Este protocolo quirúrgico proporciona un modelo confiable para estudiar el régimen de preacondicionamiento isquémico en colgajos fasciocutáneos para mejorar los resultados de estas cirugías. Este protocolo es fácil de aprender, reproducible y fiable. La principal diferencia con otros protocolos es el uso de vasos femorales para provocar el preacondicionamiento isquémico, evitando dañar los vasos pequeños.
Eventualmente puede conducir a la optimización de un protocolo de preacondicionamiento isquémico para la reconstrucción de colgajo libre y pediculado para mejorar la supervivencia del colgajo y reducir el período crítico de la vulnerabilidad del colgajo. Este método puede contribuir al campo de la cirugía reconstructiva y se presta bien al estudio de las lesiones por isquemia de reperfusión. Para comenzar, coloque el animal debidamente sedado en posición supina.
Afeite el abdomen desde debajo del pliegue inguinal hasta por encima del nivel del proceso xifoides. Aplique una crema depilatoria en el área afeitada y espere cinco minutos antes de limpiarla. Usando un bolígrafo de piel estéril y una regla, primero marque la línea media del abdomen del animal y luego marque el pliegue inguinal.
Antes de hacer la incisión, indique la posición del colgajo deseado en el cuerpo del animal dibujando un óvalo o un rectángulo, con una longitud vertical de hasta seis centímetros y un ancho horizontal de unos tres centímetros que se extiende cranealmente desde el pliegue inguinal. Ahora dibuje cinco o seis marcas equidistantes perpendiculares a los límites de la solapa. Luego, usando un par de tijeras Ragnell, haga una incisión longitudinal de tres a cuatro centímetros en el pliegue inguinal.
Asegúrese de tirar de la piel hacia arriba para evitar dañar los vasos. Exponga e identifique los vasos femorales y epigástricos utilizando un pinzas microquirúrgicas de 4 joyeros abriendo y cerrando los fórceps para separar la fascia y obtener acceso a los vasos debajo de la almohadilla de grasa inguinal. Use la incisión inguinal para comenzar la incisión del colgajo usando las tijeras Ragnell.
Preste atención a socavar el grosor total de la piel y el tejido conectivo sobre el músculo abdominal. Como la punta del colgajo se libera inicialmente de la piel circundante, continúe la obtención del colgajo socavando desde la parte distal a la proximal usando las puntas de tijera de Ragnell para separar el colgajo del músculo mientras cauteriza cualquier vaso perforante y vasos del plexo dérmico alrededor del colgajo. Una vez que el colgajo esté completamente cosechado, trate de encapsular la totalidad de ambas ramas de la arteria epigástrica inferior superficial o SIEA con el colgajo levantando suavemente el colgajo hacia arriba para visualizar los vasos.
A continuación, separe las almohadillas de grasa en el aspecto inferior en los lados medial y lateral del colgajo. Use la cauterización bipolar para cauterizar las almohadillas de grasa cerca del borde de la incisión cuidadosamente sin dañar el pedículo epigástrico inferior superficial. Antes de proceder a la preparación del vaso femoral después de completar la recolección del colgajo, inyecte al animal una dosis única de 17,5 unidades internacionales de heparina sódica a través de la vena del pene.
Para permitir una mejor vista de los vasos, coloque al animal dentro de un retractor de autoretención de estrella solitaria. Ahora trabajando bajo un microscopio quirúrgico que tiene un aumento de 40X, use un par de 4 pinzas microquirúrgicas para diseccionar los vasos femorales tanto proximal como distalmente hasta la aparición de los vasos epigástricos superficiales. En los vasos femorales distales, limpie la fascia y libere suavemente el nervio de la arteria y la vena.
Usando un 8-0 sutura de nylon, ligar los vasos femorales distales eludiendo el soporte de aguja microquirúrgico debajo de la arteria y la vena, sujetando la sutura y atando estos vasos justo después de la aparición de los vasos epigástricos, dejando una distancia de un milímetro después del origen pedicular. En los vasos femorales proximales, repita el mismo proceso de limpieza del tejido conectivo. Sin embargo, separe la arteria y la vena entre sí para permitir un pinzamiento eficiente.
Para inducir isquemia intermitente, coloque pinzas microquirúrgicas por separado en cada arteria y vena femoral proximal. Cuando se completen las lesiones isquémicas, suture el colgajo a su posición original que recubre las marcas dibujadas antes de la operación. Suturar el colgajo usando una sutura de carrera con nylon 3-0 en el pliegue inguinal medialmente, alrededor del colgajo, y terminando en el pliegue inguinal lateralmente.
Para verificar el suministro de sangre al colgajo, inyecte 0,25 mililitros de fluoresceína sódica estéril al 10% en la vena del pene utilizando la misma técnica y herramientas descritas para la inyección anterior. Después de tres minutos, encienda una lámpara UV de onda larga a 366 nanómetros para revelar las áreas fluorescentes correspondientes a las áreas perfundidas. Después del cierre y la verificación, extienda metronidazol triturado a lo largo de las suturas para evitar la automutilación y rocíe vendaje líquido en la misma área.
Para eliminar el colgajo del suministro de sangre epigástrica al final del período de preacondicionamiento isquémico, cauterice inferior a la almohadilla de grasa a lo largo del borde inferior del colgajo. La angiografía con fluoresceína intravenosa inmediata en el día cero postoperatorio o POD0 mostró vascularización completa del colgajo solo por el SIEA. El tejido, incluida toda la paleta del colgajo, estaba bien perfundido.
La angiografía del control negativo en POD5 y POD10 mostró plena viabilidad de la paleta del colgajo. Todos los animales de este grupo en los que no se realizó ligadura en los vasos alimentarios permanecieron sanos. Para el grupo control positivo, la ausencia de fluorescencia verde inmediatamente después de la ligadura no mostró perfusión del colgajo, lo que demuestra la ausencia de neovascularización.
Esto se confirmó en POD10 con necrosis observada del 85% de la paleta de piel. Curiosamente, la punta distal era viable y neovascularizada. El análisis estadístico de la viabilidad de la superficie del colgajo en POD10 mostró una capacidad de supervivencia del 99,5% por el grupo de control negativo, mientras que el grupo de control positivo mostró una capacidad de supervivencia del 11,25%.
Un grupo experimental de ejemplo destinado a estudiar el preacondicionamiento isquémico mostró una capacidad de supervivencia del 13,67%, lo que demuestra que el protocolo de preacondicionamiento isquémico particular fue ineficiente en este modelo. Los dos pasos principales son la recolección de colgajos y la disección de recipientes bajo el microscopio. El consejo más importante es tener micro instrumentos de buena calidad.
El siguiente objetivo es probar diferentes protocolos de preacondicionamiento isquémico variando las duraciones y ritmos de isquemia para seleccionar el régimen que permita la mejor supervivencia del colgajo después de la interrupción temprana del flujo. Esta técnica, al proporcionar un buen modelo para las lesiones por fusión de isquemia, puede conducir a nuevos hallazgos sobre el preacondicionamiento isquémico aplicado a la cirugía reconstructiva moderna y al trasplante reconstructivo.
