ラットモデルにおける虚血性プレコンディショニング効果を研究するための表在性下上腹部動脈軸フラップ

この手術プロトコルは、これらの手術の結果を改善するために、筋膜皮膚皮弁の虚血性プレコンディショニングレジメンを研究するための信頼できるモデルを提供します。このプロトコルは、習得が容易で、再現性があり、信頼性があります。他のプロトコルとの主な違いは、大腿血管を使用して虚血性プレコンディショニングを誘発し、小さな血管に害を与えることを避けることです。

最終的には、遊離およびペディクルフラップ再建のための虚血性プレコンディショニングプロトコルを最適化して、フラップの生存率を向上させ、フラップの脆弱性の臨界期間を短縮することができます。この方法は再建手術の分野に貢献することができ、虚血再灌流障害の研究に適しています。はじめに、適切に鎮静された動物を仰臥位に置きます。

腹部を鼠径部のしわの下から剣状突起のレベルより上まで剃ります。剃毛した部分に脱毛クリームを塗り、5分間待ってから掃除します。滅菌スキンペンと定規を使用して、最初に動物の腹部の正中線をマークし、次に鼠径部のしわをマークします。

切開を行う前に、最大6センチメートルの垂直方向の長さと約3センチメートルの水平幅が鼠径部のしわから頭蓋方向に伸びる楕円形または長方形を描くことによって、動物の体上の所望のフラップの位置を示す。次に、フラップの制限に垂直な5つまたは6つの等距離のマークを描画します。次に、ラグネルハサミを使用して、鼠径部のしわに3〜4センチメートルの縦方向の切開を行います。

血管を傷つけないように、必ず皮膚を上に引っ張ってください。4ジュエラーの顕微手術鉗子を使用して大腿血管と上腹部血管を露出させ、鉗子を開閉して筋膜を分離し、鼠径脂肪パッドの下の血管にアクセスします。鼠径部切開を使用して、ラグネルハサミを使用してフラップ切開を開始します。

皮膚の全厚と腹筋上の結合組織を損なうように注意してください。フラップの先端が最初に周囲の皮膚から解放されたら、ラグネルはさみの先端を使用してフラップを筋肉から分離し、フラップの周りの穿孔血管と真皮神経叢血管を焼灼することで、遠位部から近位部まで弱体化してフラップの調達を続けます。フラップが完全に採取されたら、フラップをゆっくりと上に持ち上げて血管を視覚化することにより、表在性下上腹部動脈またはSIEAの両方の枝全体をフラップでカプセル化することを目指します。

次に、フラップの内側と外側の両方で、下側の脂肪パッドを分離します。バイポーラ焼灼を使用して、表在性下上腹部茎を傷つけることなく、切開部の境界近くの脂肪パッドを慎重に焼灼します。皮弁採取完了後に大腿血管の準備に進む前に、陰茎静脈を介して17.5国際単位のヘパリンナトリウムを動物に単回投与します。

血管をよりよく見ることができるようにするには、動物を孤独な星の自己保持リトラクターに入れます。現在、40倍の倍率の手術用顕微鏡の下で作業しており、表在性上腹部血管が出現するまで、4つの顕微手術鉗子を使用して大腿血管を近位と遠位の両方に解剖します。遠位大腿血管で、筋膜をきれいにし、動脈と静脈から神経をやさしく解放します。

8-0ナイロン縫合糸は、動脈と静脈の下の顕微手術針ホルダーを回避し、縫合糸を握り締め、上腹部血管の出現直後にこれらの血管を結び、茎の起源から1ミリメートルの距離を残すことによって、遠位大腿血管を結紮します。近位大腿血管で、結合組織をきれいにする同じプロセスを繰り返します。ただし、動脈と静脈を互いに分離して、効率的なクランプを可能にします。

間欠性虚血を誘発するには、各近位大腿動脈と静脈に個別に顕微手術クランプを配置します。虚血性損傷が完了したら、術前に描かれたマークを裏打ちする元の位置にフラップを縫合します。鼠径部の折り目の内側、フラップの周り、および鼠径部の折り目で横方向に終わる3-0ナイロンを使用したランニング縫合糸を使用してフラップを縫合します。

フラップへの血液供給を確認するには、前の注射で説明したのと同じ技術とツールを使用して、0.25ミリリットルの10%滅菌フルオレセインナトリウムを陰茎静脈に注入します。3分後、366ナノメートルで長波UVランプを照らして、灌流領域に対応する蛍光領域を明らかにします。閉鎖と検証の後、自動切断を防ぐために縫合糸に沿って粉砕されたメトロニダゾールを広げ、同じ領域に液体包帯をスプレーします。

虚血性プレコンディショニング期間の終わりに上腹部血液供給からフラップを除去するには、フラップの下境界に沿って脂肪パッドより下を焼灼する。術後0日目またはPOD0の即時静脈内フルオレセイン血管造影は、SIEAのみによる皮弁の完全な血管新生を示した。フラップパドル全体を含む組織は十分に灌流されていました。

POD5およびPOD10の陰性対照の血管造影は、フラップパドルの完全な生存率を示した。摂食容器に結紮が行われなかったこのグループのすべての動物は健康を維持しました。陽性対照群では,結紮直後の緑色蛍光の不在は皮弁の灌流を示さず,新生血管形成の不在を証明した。

これはPOD10で確認され、皮膚パドルの85%の壊死が観察されました。興味深いことに、遠位先端は生存可能で新生血管化されていました。POD10のフラップ表面生存率の統計分析は、陰性対照群による99.5%の生存率を示したのに対し、陽性対照群は11.25%の生存率を示した。

虚血性プレコンディショニングを研究することを目的とした実験グループの例は、13.67%の生存率を示し、特定の虚血性プレコンディショニングプロトコルがこのモデルでは非効率的であることを示しています。2つの主要なステップは、フラップ採取と顕微鏡下での血管解剖です。最も重要なアドバイスは、高品質のマイクロ機器を用意することです。

次の目標は、虚血の期間とリズムを変化させてレジメンを選択することにより、さまざまな虚血プレコンディショニングプロトコルを試すことです 早期の流れの中断後の最高のフラップ生存率。この技術は、虚血融合損傷の優れたモデルを提供することにより、現代の再建手術および再建移植に適用される虚血性プレコンディショニングに関する新しい発見につながる可能性があります。