Comece abrindo o programa e inicialize a bomba injetora clicando no Controle do Dispensador, selecione Bomba 2 e, em seguida, clique em Iniciar. Para enxaguar a tubulação com a água ionizada, clique em Enxaguar e pressione Avançar. Selecione Bomba 2 e ajuste o suporte da ponta para a ponta desejada.
Em seguida, clique em Avançar novamente. Clique em Iniciar para iniciar o enxágue do tubo. Repita o enxágue com metanol.
Enquanto isso, prepare uma solução de substrato de trabalho diluindo o estoque de substrato em 1 a 100. Finalmente, enxágue a tubulação com a diluição de trabalho do estoque de substrato em PBS. Coloque a placa no leitor de placas.
E então, em Configurações de medição, escolha a abertura para a abertura de luminescência de 384 placas dos EUA, seguida pela distância entre a placa e o detector de 0,6 milímetros e o tempo de medição como 0,5 segundos. Depois que as configurações de medição tiverem sido definidas, na guia Configurações gerais do protocolo, selecione o tipo de placa como 384 Nunc e escolha a opção bidirecional Por colunas como o modo de medição. Insira 1 na guia número de repetições de ensaio.
Agora, na guia Dispensar, selecione a medida de dispensa desejada. Em seguida, defina o tempo de medição para cada poço como um segundo e selecione a bomba usada desejada. Velocidade de dosagem de 200 microlitros por segundo.
E o volume de dosagem para 50 microlitros. Escolha Volume de dosagem como o volume de enchimento da seringa para a bomba 2. E, em seguida, defina o número de medição inicial como 1.
Na guia Seleção de poços, use o menu suspenso Adicionar/remover amostras e escolha o tipo de amostra desejado e selecione os poços a serem medidos. Depois disso, inicie a medição clicando em Executar. O sinal de luminescência basal do DMSO é visto na coluna 1, e a diminuição do sinal de luminescência na presença do inibidor de ATG4B, FMK-9a, é vista na coluna 24.
