재생 의학 임상 연구원 교육 그랜트를 위해 캘리포니아 공과 대학 (), 국립 과학 재단 (MW), 이레네 Perstein 수상 (TCM), 외과의 미국 대학 (TCM), 미국 소아 외과 협회 (: 우리는 자금 출처를 인정하고 싶습니다 TCM), 그리고 천 (TCM)의 월.

1. 사출 Pipettes의 준비 <ol><li> 유리 피펫의 분리가 15 초 (교정에 대한 제조 업체의 지침을 참조) 내에서 발생하는 등 피펫 끌어당기는을 보정합니다. 피펫은 구분 테이퍼를해야합니다. </li><li> 테이퍼의 처음부터 피펫의 끝에 거리는 1.05cm에 1.04cm입니다 같은 피펫의 끝을 잘라. 피펫의 길이는 피펫 오리피스의 구경에 반비례합니다. 이상 피펫을 만드 는게 아니라 주사 중에 파손 더 쉽습니다 약한 팁 결과는 점에 유의하십시오. </li><li> 피펫을 만드는 다음 단계는 다이아몬드가는 바퀴에 팁을 선명하여 부드러운 베벨을 만드는 것입니다. 적절한 크기로 피펫을 절단 당시, 피펫은 종종 바퀴에 피펫을 게재할 때 사용해야 그 끝에 자연 베벨과 함께 나옵니다. 이 과정에서, 그것은 부드럽게 선명하게 바퀴에 피펫을 휴식과 정기적으로 피펫 아직도 바퀴를 감동이다 (베벨이 부드럽게되면서, 그것은 선명하게 바퀴와 접촉을 잃게됩니다) 확인을 다시 평가하는 것이 중요합니다. </li><li> 베벨은 부드러운되면, 피펫 팁은 (그림 1) 날카롭게해야합니다. 그것이 더 이상 선명하게 바퀴를 만지지 않습니다 그러한 피펫을 향상, 그것이 10-50도로 시계 방향으로 회전하고, ~ 10 초 동안 회전 선명하게 바퀴에 피펫을 돌려 놓으십시오. 선명하게 바퀴에서 피펫을 철회하고 지금은 가장자리를 검사합니다. 이 단계는 일반적으로 날카로운 모서리를 만드는 몇 가지 작은 조정 반복해야합니다. 피펫 너무 오랫동안의 가장자리에 배치하는 경우, 그것은 고르지 표면 (그림 1)을 개발 가능성이 더 높습니다. 한쪽을 완료 후, 위의 단계를 반복하여 반대 가장자리를 선명하게 진행할 수 있습니다. </li><li> 모든 4mm 피펫의 테이퍼의 시작부터 원주 라인을 그릴 수있는 영구 마커를 사용합니다. 이러한 demarcations은 볼륨 5uL 일치합니다. </li></ol> 2. Utero 이식에 <ol><li> 주사용 재료 (예 : 세포, 바이러스 등)을 준비하면 당신은 주사를 설정할 수 있습니다. 우리는 다음과 같은 설정으로 압축 공기에 연결된 microinjector를 사용합니다 (압력 설정 : 입력 60-80 PSI 0 PSI를 개최, 8-12 PSI, 균형 공 PSI를 주사 40 PSI를 작성, 사출 시간 100 밀리초). </li><li> 사출 피펫을 소독하기 위해 멸균 1X PBS로 두 번 다음에 70 % EtOH로 두 번 닦아주십시오. 피펫의 끝은 매우 불안정으로, 우리는 사출 pipettes를 autoclaving하지 않는 것이 좋습니다. </li><li> 주사는 어느 2.5X - 3.5X 배율 loupes 또는 해부 현미경을 사용하여 수행할 수 있습니다. 온난 화 담요, 조명, 필요한 수술 도구와 절차 영역을 준비합니다. </li><li> 임신 마우스를 (우리는 지속적인 흐름의 마취 장치를 통해 전달 isoflurane과 산소를​​ 활용) 마취. 장소에 마우스를 확보하기 위해 테이프 각 사지 부정사 위치와 부착에 가열 패드에서 마우스를 놓으십시오. </li><li> 모피를 클립. 그럼, 준비 10 % povidone - 요오드 알코올에 의해 다음과 buprenorphine 같은 진통제 같은 주사와 살균 수술 장갑을 복부 입고. </li><li> 낮은 복부 (절개의 가장 열악한 부분이 introitus 약 1cm 우수해야합니다)에 1cm 절개를합니다. 피부와 근막을 절개. 근막의 얇은 층 아래에​​ 바로있는 복부 장기 (창자와 방광) 해치다하지 않도록주의하십시오. </li><li> 면화 면봉을 사용하여 부드럽게 근막을 스트레칭하고 절개를 통해 자궁 gravid을 제공합니다. 먼저이 전체 자궁을 시각화 있는지 확인하기 위해 오른쪽과 왼쪽 난소을 식별하여 fetuses의 총 수를 계산합니다. 당신이 주사를 준비하는 동안 fetuses 따뜻하고 남아 있도록 진행하기 전에 복강에 다시 자궁를 놓습니다. </li><li> 당신이 주입하려는 fetuses의 번호에 대한 재료의 적절한 볼륨을 그립니다. 샘플로 바늘을 작성하는 동안, 그것은 microinjector 튜빙에 샘플을 aspirating 피하기 위해 물 속에 잠긴 피펫 팁을 유지하는 것이 중요합니다. 또는 직접 피펫 팁을 위반하지 않고 바늘을 채울 수 있도록 Parafilm의 조각에 튜브를 : 세포가 작은 볼륨에 일반적으로 있기 때문에, 우리는 보통 (0.5mL 예) 작​​은 microfuge 그들을 놓으십시오. </li><li> 부드럽게 각각의 태아를 개최하고 삽입하려는 태아 (예 : 간, 복막 캐비티, 다리 등)의 부분을 식별합니다. 당신이 주사를 수행하는 동안 그것이 회전하지 않도록 엄지와 집게손가락으로, 당신은 amniotic 캐비티 내의 태아를 안정해야합니다. 부드럽게 충분히 손상을 방지하기 위해 아직 안정화 굳게 충분히 태아를 보유하는 것이 중요합니다. </li><li> 조심스럽게 자궁, 양막과 태아 피부를 통해 피펫을 삽입하고, 대상 기관으로. 피펫이 날카로운 경우, 이러한 조직을 통해 쉽게 전달한다. 피펫 팁이 무딘 경우, WI<html> 자궁과 amniotic의 점막의 통지 tenting는거야. 각 태아에 원하는 볼륨을 주사. 당신 움직임이 삽입, 사출 및 피펫의 철회의 시간 동안 지속하는 것이 필수적입니다. </li><li> 원하는 볼륨이 분사되면 조심스럽게 피펫을 철회. 정상적으로 완료하면, 재료는 amniotic 캐비티이나 자궁에서 밖으로 누설해서는 안됩니다. 큰 구멍이 하나가 양수의 누출에 의해 인식할 수 양막에서 만들어지는 경우, 생존하려하지 않는다. 출산 후 주입 및 uninjected fetuses을 분별하는 방법이 없기 때문에 마지막으로, 출생 후의 수확 참여 연구, 모든 fetuses 기술적으로 완벽하게 주사를 받아야한다. </li><li> 당신이 태아 간으로 주사를 수행하는 경우가 철회 -이 후, 당신은 때때로 피펫 팁의 혈액을 볼 수 있습니다 당신은 올바른 위치에 확인과 생존에 영향을 미치지 않습니다. 내부 복막 주사를 수행하는 경우, 약간 태아 간 다음 목표로하고 있습니다. 근육내 주사의 경우 엉덩이와 대퇴부를 파악하고 gluteus 근육 주사로 태아의 위치를​​ 수 있습니다. 마지막으로, 심실 주사를 위해, 그것은 적절한 대상에 피펫을 직접하는 코로나 봉합을 쉽게 알 수 있습니다. 이 주사의 경우, 약간 큰 구경 pipettes은 피펫을 위반하지 않고 두개골을 뚫을 필요합니다. </li><li> 다음, 복강으로 다시 자궁을 신중하게 배치하십시오. 그것이 자체 또는 그 혈관 공급 주변 트위스트 있지 않은지 확인하십시오. 절차를 수행하는 동안 손실되었습니다 어떤 액체를 대체하는 어머니의 복막에 고인 살균 1X PBS의 1mL를 제공합니다. 5-0 흡수성 봉합사 꼰 (Vicryl 예) 2 레이어의 절개를 닫습니다. 먼저 기본 창자 또는 방광 손상없이 근막을 닫은 다음 피부를 닫습니다. </li><li> 이때, 사후 절차 약품은 진통제에 대한 관리하실 수 있습니다. 자체 개별 케이지 각 주입 여성 반환하고 온난 화 담요에 새장을 놓으십시오. 그것이 똑바로 때까지 마우스를 모니터합니다. 새장에 이불을 넣고 그것이 배달 후 몇 일 전에 (더 케이지 청소 즉 없음) 방해하지 않아야 마우스 시설의 조용한 지역에 마우스를 놓으십시오. 동물에 대한 추가적인 스트레스를 최소화하는 것은 preterm 노동의 기회를 감소합니다. </li><li> 당신이 주사를 완료한 후, 멸균 1X PBS로 두 번 피펫을 청소하고 한 때 70 % EtOH. </li><li> 주입 여성은 어려움없이 그들이 절차에서 회복 아르 보험 매일 관찰해야합니다. 절개는 감염의 부종, 염증, 상처 분리 및 기타 신호를 모니터링해야합니다. 필요에 따라 게시 수술 진통제가 시행됩니다. </li></ol> 3. 대표 결과 : 용어 배달에 주입 fetuses의 생존이 기술이 성공을 달성하기위한 주요 제한 요소입니다. 재료 주입 및 마우스가 사용되는 변형에 따라 생존 요금이 다를 수 있습니다. 일반적으로, E14에서 야생 형 생쥐에 조혈 세포의 주사는 최소 50 % 생활에서 태어난 새끼의 결과 것입니다. 생존의 높은 가격은 주사의 기술적 측면뿐만 아니라 주입되는 생쥐의 특성에 따라 모두 가능합니다. 자궁과 amniotic 세포막에 외상을 최소화하는 것이이 프로토콜의 가장 중요한 기술적인 측면이다. 샤프, 작은 구경의 pipettes은 주사하는 동안 최소한의 자궁 외상 발생합니다. 우리는 미리 가공 바늘의 구경이 같은 표준 주사 바늘을 사용하는 것이 좋습니다 너무 커서 자궁에 큰 구멍을 초래 하리라는하지 않습니다. 핸드 만들어진 유리 사출 pipettes은 utero 주사에 활용 될 수있는 유일한 작은 구경의 바늘입니다. 자궁 및 짧은 마취의 부드러운 핸들링을 포함하여 신중하고 세심한 수술 기술은 또한 최적의 결과를 위해 중요합니다. 이러한 유전자 배경, 임신 성 연령, 쓰레기 크기로받는 생쥐의 특정 특성도 생존에 영향을 줄 수 있습니다. 생쥐의 일부 변종들은 유전 배경에 따라 preterm 노동과 임신 손실에 더 민감한. 근육질 또는 neurodegenerative 결함과 함께 15 트렌스 제닉 동물 vaginally 정중선 개복술을받은 후 fetuses를 제공하는 장애인 능력을 가질 수 있습니다. 8이 임신한 암컷으로 배달을 요구할 수 있습니다 cesarean 섹션. 우리는 또한 주사시 임신 성 연령은 생존에 영향을 줄 수있는 것으로 확인되었습니다. 배아 일 12 세 미만 아르 Fetuses 나이가 fetuses보다 생존의 낮은 속도를했습니다. 마지막으로, 우리는 대형 쓰레기의 크기 (&gt; 10 fetuses) 주사 후 태아 사망의 높은 속도를 가지고 경향 것으로 나타났습니다. 이 기법의 기술적 측면과 주입 fetuses의 생존을 극대화할 수 주입되는 생쥐의 특정 특성 모두에주의. ve_content &quot;&gt;이 방법은 제대로 수행되는 경우, 하나는 모든 fetuses가 주입 물질에 노출되는 기대할 수 있습니다. 출생 후의 설정과 유사하지만, utero의 세포 또는 바이러스의 성공적인 전달은 항상 기증자 세포 engraftment 또는 유전자의 결과하지 않습니다 표현이, 각각. 줄기 세포의 engraftment 예를 들어, 같은 복용량과 이식 세포의 소스로 여러 가지 요인에 따라 달라집니다. 마찬가지로, 바이러스 전달의 성공은 부분적으로 사용되는 바이러스 벡터의 종류에 의해 결정됩니다. 하나는 충격 강아지 생존, 세포 engraftment 및 바이러스 전달이 프로토콜과 함께 성공을 달성하기 위해 그 수많은 요소를 이해해야합니다. <img src="/files/ftp_upload/2303/2303fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1. 다이어그램은 사출 pipettes (1.4 단계)의 선명 적절한 장면을 묘사한

<ol>
	<li>Flake, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+X-linked+severe+combined+immunodeficiency+by+in+utero+transplantation+of+paternal+bone+marrow.">Treatment of X-linked severe combined immunodeficiency by in utero transplantation of paternal bone marrow.</a> N Engl J Med. 335, 1806-1810 (1996).</li><li>Wengler, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-utero+transplantation+of+parental+CD34+haematopoietic+progenitor+cells+in+a+patient+with+X-linked+severe+combined+immunodeficiency+(SCIDXI).">In-utero transplantation of parental CD34 haematopoietic progenitor cells in a patient with X-linked severe combined immunodeficiency (SCIDXI).</a> Lancet. 348, 1484-1487 (1996).</li><li>Flake, A. W., Zanjani, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=in+utero+hematopoietic+stem+cell+transplantation:+ontogenic+opportunities+and+biologic+barriers.">in utero hematopoietic stem cell transplantation: ontogenic opportunities and biologic barriers.</a> Blood. 94, 2179-2191 (1999).</li><li>Merianos, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+alloantibodies+induce+a+postnatal+immune+response+that+limits+engraftment+following+in+utero+hematopoietic+cell+transplantation+in+mice.">Maternal alloantibodies induce a postnatal immune response that limits engraftment following in utero hematopoietic cell transplantation in mice.</a> J Clin Invest. 119, 2590-2600 (2009).</li><li>Peranteau, W. H., Endo, M., Adibe, O. O., Flake, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+an+immune+barrier+after+in+utero+hematopoietic-cell+transplantation.">Evidence for an immune barrier after in utero hematopoietic-cell transplantation.</a> Blood. 109, 1331-1333 (2007).</li><li>Kim, H. B., Shaaban, A. F., Yang, E. Y., Liechty, K. W., Flake, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microchimerism+and+tolerance+after+in+utero+bone+marrow+transplantation+in+mice.">Microchimerism and tolerance after in utero bone marrow transplantation in mice.</a> J Surg Res. 77, 1-5 (1998).</li><li>Durkin, E. T., Jones, K. A., Rajesh, D., Shaaban, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+chimerism+threshold+predicts+sustained+engraftment+and+NK-cell+tolerance+in+prenatal+allogeneic+chimeras.">Early chimerism threshold predicts sustained engraftment and NK-cell tolerance in prenatal allogeneic chimeras.</a> Blood. 112, 5245-5253 (2008).</li><li>Mackenzie, T. C., Shaaban, A. F., Radu, A., Flake, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engraftment+of+bone+marrow+and+fetal+liver+cells+after+in+utero+transplantation+in+MDX+mice.">Engraftment of bone marrow and fetal liver cells after in utero transplantation in MDX mice.</a> J Pediatr Surg. 37, 1058-1064 (2002).</li><li>Hayashi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mixed+chimerism+following+in+utero+hematopoietic+stem+cell+transplantation+in+murine+models+of+hemoglobinopathy.">Mixed chimerism following in utero hematopoietic stem cell transplantation in murine models of hemoglobinopathy.</a> Exp Hematol. 31, 176-184 (2003).</li><li>Bouchard, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+transgene+expression+in+cardiac+and+skeletal+muscle+following+fetal+administration+of+adenoviral+or+adeno-associated+viral+vectors+in+mice.">Long-term transgene expression in cardiac and skeletal muscle following fetal administration of adenoviral or adeno-associated viral vectors in mice.</a> J Gene Med. 5, 941-950 (2003).</li><li>Meza, N. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rescue+of+pyruvate+kinase+deficiency+in+mice+by+gene+therapy+using+the+human+isoenzyme.">Rescue of pyruvate kinase deficiency in mice by gene therapy using the human isoenzyme.</a> Mol Ther. 17, 2000-2009 (2009).</li><li>MacKenzie, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+transduction+of+liver+and+muscle+after+in+utero+injection+of+lentiviral+vectors+with+different+pseudotypes.">Efficient transduction of liver and muscle after in utero injection of lentiviral vectors with different pseudotypes.</a> Mol Ther. 6, 349-358 (2002).</li><li>MacKenzie, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transduction+of+satellite+cells+after+prenatal+intramuscular+administration+of+lentiviral+vectors.">Transduction of satellite cells after prenatal intramuscular administration of lentiviral vectors.</a> J Gene Med. 7, 50-58 (2005).</li><li>Sabatino, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+expression+of+hF.IX+After+tolerance+induction+by+in+utero+or+neonatal+administration+of+AAV-1-F.IX+in+hemophilia+B+mice.">Persistent expression of hF.IX After tolerance induction by in utero or neonatal administration of AAV-1-F.IX in hemophilia B mice.</a> Mol Ther. 15, 1677-1685 (2007).</li><li>Mellor, A. L., Munn, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunology+at+the+maternal-fetal+interface:+lessons+for+T+cell+tolerance+and+suppression.">Immunology at the maternal-fetal interface: lessons for T cell tolerance and suppression.</a> Annu Rev Immunol. 18, 367-391 (2000).</li><li>Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actively+acquired+tolerance+of+foreign+cells.">Actively acquired tolerance of foreign cells.</a> Nature. 172, 603-606 (1953).</li><li>Endo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+transfer+to+ocular+stem+cells+by+early+gestational+intraamniotic+injection+of+lentiviral+vector.">Gene transfer to ocular stem cells by early gestational intraamniotic injection of lentiviral vector.</a> Mol Ther. 15, 579-587 (2007).</li><li>Waddington, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+transgene+expression+by+administration+of+a+lentivirus-based+vector+to+the+fetal+circulation+of+immuno-competent+mice.">Long-term transgene expression by administration of a lentivirus-based vector to the fetal circulation of immuno-competent mice.</a> Gene Ther. 10, 1234-1240 (2003).</li><li>Schachtner, S., Buck, C., Bergelson, J., Baldwin, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporally+regulated+expression+patterns+following+in+utero+adenovirus-mediated+gene+transfer.">Temporally regulated expression patterns following in utero adenovirus-mediated gene transfer.</a> Gene Ther. 6, 1249-1257 (1999).</li></ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

50 년 전, 빌링햄, 브렌트, 그리고 Medawar 외국 단백질에 면역 내성을 유발 생쥐에 utero 이식에 사용됩니다. 16은 그 이후,이 기술의 몇 가지 유사 콘텐츠는 면역학 및 줄기 세포 생물학 질문을 해결하기 위해 사용되었습니다. 여기에 자세한 프로토콜은 IUT에 가장 접근 방법 중 하나입니다. 태아 간은 쉽게 시각 목표를 제공하며 포털과 간장 정맥을 통해 순환 체계?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Pipettes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Kimble</td>
<td>71900-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pipette puller</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sutter Instruments Company</td>
<td>Model P-30</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microinjector</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Narishige</td>
<td>IM-300</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pipette sharpener</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sutter Instruments Company</td>
<td>Model BV-10</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

a mouse model of in utero transplantation

utero의 줄기 세포와 바이러스의 이식은 인간의 태아에서 선천성 질환 치료를위한 엄청난 잠재력을 가지고 있습니다. 예를 들어, 조혈 줄기 세포의 utero 이식 (IUT)에 성공적으로 여러 가지 다른 조건에서 심한 결합 면역 결핍. 1,2 환자 치료에 사용되고 있습니다, 그러나, IUT는 성공하지 않고 시도했습니다. 3이 혼합 결과를 감안할 때, 가용성 간세포 이식 및 유전자 치료의 생물 학적 sequelae을 공부하는 효율이 아닌 인간의 모델이 분야의 발전을 위해 중요합니다. 우리와 다른 야생 형 생쥐 4-7과 유전 질환있는 사람 모두 utero에 이식 조혈 줄기 세포의 성공적인 engraftment에 영향을 미치는 요인 연구를 IUT의 마우스 모델을 사용하고 있습니다. 8,9 태아의 환경은 또한에 대한 상당한 이점을 제공 utero의 유전자 치료에 성공. 예를 들어, adenoviral 10 전달, 태아에 12,13 adeno - 관련 11 retroviral, 10 바이러스 및 lentiviral 벡터는 장기적인 유전자 발현과 주입의 사이트에서 멀리 떨어진 여러 장기의 도입 결과입니다. utero에 유전자 치료는 따라서 이러한 근육 영양 장애 또는 낭성 섬유증과 같은 단일 유전자 질환에 대한 가능한 치료 전략으로 간주됩니다. IUT의 또 다른 잠재적인 장점은 특정 항원에 면역 내성을 유발하는 능력입니다. 으로 혈우병,이 단백질에 내성의 초기 개발 결과에 팩터 IX의 도입과 생쥐에서 본. 14 잠재적인 인간의 치료법을 조사에서의 사용뿐만 아니라, IUT의 마우스 모델은 발달과 줄기 세포 생물학의 기본적인 질문을 연구하는 강력한 도구가 될 수 있습니다. 예를 들어, 하나는 유도 또는 억제 특정 유전자 발현을 정의 임신 성 단계에서 발달 경로를 조작하는 여러 작은 분자를 제공할 수 있습니다. 이러한 변경의 영향은 초기 이식 후 다양한 timepoints에서 평가하실 수 있습니다. 또한, 하나는 비 조사 및 교란되지 않은 호스트 환경에서 줄기 세포 분화 연구를 태아 환경에 pluripotent 또는 혈통 특정 전구 세포를 이식 수 있습니다. IUT의 마우스 모델은 이미 면역학 분야, 그리고 발달과 줄기 세포 생물학 내에 많은 통찰력을 제공하고 있습니다. 이 동영상 기반의 프로토콜에서는, 우리는 마우스 fetuses의 IUT를 수행하기위한 단계별 접근 방식을 설명하고 중요한 단계이 기술의 잠재적인 함정을 설명합니다.

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A Mouse Model of in Utero Transplantation

의 마우스 모델<em&gt; utero에</em&gt; 이식은 태아의 줄기 세포 이식 및 유전자 치료의 가능성 임상 응용을 연구하는 데 사용할 수있는 다양한 도구입니다. 이 프로토콜에서는, 우리는이 기술을 수행하는 일반적인 접근 방법을 제시

의 마우스 모델 Utero에 이식

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of in Utero Transplantation

19.3K 조회수.  University of California. 의 마우스 모델 utero에 이식은 태아의 줄기 세포 이식 및 유전자 치료의 가능성 임상 응용을 연구하는 데 사용할 수있는 다양한 도구입니다. 이 프로토콜에서는, 우리는이 기술을 수행하는 일반적인 접근 방법을 제시

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Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed results. However, the cellular and molecular mechanisms of the neotissue development, valve thickening, and stenosis development are not researched extensively. To answer the above questions, we developed a murine heterotopic heart valve transplantation model. A heart valve was harvested from a valve donor mouse and transplanted to a heart donor mouse. The heart with a new valve was transplanted heterotopically to a recipient mouse. The transplanted heart showed its own heartbeat, independent of the recipient&#8217;s heartbeat. The blood flow was quantified using a high frequency ultrasound system with a pulsed wave Doppler. The flow through the implanted pulmonary valve showed forward flow with minimal regurgitation and the peak flow was close to 100 mm/sec. This murine model of heart valve transplantation is highly versatile, so it can be modified and adapted to provide different hemodynamic environments and/or can be used with various transgenic mice to study neotissue development in a tissue engineered heart valve.

In order to understand the cellular and molecular mechanisms underlying neotissue formation and stenosis development in tissue engineered heart valves, a murine model of heterotopic heart valve transplantation was developed. A pulmonary heart valve was transplanted to recipient using the heterotopic heart transplantation technique.

이소성 심장 이식 마우스 모델을 사용하여 폐동맥 판막 이식

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

연구

의학

Murine Corneal Transplantation: A Model to Study the Most Common Form of Solid Organ Transplantation

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each year. While several animal models exist for this procedure and mice are the species that is most commonly used. The reasons for using mice are the relative cost of using this species, the existence of many genetically defined strains that allow for the study of immune responses, and the existence of an extensive array of reagents that can be used to further define responses in this species. This model has been used to define factors in the cornea that are responsible for the relative immune privilege status of this tissue that enables corneal allografts to survive acute rejection in the absence of immunosuppressive therapy. It has also been used to define those factors that are most important in rejection of such allografts. Consequently, much of what we know concerning mechanisms of both corneal allograft acceptance and rejection are due to studies using a murine model of corneal transplantation. In addition to describing a model for acute corneal allograft rejection, we also present for the first time a model of late-term corneal allograft rejection.

Mice have been used as a model for studying many forms of transplantation, including corneal transplantation. We describe in this report a murine model for both acute and late-term corneal transplantation.

쥐의 각막 이식 : 고체 장기 이식의 가장 일반적인 형태를 연구하기위한 모델

Corneal transplantation is the most common form of organ transplantation in the United States with between 45,000 and 55,000 procedures performed each ...

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic transplantation of ovarian surface and tubal epithelia include intraperitoneal and intrabursal administration of cells. The respective limitations of these methods include poorly defined location of injected cells and limited space volume. Furthermore, they are poorly suited for long-term structural preservation of transplanted organs. To address these challenges, we have developed an alternative approach, which is based on the introduction of cells and tissue fragments into the mouse fat pad. The mouse ovarian fat pad is located in the immediate vicinity of the ovary and uterine tube (aka oviduct, fallopian tube), and provides a familiar microenvironment for cells and tissues of these organs. In our approach fluorescence-labeled mouse and human cells, and fragments of the uterine tube are engrafted by using minimally traumatic dorsal incision surgery. Transplanted cells and their outgrowths are easily located in the ovarian fat pad for over 40 days. Long-term transplantation of the entire uterine tube allows correct preservation of all principle tissue components, and does not result in adverse side effects, such as fibrosis and inflammation. Our approach should be uniquely applicable for answering important biological questions such as differentiation, regenerative and neoplastic potential of specific cell populations. Furthermore, it should be suitable for studies of microenvironmental factors in normal development and cancer.

We describe an ovarian fad pad transplantation assay suitable for studies of normal and transformed epithelia of the female reproductive tract. The mouse fat pad allows transplantation of large tissue fragments, is easily accessible for surgery and imaging, and provides the most favorable native environment for tissues of M&#252;llerian origin.

마우스 난소 지방 패드 속으로 이식

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...

Using the Sleeve Technique in a Mouse Model of Aortic Transplantation - An Instructional Video

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the aorta in mice using the sleeve method was short and easy averaging 20 min, permitting studies of iso/allo grafts. The following article describes the aortic transplantation procedure used in our laboratory. The mice were anesthetized with a mixture of 1.5% volume isoflurane and 100% oxygen through a face mask. At this point, the segment of the aorta between the renal arteries and its bifurcation was separated from the vena cava, freely prepared and clampedat the proximal and distal segments with a single silk suture. Prior to the removal of the aorta, a saline solution containing heparin was injected into the inferior vena cava. Then the aorta was cut between the clamps and a saline heparin solution was used to flush the lumen. The sleeve technique with monofilament sutures was used in order to transplant the abdominal aorta in the orthotopic position.

We present an orthotopic aortic transplantation model using the sleeve technique in mice. It is a very rapid anastomosis method, which can be employed in studies of vascular disease.

대동맥 이식-교육용 비디오의 마우스 모델에서 소매 기법을 사용 하 여

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the ...

Mouse Model for Pancreas Transplantation Using a Modified Cuff Technique

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the availability of the widest range of molecular probes and reagents to perform in vivo as well as in vitro studies. Based on our experience with various murine transplantation models, we developed a heterotopic pancreas transplantation model in mice with the intent to analyze mechanisms underlying severe ischemia reperfusion injury-associated early graft damage. In contrast to previously described techniques using suture techniques, herein we describe a new procedure using a non-suture cuff technique. 
In recent years, we have performed more than 300 pancreas transplantations in mice with an overall success rate of &gt;90%, a success rate never described before in mouse pancreas transplantation. The backbone of this non-suture cuff technique for graft revascularization consists of two major steps: (I) pulling the recipient vessel over a polyethylene/polyamide cuff and fixing it with a circumferential ligature, and (II) placing the donor vessel over the everted recipient vessel and fixing it with a second circumferential ligature. The resultant continuity of the endothelial layer results in less thrombogenic lesions with high patency rates and, finally, high success rates.
In this model, arterial anastomosis is achieved by pulling the abdominal aorta of the donor graft over the everted common carotid artery of the recipient animal. Venous drainage of the graft is achieved by pulling the portal vein of the graft over the everted external jugular vein of the recipient. This manuscript provides details and crucial steps of the organ recovery and organ implantation procedures, which will allow researchers with microsurgical skills to perform the transplantation successfully in their laboratories.

Among abdominal solid organ transplantation, pancreatic grafts are prone to develop severe ischemia reperfusion injury-associated graft damage, leading eventually to early graft loss. This protocol describes a model of murine pancreas transplantation using a non-suture cuff technique, ideally suited for analyzing these early, deleterious damages.

췌 장 이식 수정된 팔목 기술을 사용 하 여 마우스 모델

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the ...

Intravital Microscopy and Thrombus Induction in the Earlobe of a Hairless Mouse

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions between cellular and non-cellular blood components during thrombus formation, reliable studies of the physiology and pathophysiology of thrombosis can only be performed in vivo. Therefore, this article presents an ear model in hairless mice and focuses on the in vivo analysis of microcirculation, thrombus formation, and thrombus evolution. By using intravital fluorescence microscopy and the intravenous (iv) application of the respective fluorescent dyes, a repetitive analysis of microcirculation in the auricle can easily be performed, without the need for surgical preparation. Furthermore, this model can be adapted for in vivo studies of different issues, including wound healing, reperfusion injury, or angiogenesis. In summary, the ear of hairless mice is an ideal model for the in vivo study of skin microcirculation in physiological or pathophysiological conditions and for the evaluation of its reaction to different systemic or topical treatments.

The ear model of the hairless SKH1-Hrhr mouse enables intravital fluorescence microscopy of microcirculation and phototoxic thrombus induction without prior surgical preparation in the examined microvascular bed. Therefore, the ear of the hairless mouse is an excellent in vivo model to study the complex interactions during microvascular thrombus formation, thrombus evolution, and thrombolysis.

털이 마우스의 귓불에서 생체 내에 현미경 및 혈전 유도

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions ...

Cardiopulmonary Bypass in a Mouse Model: A Novel Approach

As prolonged cardiopulmonary bypass becomes more essential during cardiac interventions, an increasing clinical demand arises for procedure optimization and for minimizing organ damage resulting from prolonged extracorporal circulation. The goal of this paper was to demonstrate a fully functional and clinically relevant model of cardiopulmonary bypass in a mouse. We report on the device design, perfusion circuit optimization, and microsurgical techniques. This model is an acute model, which is not compatible with survival due to the need for multiple blood drawings. Because of the range of tools available for mice (e.g., markers, knockouts, etc.), this model will facilitate investigation into the molecular mechanisms of organ damage and the effect of cardiopulmonary bypass in relation to other comorbidities.

This paper describes how to perform cardiopulmonary bypass in mice. This novel model will facilitate the investigation of the molecular mechanisms involved in organ damage.

마우스 모델에서 심폐 바이패스: 새로운 접근

As prolonged cardiopulmonary bypass becomes more essential during cardiac interventions, an increasing clinical demand arises for procedure optimization ...

Intraportal Transplantation of Pancreatic Islets in Mouse Model

Pancreatic islet transplantation to reduce hyperglycemia is highly successful in rodents with chemically-induced diabetes. The most common transplantation site in experimental islet transplantation is the kidney capsule. However, as less is known about the interaction of pancreatic islets with blood constituents, it also makes sense to utilize the portal vein approach in experimental islet transplantation.
This protocol demonstrates an intraportal islet transplantation technique in NMRI nude mice. Streptozotocin (180 mg/kg) is injected intraperitoneally to induce hyperglycemia in recipient mice. They are considered as diabetic at a non-fasting blood glucose level greater than 20 mmol/L. One day prior to transplantation, mouse pancreatic islets are isolated from the donor pancreas by collagenase digestion; a minimum of 350 islets are utilized per diabetic recipient. Depending upon the islet isolation yield, two or more donor mice are utilized per recipient. After overnight culture at 37 &#176;C, islets are administered into the recipient liver via the portal vein. After surgery, the mice are protected in red Makrolon houses and observed until are awake. This protocol maintains glycemic control for 120 days in syngeneic mice and 15 days in allogeneic mice.

Pancreatic islet transplantation is a way to achieve normoglycemia in type 1 diabetes. This article focuses on the transplantation technique through the intraportal route to maintain normal glucose levels in diabetic mice.

Intraportal 이식 마우스 모델에서 췌 장 독도의

Pancreatic islet transplantation to reduce hyperglycemia is highly successful in rodents with chemically-induced diabetes. The most common transplantation ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Veno-Venous Extracorporeal Membrane Oxygenation in a Mouse

The use of extracorporeal membrane oxygenation (ECMO) has increased substantially in recent years. ECMO has become a reliable and effective therapy for acute as well as end-stage lung diseases. With the increase in clinical demand and prolonged use of ECMO, procedural optimization and prevention of multi-organ damage are of critical importance. The aim of this protocol is to present a detailed technique of veno-venous ECMO in a non-intubated, spontaneously breathing mouse. This protocol demonstrates the technical design of the ECMO and surgical steps. This murine ECMO model will facilitate the study of pathophysiology related to ECMO (e.g., inflammation,bleeding and thromboembolic events). Due to the abundance of genetically modified mice, the molecular mechanisms involved in ECMO-related complications can also be dissected.

Here we present a protocol describing the technique of veno-venous extracorporeal membrane oxygenation (ECMO) in a non-intubated, spontaneously breathing mouse. This murine model of ECMO can be effectively implemented in experimental studies of acute and end-stage lung diseases.

마우스에 Veno 정 맥 체 외 막 산소

The use of extracorporeal membrane oxygenation (ECMO) has increased substantially in recent years. ECMO has become a reliable and effective therapy for ...