインジェクターを使用して：（圧力の設定：入力60から80 PSI、40 PSIを埋めるため、8月12日PSI、バランス0 PSIを注入し、0 psiを保持、注入時間100ミリ秒）。 </li><li>インジェクションピペットを滅菌するために、滅菌1 × PBSで2回に続いて70％エタノールで2回清掃してください。ピペットの先端は非常に壊れやすいですので、我々は、注入ピペットをオートクレーブ滅菌することはお勧めしません。 </li><li>注射は、どちらか2.5X - 3.5Xの倍率のルーペや解剖顕微鏡を使用して行うことができます。温暖化の毛布、照明、および必要な手術器具を使用してプロシージャ領域を準備します。 </li><li>妊娠中のマウスを（我々は連続的な流量麻酔のユニットを介して配信イソフルランと酸素を利用する）麻酔。場所でマウスを固定するテープで各肢仰臥位と接辞で加熱パッド上でマウスを置きます。 </li><li>毛皮をクリップ。その後、準備は10％ポビドンヨードアルコールが続く、とブプレノルフィンなどの鎮痛剤などを注入すると、滅菌手術用手袋を腹部着用。 </li><li>下腹部（切開の最も劣る面が入り口に約1cmよりも優れているはず）で1センチメートル切開を加えます。皮膚と筋膜を切開する。筋膜の薄層の直下に、腹部臓器（腸や膀胱）を傷つけないよう注意してください。 </li><li>綿棒を使用して、軽く筋を伸ばすと、切開して妊娠子宮を提供。まず全体の子宮を視覚化を確認​​するために、左右の卵巣を識別することによって胎児の総数を数えます。あなたが注射の準備をしながら胎児は暖かいままになるように進む前に腹腔内に戻って子宮を置きます。 </li><li>あなたが注入を計画して胎児の数のために材料の適切なボリュームを上げて描く。あなたのサンプルを使用してニードルを充填しながら、それは、インジェクターチューブに、サンプルを吸引を避けるために水没ピペットの先端を保つことが重要です。ピペットチップを壊すことなく針を埋めることができるようにチューブまたは直接パラフィルムの一部について：細胞は少量の一般的なので、我々は通常、小さなマイクロ（0.5mLを例）に置きます。 </li><li>ゆっくりとそれぞれの胎児を保持し、注入を計画して胎児（例えば肝臓、腹腔、足、等）の一部を識別する。もし注射を行っている間、それが回転しないように親指と人差し指を使って、羊膜腔内で胎児を安定させる必要があります。静かに十分な損傷を防ぐために、まだそれを安定させるためにしっかりと十分な胎児を保持することが重要です。 </li><li>慎重に子宮、羊膜、および胎児の皮膚を介してピペットを挿入し、標的臓器に。ピペットがシャープである場合、それはこれらの組織を介して簡単に渡す必要があります。ピペットの先端が鈍いの場合は、ウィスコンシン州<html>子宮と羊膜のテンティングに注目しよう。各胎児に必要なボリュームを注入する。それはあなたの動きが挿入、注射、及びピペットの撤退の時に安定であることが不可欠です。 </li><li>目的のボリュームが注入されると、慎重にピペットを撤回。適切に行われれば、材料は羊膜腔や子宮から漏れ出してはいけません。大きな穴が1つは、羊水の漏れによって認識できる羊膜、内に作成されている場合、生存が脅かされている。出産後の注入とuninjected胎児を識別する方法がないので、最後に、出生後の収穫を伴う研究のために、すべての胎児は、技術的に完璧な注射を受ける必要があります。 </li><li>あなたが胎児の肝臓に注射を実行している場合はそれが取り下げ - これがされた後、あなたは時々ピペットの先端に血液が表示されることがありますあなたが正しい位置に確認して、生存には影響を与えません。腹腔内注射を行う場合、わずかに胎児の肝臓の下に目指しています。筋肉内注射では、股関節と大腿骨を識別し、大臀筋を注入するために胎児を位置決めすることができる。最後に、脳室内注射のために、それが適切なターゲットにピペットを指示するために冠状縫合糸を簡単に確認することができます。これらの注射のために、少し大きめの口径のピペットは、ピペットを壊すことなく頭蓋骨を貫通する必要があります。 </li><li>次に、腹腔内に戻って子宮に静かに置きます。それは自分自身でまたはその血管供給の周りねじれていないことを確認してください。手順中に失われた任意の流体を置き換えるために、母親の腹膜腔に滅菌1X PBSを1mLのを提供します。 5から0編組吸収性縫合糸（：Vicryl EX）との2層の切開を閉じます。最初の基本的な腸や膀胱を傷つけることなく、筋膜を閉じて、皮膚を​​閉じます。 </li><li>この時、後の手続きの薬は、鎮痛のために投与することができます。独自の個々のケージにそれぞれ注入された女性を返すと温暖化の毛布の上にケージを置きます。それが直立になるまでマウスを監視する。ケージにベッドを入れて、それは出産後数日まで（ないケージの掃除をすなわちしない）邪魔されるべきではないマウスの施設の静かなエリアにマウスを置きます。動物のための追加のストレスを最小限に抑えることにより、切迫早産の可能性を減少します。 </li><li>もし注射を完了したら、滅菌1 × PBSで2回あなたのピペットをきれいにし、一回で70％エタノール。 </li><li>注入された女性は簡単に彼らがプロシージャから回復している保証するために、毎日観察する必要があります。切開は感染の腫れ、炎症、創傷の分離、および他の徴候を監視する必要があります。必要に応じて術後の鎮痛薬を投与することができる。 </li></ol> 3。代表的な結果： 短期納品に注入された胎児の生存率は、この手法で成功を達成するための主要な制限要因である。材料を注入し、マウスの系統が使用されてに応じて、生存率が異なることがあります。一般的には、E14での野生型マウスに造血細胞の注射は、少なくとも50％のライブ生まれの仔になるはずです。生存率が高いが注射の技術的側面だけでなく、注入されるマウスの両方の特性に応じて可能です。 子宮および羊膜への外傷を最小限に抑えることにより、このプロトコルの最も重要な技術的な側面です。シャープ、小口径のピペットは、注入時の最小限の子宮外傷になります。私たちは、プレハブ針の口径として標準的な注射針を使用することはお勧めしませんが大きすぎると子宮に大きな穴になるだろう。手作りのガラスの注入ピペットは子宮内の注射のために利用することができる唯一の小口径の針です。子宮の穏やかなハンドリングと短い麻酔薬を含め、慎重かつ細心の手術手技は、また最適な結果を得るために重要です。 遺伝的背景などのレシピエントマウスの特定の特性、在胎週数、および産仔数はまた、生存に影響を与える可能性があります。マウスの特定の株は、彼らの遺伝的背景に応じて、切迫早産と妊娠の損失を受けやすくなります。15トランスジェニック動物は、筋肉や神経変性の欠陥で正中開腹術を受けた後に経膣的に胎児を提供する障害能力を持つことができる。8これらの妊娠中の女性は配送が必要な場合があります帝王切開。我々はまた、注入時の在胎週数は生存率に影響を与えることができることを見出した。胎生12日目よりも日付の古い胎児は古い胎児よりも生存率が低いを持っている。最後に、我々は、大きなゴミのサイズが（&gt; 10胎児）注射後の胎児死亡の率が高い傾向にあることを発見した。この手法の技術的側面と注入された胎児の生存率を最大化することができます注入されるマウスの特定の特性の両方に注目。 ve_content&quot;&gt;これらのメソッドが正しく実行されるときは、1つのすべての胎児が注入物質にさらされていることを期待することができます。生後設定と同様に、しかし、 子宮内の細胞やウイルスの配信成功は常にドナー細胞移植や遺伝子が発生しないそれぞれの式、。幹細胞の生着は、例えば、移植細胞の投与量やソースなど、いくつかの要因に依存しています。同様に、ウイルスの形質導入の成功は、部分的に使用されるウイルスベクターの種類によって決定されます。一つは、インパクト子犬生存、細胞の生着、およびウイルス形質導入は、このプロトコルで成功を達成するために多数の要因を理解する必要があります。 <img src="/files/ftp_upload/2303/2303fig1.jpg" alt="図1" /> 図1図は、インジェクションピペット（ステップ1.4）のシャープ化を適切に描写する

<ol>
	<li>Flake, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+X-linked+severe+combined+immunodeficiency+by+in+utero+transplantation+of+paternal+bone+marrow.">Treatment of X-linked severe combined immunodeficiency by in utero transplantation of paternal bone marrow.</a> N Engl J Med. 335, 1806-1810 (1996).</li><li>Wengler, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-utero+transplantation+of+parental+CD34+haematopoietic+progenitor+cells+in+a+patient+with+X-linked+severe+combined+immunodeficiency+(SCIDXI).">In-utero transplantation of parental CD34 haematopoietic progenitor cells in a patient with X-linked severe combined immunodeficiency (SCIDXI).</a> Lancet. 348, 1484-1487 (1996).</li><li>Flake, A. W., Zanjani, E. 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N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+transgene+expression+by+administration+of+a+lentivirus-based+vector+to+the+fetal+circulation+of+immuno-competent+mice.">Long-term transgene expression by administration of a lentivirus-based vector to the fetal circulation of immuno-competent mice.</a> Gene Ther. 10, 1234-1240 (2003).</li><li>Schachtner, S., Buck, C., Bergelson, J., Baldwin, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporally+regulated+expression+patterns+following+in+utero+adenovirus-mediated+gene+transfer.">Temporally regulated expression patterns following in utero adenovirus-mediated gene transfer.</a> Gene Ther. 6, 1249-1257 (1999).</li></ol>

利害の衝突は宣言されません。

50年以上も前、ビリンガム、ブレント、そしてメダウォアは外国のタンパク質に対する免疫寛容を誘導するためにマウスで子宮移植で使用されている。16はその時以来、このテクニックのいくつかのバリエーションは、免疫学、幹細胞生物学の問題に対処するために使用されている。 ここで詳細なプロトコルは、IUTのための最もアクセスのいずれか?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Pipettes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Kimble</td>
<td>71900-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pipette puller</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sutter Instruments Company</td>
<td>Model P-30</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microinjector</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Narishige</td>
<td>IM-300</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pipette sharpener</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sutter Instruments Company</td>
<td>Model BV-10</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

a mouse model of in utero transplantation

子宮内で幹細胞とウイルスの移植は、ヒトの胎児に先天性疾患を治療するための大きな可能性を秘めています。例えば、造血幹細胞の子宮内移植（IUT） で正常にいくつかの他の条件で重症複合免疫不全。1,2の患者を治療するために使用されている、しかし、IUTが成功することなく試みられている。3に、これらの混合の結果を考えると、可用性が幹細胞移植や遺伝子治療の生物学的後遺症を研究するために効率的なモデル非ヒトからこの分野を前進させることが重要です。我々と他の野生型マウス4-7、遺伝性疾患とのそれら両方の子宮内移植造血幹細胞の生着の成功に影響を及ぼす要因を調べるためにIUTのマウスモデルを使用している。8,9胎児の環境もかなりの利点を提供子宮内遺伝子治療での成功。例えば、アデノウイルス10の配信、アデノ随伴ウイルス10は 、胎児へのレトロウイルス11、およびレンチウイルスベクター12,13は、長期的な遺伝子発現による注射部位から遠く離れた複数の臓器の形質導入をもたらした。 子宮内で遺伝子治療は、したがって、そのような筋ジストロフィーや嚢胞性線維症のような単一遺伝子疾患の可能な治療戦略として考えることができる。 IUTのもう一つの潜在的な利点は、特定の抗原に対する免疫寛容を誘導する能力です。として血友病、この蛋白質に対する耐性の早期開発の成果の第IX因子の導入とマウスで見られる。14 潜在的な人間の治療法を検討する上での使用に加えて、IUTのマウスモデルでは、発達と幹細胞生物学の基本的な質問を研究する強力なツールとなります。例えば、一つの誘導または阻害する特異的な遺伝子発現が定義されて妊娠の段階でと発達経路を操作するための様々な小分子を提供することができます。これらの変化の影響は、最初の移植後の種々の時点で評価することができます。さらに、一つは非照射の幹細胞の分化を研究するために胎児の環境に多能性や系統特異的前駆細胞を移植し、ホスト環境を摂動することができます。 IUTのマウスモデルは、すでに免疫学の分野、及び発達と幹細胞生物学の中で数多くの洞察を提供しています。このビデオベースのプロトコルでは、我々はマウス胎児でIUTを実行するためのステップバイステップのアプローチを説明し、重要なステップと、この技術の潜在的な落とし穴を概説。

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A Mouse Model of in Utero Transplantation

のマウスモデル<em&gt;子宮内で</em&gt;移植は、胎児の幹細胞移植や遺伝子治療の潜在的な臨床応用を研究するために使用できる多目的なツールです。このプロトコルでは、我々はこの手法を実行する一般的なアプローチを提示

のマウスモデル子宮内で移植

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of in Utero Transplantation

19.3K ビュー.  University of California. のマウスモデル子宮内で移植は、胎児の幹細胞移植や遺伝子治療の潜在的な臨床応用を研究するために使用できる多目的なツールです。このプロトコルでは、我々はこの手法を実行する一般的なアプローチを提示

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Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed results. However, the cellular and molecular mechanisms of the neotissue development, valve thickening, and stenosis development are not researched extensively. To answer the above questions, we developed a murine heterotopic heart valve transplantation model. A heart valve was harvested from a valve donor mouse and transplanted to a heart donor mouse. The heart with a new valve was transplanted heterotopically to a recipient mouse. The transplanted heart showed its own heartbeat, independent of the recipient&#8217;s heartbeat. The blood flow was quantified using a high frequency ultrasound system with a pulsed wave Doppler. The flow through the implanted pulmonary valve showed forward flow with minimal regurgitation and the peak flow was close to 100 mm/sec. This murine model of heart valve transplantation is highly versatile, so it can be modified and adapted to provide different hemodynamic environments and/or can be used with various transgenic mice to study neotissue development in a tissue engineered heart valve.

In order to understand the cellular and molecular mechanisms underlying neotissue formation and stenosis development in tissue engineered heart valves, a murine model of heterotopic heart valve transplantation was developed. A pulmonary heart valve was transplanted to recipient using the heterotopic heart transplantation technique.

異心臓移植のマウスモデルを用いた肺動脈弁の移植

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

医学

Murine Corneal Transplantation: A Model to Study the Most Common Form of Solid Organ Transplantation

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each year. While several animal models exist for this procedure and mice are the species that is most commonly used. The reasons for using mice are the relative cost of using this species, the existence of many genetically defined strains that allow for the study of immune responses, and the existence of an extensive array of reagents that can be used to further define responses in this species. This model has been used to define factors in the cornea that are responsible for the relative immune privilege status of this tissue that enables corneal allografts to survive acute rejection in the absence of immunosuppressive therapy. It has also been used to define those factors that are most important in rejection of such allografts. Consequently, much of what we know concerning mechanisms of both corneal allograft acceptance and rejection are due to studies using a murine model of corneal transplantation. In addition to describing a model for acute corneal allograft rejection, we also present for the first time a model of late-term corneal allograft rejection.

Mice have been used as a model for studying many forms of transplantation, including corneal transplantation. We describe in this report a murine model for both acute and late-term corneal transplantation.

ネズミ角膜移植：固体臓器移植の最も一般的な形態を研究するためのモデル

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each ...

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic transplantation of ovarian surface and tubal epithelia include intraperitoneal and intrabursal administration of cells. The respective limitations of these methods include poorly defined location of injected cells and limited space volume. Furthermore, they are poorly suited for long-term structural preservation of transplanted organs. To address these challenges, we have developed an alternative approach, which is based on the introduction of cells and tissue fragments into the mouse fat pad. The mouse ovarian fat pad is located in the immediate vicinity of the ovary and uterine tube (aka oviduct, fallopian tube), and provides a familiar microenvironment for cells and tissues of these organs. In our approach fluorescence-labeled mouse and human cells, and fragments of the uterine tube are engrafted by using minimally traumatic dorsal incision surgery. Transplanted cells and their outgrowths are easily located in the ovarian fat pad for over 40 days. Long-term transplantation of the entire uterine tube allows correct preservation of all principle tissue components, and does not result in adverse side effects, such as fibrosis and inflammation. Our approach should be uniquely applicable for answering important biological questions such as differentiation, regenerative and neoplastic potential of specific cell populations. Furthermore, it should be suitable for studies of microenvironmental factors in normal development and cancer.

We describe an ovarian fad pad transplantation assay suitable for studies of normal and transformed epithelia of the female reproductive tract. The mouse fat pad allows transplantation of large tissue fragments, is easily accessible for surgery and imaging, and provides the most favorable native environment for tissues of M&#252;llerian origin.

マウスの卵巣脂肪パッドに移植

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...

Using the Sleeve Technique in a Mouse Model of Aortic Transplantation - An Instructional Video

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the aorta in mice using the sleeve method was short and easy averaging 20 min, permitting studies of iso/allo grafts. The following article describes the aortic transplantation procedure used in our laboratory. The mice were anesthetized with a mixture of 1.5% volume isoflurane and 100% oxygen through a face mask. At this point, the segment of the aorta between the renal arteries and its bifurcation was separated from the vena cava, freely prepared and clampedat the proximal and distal segments with a single silk suture. Prior to the removal of the aorta, a saline solution containing heparin was injected into the inferior vena cava. Then the aorta was cut between the clamps and a saline heparin solution was used to flush the lumen. The sleeve technique with monofilament sutures was used in order to transplant the abdominal aorta in the orthotopic position.

We present an orthotopic aortic transplantation model using the sleeve technique in mice. It is a very rapid anastomosis method, which can be employed in studies of vascular disease.

大動脈弁移植 - 教則ビデオのマウスモデルでスリーブを用いた

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the ...

Mouse Model for Pancreas Transplantation Using a Modified Cuff Technique

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the availability of the widest range of molecular probes and reagents to perform in vivo as well as in vitro studies. Based on our experience with various murine transplantation models, we developed a heterotopic pancreas transplantation model in mice with the intent to analyze mechanisms underlying severe ischemia reperfusion injury-associated early graft damage. In contrast to previously described techniques using suture techniques, herein we describe a new procedure using a non-suture cuff technique. 
In recent years, we have performed more than 300 pancreas transplantations in mice with an overall success rate of &gt;90%, a success rate never described before in mouse pancreas transplantation. The backbone of this non-suture cuff technique for graft revascularization consists of two major steps: (I) pulling the recipient vessel over a polyethylene/polyamide cuff and fixing it with a circumferential ligature, and (II) placing the donor vessel over the everted recipient vessel and fixing it with a second circumferential ligature. The resultant continuity of the endothelial layer results in less thrombogenic lesions with high patency rates and, finally, high success rates.
In this model, arterial anastomosis is achieved by pulling the abdominal aorta of the donor graft over the everted common carotid artery of the recipient animal. Venous drainage of the graft is achieved by pulling the portal vein of the graft over the everted external jugular vein of the recipient. This manuscript provides details and crucial steps of the organ recovery and organ implantation procedures, which will allow researchers with microsurgical skills to perform the transplantation successfully in their laboratories.

Among abdominal solid organ transplantation, pancreatic grafts are prone to develop severe ischemia reperfusion injury-associated graft damage, leading eventually to early graft loss. This protocol describes a model of murine pancreas transplantation using a non-suture cuff technique, ideally suited for analyzing these early, deleterious damages.

変更されたカフを用いた膵臓移植マウス モデル

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the ...

Intravital Microscopy and Thrombus Induction in the Earlobe of a Hairless Mouse

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions between cellular and non-cellular blood components during thrombus formation, reliable studies of the physiology and pathophysiology of thrombosis can only be performed in vivo. Therefore, this article presents an ear model in hairless mice and focuses on the in vivo analysis of microcirculation, thrombus formation, and thrombus evolution. By using intravital fluorescence microscopy and the intravenous (iv) application of the respective fluorescent dyes, a repetitive analysis of microcirculation in the auricle can easily be performed, without the need for surgical preparation. Furthermore, this model can be adapted for in vivo studies of different issues, including wound healing, reperfusion injury, or angiogenesis. In summary, the ear of hairless mice is an ideal model for the in vivo study of skin microcirculation in physiological or pathophysiological conditions and for the evaluation of its reaction to different systemic or topical treatments.

The ear model of the hairless SKH1-Hrhr mouse enables intravital fluorescence microscopy of microcirculation and phototoxic thrombus induction without prior surgical preparation in the examined microvascular bed. Therefore, the ear of the hairless mouse is an excellent in vivo model to study the complex interactions during microvascular thrombus formation, thrombus evolution, and thrombolysis.

ヘアレスマウスの耳たぶにおける生体顕微鏡および血栓誘導

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions ...

Cardiopulmonary Bypass in a Mouse Model: A Novel Approach

As prolonged cardiopulmonary bypass becomes more essential during cardiac interventions, an increasing clinical demand arises for procedure optimization and for minimizing organ damage resulting from prolonged extracorporal circulation. The goal of this paper was to demonstrate a fully functional and clinically relevant model of cardiopulmonary bypass in a mouse. We report on the device design, perfusion circuit optimization, and microsurgical techniques. This model is an acute model, which is not compatible with survival due to the need for multiple blood drawings. Because of the range of tools available for mice (e.g., markers, knockouts, etc.), this model will facilitate investigation into the molecular mechanisms of organ damage and the effect of cardiopulmonary bypass in relation to other comorbidities.

This paper describes how to perform cardiopulmonary bypass in mice. This novel model will facilitate the investigation of the molecular mechanisms involved in organ damage.

マウス モデルにおける心肺バイパス: 新しいアプローチ

As prolonged cardiopulmonary bypass becomes more essential during cardiac interventions, an increasing clinical demand arises for procedure optimization ...

Intraportal Transplantation of Pancreatic Islets in Mouse Model

Pancreatic islet transplantation to reduce hyperglycemia is highly successful in rodents with chemically-induced diabetes. The most common transplantation site in experimental islet transplantation is the kidney capsule. However, as less is known about the interaction of pancreatic islets with blood constituents, it also makes sense to utilize the portal vein approach in experimental islet transplantation.
This protocol demonstrates an intraportal islet transplantation technique in NMRI nude mice. Streptozotocin (180 mg/kg) is injected intraperitoneally to induce hyperglycemia in recipient mice. They are considered as diabetic at a non-fasting blood glucose level greater than 20 mmol/L. One day prior to transplantation, mouse pancreatic islets are isolated from the donor pancreas by collagenase digestion; a minimum of 350 islets are utilized per diabetic recipient. Depending upon the islet isolation yield, two or more donor mice are utilized per recipient. After overnight culture at 37 &#176;C, islets are administered into the recipient liver via the portal vein. After surgery, the mice are protected in red Makrolon houses and observed until are awake. This protocol maintains glycemic control for 120 days in syngeneic mice and 15 days in allogeneic mice.

Pancreatic islet transplantation is a way to achieve normoglycemia in type 1 diabetes. This article focuses on the transplantation technique through the intraportal route to maintain normal glucose levels in diabetic mice.

マウス モデルにおける膵島の門脈内移植

Pancreatic islet transplantation to reduce hyperglycemia is highly successful in rodents with chemically-induced diabetes. The most common transplantation ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

ワイヤー図法を使用してマウスの腸間膜動脈の等尺性収縮力測定

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Veno-Venous Extracorporeal Membrane Oxygenation in a Mouse

The use of extracorporeal membrane oxygenation (ECMO) has increased substantially in recent years. ECMO has become a reliable and effective therapy for acute as well as end-stage lung diseases. With the increase in clinical demand and prolonged use of ECMO, procedural optimization and prevention of multi-organ damage are of critical importance. The aim of this protocol is to present a detailed technique of veno-venous ECMO in a non-intubated, spontaneously breathing mouse. This protocol demonstrates the technical design of the ECMO and surgical steps. This murine ECMO model will facilitate the study of pathophysiology related to ECMO (e.g., inflammation,bleeding and thromboembolic events). Due to the abundance of genetically modified mice, the molecular mechanisms involved in ECMO-related complications can also be dissected.

Here we present a protocol describing the technique of veno-venous extracorporeal membrane oxygenation (ECMO) in a non-intubated, spontaneously breathing mouse. This murine model of ECMO can be effectively implemented in experimental studies of acute and end-stage lung diseases.

マウスで静脈-静脈体外膜型人工肺

The use of extracorporeal membrane oxygenation (ECMO) has increased substantially in recent years. ECMO has become a reliable and effective therapy for ...