존스 홉킨스에 있는 우리의 실험실은 경험의 2 년 이상으로 작은 동물 신장 및 간 이식을 능력을 발휘하고 있습니다. 이 특정 프로토콜은 쥐에서 치열 교정 신장 이식을 성공적으로 수행하는 데 필요한 중요한 단계를 간략하게 설명합니다. 성공확률과 재현성을 높이기 위해, 우리의 프로토콜에는 포탈 정맥을 통한 기증자 신장의 관류, 신장 정맥과 요관을 마취하기 위한 커프 시스템의 사용 등 세 가지 독특한 단계가 포함되어 있습니다.
이 절차를 시연하는 것은 우리 실험실대학원생인 Le Qi 박사가 될 것입니다. 이 절차를 시작하려면 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 기증자 쥐를 마취합니다. 쥐를 척추 위치에 놓고 멸균 마스킹 테이프로 팔다리를 고정시하십시오.
텍스트 프로토콜에 설명된 바와 같이 안구 윤활유를 바르고 수술 부위를 살균합니다. 첫 번째 절개 전에, 쥐가 발가락 핀치 철수 반사의 부재를 확인하여 적절하게 마취되었는지 확인하십시오. 가위를 사용하여, 심포이드에 대칭 음모에서 큰 세로 중간 피부와 근육 절개를 만들어 시작하고 복막 구멍을 입력합니다.
촉촉한 멸균 거즈로 내장을 덮고 대마, 베나 카바 및 왼쪽 신장을 노출하는 복부의 오른쪽 측면으로 이동합니다. 내장과 복부 장기를 촉촉하고 정상 온도에서 유지하기 위해 1 cc 주사기로 예열 된 식염수 1 밀리리터를 적용하십시오. 두 번째 촉촉한 거즈를 바르고 위장과 비장을 신장에 가릴 수 있습니다.
그런 다음 노출된 신장을 덮기 위해 작은 촉촉한 거즈를 추가합니다. 미세 수술 해부 집게를 사용하여 결합 조직과 서로 왼쪽 신장 동맥과 정맥을 분리하고 동원하십시오. 이제 왼쪽 고나달 정맥을 소작하여 왼쪽 신장 정맥을 분리하고 부신 동맥을 소작하여 왼쪽 신장 동맥을 분리합니다.
그 후, 대동맥과 베나 카바를 해부포로 결합 조직을 해부하여 왼쪽 신장 혈통에 우수하고 열등한 을 동원한다. 해부 포셉을 사용하여 결합 조직으로부터 요관을 나누고 동원한 다음 마이크로 가위를 사용하여 신장 골반에서 측정된 약 2센티미터의 길이로 대각선 절개를 합니다. 폴리아미드 커프스를 요관에 중간으로 삽입하고 8-0으로 매듭을 배치하여 커프를 고정합니다. 실크 봉합사.
해부 포셉 또는 마이크로 가위를 사용하여 회인성 지방에서 분리하여 왼쪽 신장을 동원합니다. 신장의 지방 캡슐을 부착 하고 신장 을 취급 하기 위해 그 사이트를 사용 하 여 둡니다. 이제 음경 정맥을 통해 27 게이지 바늘을 가진 주사기를 사용하여 헤파린 200 단위를 투여합니다.
출혈을 방지하기 위해 적어도 1 분 동안 면봉으로 주입 부위를 압박하십시오. 포털 정맥과 열등한 베나 카바를 식별합니다. 열등한 베나 카바를 노출합니다.
16 게이지 바늘을 사용하여 500 단위의 헤파린을 포털 정맥에 혼합한 차가운 식염수 50 밀리리터를 포털 정맥에 주입하여 신장을 플러시할 준비를 하십시오. 홍조하기 전에, 적외선 수준에서 열등한 정맥 카바를 잘라 바늘 삽입 부위에 포털 정맥 카우달을 잘라 혈액이 순환을 종료 할 수 있도록. 점차적으로 식염수 용액을 주입하여 신장을 플러시 시작합니다.
어두운 빨간색에서 균일 한 회색 또는 옅은 색상으로 신장의 색상 변화를 관찰한다. 홍조 후, 대동맥과 정맥 근위를 대동맥과 베나 카바로 리게이트합니다. 페트리 접시에 차가운 식염수가 들어있는 페트리 접시에 넣은 후 수술장에서 기증자의 시체를 제거하십시오.
신장이 차가운 식염수에 들어가면 정맥 커프의 손잡이를 고정하고 고정하고 부드럽게 커프스를 통해 신장 정맥을 당깁니다. 그런 다음 8-0을 사용하여 3 개의 매듭을 배치하여 커프 위에 신장 정맥을 고정합니다. 실크 봉합사. 받는 사람 절차를 시작하려면 기증자 절차에서 헤파린 투여까지단계를 반복하십시오.
그런 다음 왼쪽 신장 동맥에 두 개의 외상성 미세 혈관 클램프를 놓고 정맥 근위를 대동맥과 정맥 카바에 놓습니다. 신장의 입구에 받는 사람의 신장 정맥 근위를 리게이트. 혈관에서 남아있는 모든 혈액을 제거하기 위해 정맥을 염면식염수로 씻어 내라.
이전에 기증자 신장에 위치한 커프스 신장 정맥 위에 계각 신장 정맥을 밀어 넣습니다. 그런 다음 8-0으로 정맥을 확보합니다. 실크 봉합사. 커프 위에 신장 정맥을 고정할 때 동일한 위치 방향을 유지합니다.
신장 동맥 근위를 받는 사람의 신장 입구로 리게이트합니다. 혈관에 있는 어떤 과잉 혈액든지 제거하기 위하여 헤파린화한 식염수로 그것을 플러시하십시오. 이제 왼쪽 신장의 하부 극 의 수준에서 요관을 리게이트합니다.
회음제 지방에서 신장을 동원하고 토착 신장을 제거합니다. 10-0 나일론 봉합사를 사용하여 8-10 중단 봉합사와 신장 동맥의 종단 간 해부학을 수행합니다. 모험층을 사용하여 동맥을 기동한다.
혈관 클램프를 제거하여 신장의 재관류를 다시 시작하십시오. 정맥의 클램프를 제거하고 동맥의 클램프를 제거하여 시작합니다. 멸균 면봉을 사용하여 해부학 부위 주변의 모든 스며들 지역에 가벼운 압력을 가합니다.
몇 분 은 특허 해부학을 달성하기에 충분해야한다. 적절 한 관류에 대 한 평가 신장을 간략 하 게 관찰. 재관류 직후, 신장은 색을 바꾸고 몇 분 후에 점차적으로 자연적인 어두운 붉은 색을 회복해야 합니다.
요관및 현장 소변 생산의 눈에 보이는 연동은 때때로 관찰됩니다. 요관 소맷부리의 노출된 팁을 받는 사람 우터에 삽입하여 마무리하고 수신자 우터를 8-0으로 고정합니다. 실크 넥타이. 기증자와 수령인 요령을 위치에 두기 위해 각 요관 측의 끝을 서로 묶습니다.
선택적으로, 신장은 3-0 실크 봉합사로 신장 혈통을 묶어 오른쪽 신장을 신축시합니다. 복강에서 모든 거즈를 제거하고 모든 장기를 자연적인 위치로 되돌려 놓습니다. 그런 다음 창자 위에 식염수 1 밀리리터를 분출하여 촉촉하게 유지하십시오.
정류 근육에 4-0 흡수성 봉합사를 사용하고 4-0 실크 봉합사를 사용하여 복부를 닫아 피부 층을 중단된 방식으로 닫습니다. 동물을 깨끗한 케이지에 넣고 광고 리비툼 물과 음식에 접근할 수 있으며 섭씨 37도 의 가열 패드에서 복구할 수 있습니다. 동물을 동물 시설로 되돌리기 전에 1~2시간 동안 회복을 관찰하십시오.
합성 신장 이식을 가진 동물은 면역 억제 처리 없이 장기 생존을 달성했습니다. 반대로 면역 억제 없이 동종 신장 이식을 받은 동물은 이식편을 거부하고 8일의 중형 생존을 통해 신부전으로 굴복했습니다. 평균 혈청 크레아티닌은 동종 그룹에서 14배 증가하면서 합성 군에서 겸손하게 증가하였다.
농약시, 합성 신장 동종의 거시적 인 보기는 어떤 이상을 보여주지 않았다. 신장 색과 내부 구조는 그대로 남아 있었다. 대조적으로, 거부된 동물의 신장 동종은 내부 구조물의 파괴와 빨간 출혈 패치를 제시했습니다.
심니스 이식의 헤마톡시린과 에오신 얼룩은 내피 및 심상 세포의 정상 수와 얇은 구체 모세관 루프를 표시. 거부 된 동종염과 관염의 징후가있는 파괴 된 구체 구조를 표시했습니다. CD8 양성 염색은 T 세포 중재 거부를 확인하기 위해 수행되었다.
syngeneic 동종유전자는 CD8 양성 T 세포를 거의 보여주지 않았지만, 거부된 동문극은 T 세포 중재 거부를 확인하는 구엽기 및 튜룰리 안팎에서 CD8 양성 세포의 수가 상당히 높은 것으로 나타났다. 이 모델은 고체 장기 이식에 대한 치료적 임상 개입의 개발을 위한 길을 열어주는 거부, 내성 및 기증자 호스트 상호 작용의 면역 학적 현상에 대한 중요한 통찰력을 제공합니다.
