АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Постменопаузальный остеопороз стал глобальной проблемой общественного здравоохранения. Целью данного исследования является изучение терапевтических эффектов и связанных с ними механизмов применения таблеток Сяояо традиционной китайской медицины при этом состоянии.

Аннотация

Остеопороз является распространенным метаболическим заболеванием у женщин пожилого возраста и в постменопаузе, протекающим без явных симптомов на ранних стадиях. На последних стадиях этого состояния пациенты склонны к переломам, и это может серьезно повлиять на их здоровье и качество жизни. Увеличение продолжительности жизни во всем мире сделало остеопороз глобальной проблемой. Таблетки Сяояо ранее были
Используется при лечении депрессии. Кроме того, препарат, по-видимому, обладал эстрогеноподобной активностью, которая влияла на экспрессию ЩФ, раннего остеобласт-специфичного маркера, и COL-1, основного компонента костного внеклеточного матрикса. Таблетки Сяояо оценивали на предмет их влияния на постменопаузальный остеопороз (PMOM) у мышей. Целевая информация о каждом растительном компоненте таблеток Сяо Яо была доступна через базу данных Традиционной Китайской Медицины Фармакологии (TCMSP). Информация с веб-сайтов GeneCards, OMIM, PharmGkb, TTD, DrugBank и других веб-сайтов была использована для построения регуляторной сети травяного комплекса через сети Cytoscape и String для оценки белковых взаимодействий. Мышам проводили овариэктомию и лечили высокими и низкими дозами таблеток Сяояо, и их сравнивали с контрольной группой. Их симптомы оценивали с помощью иммуноцитохимии костных тканей. Результаты показали, что таблетки Сяояо обладают способностью облегчать симптомы PMOM у овариэктомированных мышей через сигнальный путь IL-17. Этот препарат может стать новым терапевтическим средством для лечения остеопороза.

Введение

Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) определяет остеопороз (ОП) как заболевание, характеризующееся снижением костной массы и ухудшением микроархитектуры костной ткани, что приводит к увеличению хрупкости костей и, следовательно, повышенному риску переломов1. Клиническое значение остеопороза заключается в том, что он может приводить к переломам, которые связаны с высокой смертностью, заболеваемостью и экономическими издержками2. Постменопаузальный остеопороз (ПМОП) обусловлен снижением уровня эстрогенов у женщин после менопаузы, что приводит к повышению активности остеокластов, что приводит к потере костной массы и разрушению микроструктуры костей. Это часто вызывает остеопороз с серьезным влиянием на здоровье3. Современные методы лечения ПМОП включают заместительную терапию эстрогенами, бисфосфонаты и паратиреоидный гормон, но они могут иметь различную степень побочных эффектов, недостаточную долгосрочную приверженность и высокую стоимость4. Таким образом, доступная фитотерапия является жизнеспособной альтернативой для большой части населения.

Таблетки Сяояо включены в Китайскую фармакопею5 и содержат восемь растительных компонентов, включая Чай Ху, Angelica sinensis, белую пеонию молочноцветковую, Atractylodes macrocephala, Poria cocos, Menthae Herba, лакрицу и свежий имбирь. Известно, что все эти травы эффективны для детоксикации печени и укрепления селезенки, питания крови и регулирования менструального цикла, а также смесь использовалась для лечения депрессии6. Тем не менее, роль таблеток Сяояо при остеопорозе неясна.

Ранние исследования показали, что воспаление может привести к потере костной массы7, и что снижение плотности костной ткани, связанное с этим процессом, может быть ускорено менопаузой. Кроме того, существует тесная взаимосвязь между развитием остеопороза и воспалением. Воспалительный фактор, интерлейкин-17 (IL-17), является провоспалительным фактором, секретируемым клетками Th17, подмножеством CD4+ Т-лимфоцитов. Эти клетки связаны с несколькими хроническими воспалительными заболеваниями и играют важную роль в развитии разрушения костей при ревматоидном артрите. Кроме того, IL-17 стимулирует активатор рецептора ядерного фактора-κ В-лиганда (RANKL), который регулирует остеокластогенез, что приводит к большей резорбции кости, чем к формированию кости9. IL-17 стимулирует экспрессию других остеокластогенных цитокинов, таких как TNFα, IL-1, IL-6 и IL-8. Он обладает способностью синергировать с другими воспалительными факторами, что делает его важным воспалительным эффектором10.

Исследования также показали связь между таблетками сяояо и воспалением. Shi et al.11 и Fang et al.12 недавно подтвердили, что таблетки Xiaoyao могут снижать уровни IL-6 и TNF-α соответственно. В другом исследовании стеатогепатита, связанного с метаболизмом, сообщалось, что таблетки Сяояо могут повышать экспрессию пропионовой кислоты, которая, в свою очередь, ингибирует экспрессию TNF-α и оказывает противовоспалительное действие. Тем не менее, в настоящее время неизвестно, могут ли таблетки Сяояо регулировать развитие PMOM, опосредуя воспалительную реакцию через IL-17, что и было целью данного исследования.

В этом исследовании было предсказано пересечение мишеней таблеток Сяояо и генов, связанных с остеопорозом, с помощью сетевого фармакологического и биоинформатического анализа, а также проанализированы пересекающиеся гены белковых взаимодействий, GO и KEGG. Основываясь на прогнозируемых результатах,можно наблюдать экспрессию Act1 и IL-6, которые являются ключевыми белками в сигнальном пути IL-17, а также маркеры костного обмена щелочной фосфатазы (ЩФ) и коллагена I типа (COL-1), чтобы наблюдать терапевтическую эффективность таблеток Xiaoyao на мышах PMOM.

протокол

Комитет по этике лабораторных животных Юцзянского медицинского университета по национальностям утвердил протокол исследования (номер утверждения: 2022101502). Самки мышей C57BL/6 в возрасте 10-12 недель, класс SPF и масса тела (22 ± 2) г, были размещены в Экспериментальном центре на животных класса SPF Медицинского университета для национальностей Юцзянского медицинского университета. Подопытные животные содержались при температуре 24-26 °С и относительной влажности воздуха от 55% до 60%.

1. База данных и аналитическая платформа фармакологии систем традиционной китайской медицины

ПРИМЕЧАНИЕ: Фармакологическая база данных и аналитическая платформа систем традиционной китайской медицины (TCMSP; https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php) – это фармакологические платформы китайской медицины, которые содержат информацию об ингредиентах ТКМ, свойствах, связанных с ADME, мишенях и заболеваниях16,17.

  1. Получите доступ к веб-интерфейсу TCMSP. Найдите название Херба, введите название китайской медицины и нажмите «Поиск». Нажмите на латинское название в результатах поиска. Проводят скрининг по результатам ингредиентов с параметрами OB ≥ 30% и DL ≥ 0,18.
  2. Скопируйте все результаты и сохраните их в формате TXT под названием Chinese Medicine Name_ingredients.txt.
  3. В разделе Информация о целях на вкладке Связанные цели отфильтруйте Mol ID (т. е. результат на шаге 1.2).
  4. Скопируйте отфильтрованные результаты и сохраните их в формате TXT под названием Chinese Medicine Name_targets.txt.
    ПРИМЕЧАНИЕ: С помощью вышеуказанных шагов были получены все подходящие активные ингредиенты и соответствующая целевая информация традиционной китайской медицины (ТКМ).
  5. Поместите все вышеперечисленные файлы ingredients.txt и targets.txt файлы в одну папку, а скрипты Perl (Supplementary Coding File 1) поместите в эту папку.
  6. Откройте CMD, введите путь к папке cd, введите его и запустите скрипт Perl. Получите новый текстовый файл (allTargets.txt). Этот новый текстовый файл (allTargets.txt) содержит название травы, название ингредиента, идентификатор ингредиента и цель.

2. База данных ЮниПрот

ПРИМЕЧАНИЕ: База данных UniProt (https://www.uniprot.org/) содержит последовательности белков человека, аннотированные функциональной информацией, и используется для нормализации названий мишеней до ихофициальных названий.

  1. Перейдите в веб-интерфейс UniProt. Перейдите на вкладку Поиск , выберите UniProtKB и нажмите кнопку Поиск.
  2. Отфильтруйте на левой боковой панели, выберите «Проверено» (Swiss-Prot) для «Статуса» и «Человек » для популярных организмов. Нажмите кнопку Скачать, выберите Загрузить все, выберите TSV в поле Формат и нажмите кнопку Скачать , чтобы загрузить файл аннотации.
  3. Распакуйте загруженный файл в текущую папку, откройте распакованный файл, скопируйте и вставьте его в текстовый файл с именем ann.txt.

3. Конверсия идентификатора мишени препарата

  1. Поместите все файлы мишеней для лекарств, allTargets.txt полученные в разделе 1, и файл аннотаций UniProt, ann.txt полученный в разделе 2, в папку и поместите в нее скрипты Perl (Supplementary Coding File 2).
  2. Откройте CMD, введите cd + пробел + путь к папке, введите его и запустите скрипт Perl для получения нового текстового файла (allTargets.symbol.txt). Этот новый текстовый файл (allTargets.symbol.txt) содержит название травы, идентификатор ингредиента, название ингредиента и идентификатор гена.

4. Поиск по базе данных

  1. GeneCards: база данных генов человека (GeneCards)
    ПРИМЕЧАНИЕ: База данных GeneCards (https://www.genecards.org/) предоставляет информацию о прогнозировании и аннотации для генов человека. Он используется для доступа к целям заболевания 19,20.
    1. Перейдите в веб-интерфейс GeneCards. Введите в поле поиска слово «остеопороз» и нажмите кнопку «Поиск».
    2. Нажмите кнопку Экспорт и выберите Экспорт в Excel.
    3. Откройте загруженный файл, скопируйте гены с оценкой релевантности ≥ 1, вставьте и сохраните их в файл с именем GeneCards.txt.
  2. База данных OMIM
    ПРИМЕЧАНИЕ: База данных OMIM (https://omim.org) содержит человеческие гены, генетические заболевания и черты21.
    1. Перейдите в веб-интерфейс OIM. Нажмите на GENE Map, введите остеопороз в поле поиска и нажмите Поиск.
    2. Нажмите «Загрузить как» и выберите «Файл Excel».
    3. Откройте скачанный файл, скопируйте имя гена в столбец «Утвержденный символ», вставьте его и сохраните в файл с именем OMIM.txt.
  3. База данных PharmGkb
    ПРИМЕЧАНИЕ: PharmGkb (https://www.pharmgkb.org), база знаний по фармакогеномике, содержит аннотации к этикеткам лекарственных средств, лекарственные пути, фармакогенетические сводки и взаимосвязи между генами, лекарствами и болезнями22.
    1. Перейдите в интерфейс сайта PharmGkb. Введите остеопороз в поле поиска, нажмите «Поиск» и отметьте «Ген » на левой боковой панели.
    2. Введите все результаты вручную и сохраните их в файл с именем PharmGkb.txt.
  4. TTD: база данных терапевтических мишеней (TTD)
    База данных TTD (https://idrblab.org/ttd/) содержит информацию о мишенях белков и нуклеиновых кислот, целевых заболеваниях, информации о путях развития и соответствующих препаратах для каждой мишени23.
    1. Перейдите в веб-интерфейс TTD. Введите в поле поиска слово «остеопороз» и нажмите кнопку «Поиск».
    2. Нажмите «Информация о целевом объекте » в разделе «Идентификатор объекта» в результате, скопируйте имя целевого объекта, вставьте его и сохраните в файл с именем TTD.txt. Всего было получено 33 результата. Сохраняйте каждый результат таким же образом.
  5. База данных DrugBank Online (DrugBank)
    ПРИМЕЧАНИЕ: База данных DrugBank (https://go.drugbank.com) содержит информацию о лекарствах и мишенях для лекарств, взаимодействии лекарств, механизмах приема лекарств и метаболизме лекарств24.
    1. Перейдите в интерфейс сайта DrugBank. Выберите «Показания » на вкладке поиска, введите «остеопороз» в поле поиска и нажмите «Поиск».
    2. Нажмите на запись «Остеопороз » в результатах для получения дополнительной информации, перейдите на вкладку «ЛЕКАРСТВА И МИШЕНИ » и нажмите на соответствующую ссылку в столбце «ЦЕЛЬ» таблицы.
    3. Нажмите «Подробности» в белке, скопируйте имя гена, вставьте его и сохраните в файл с именем DrugBank.txt. Сохраняйте каждый результат таким же образом.

5. Диаграмма Венна

  1. Слияние генов, ассоциированных с заболеванием, и картирование Венна
    1. Поместите сохраненные текстовые файлы и скрипт в ту же папку.
    2. Откройте код R (Merge Disease-Related Genes), скопируйте и вставьте путь, по которому хранится вышеуказанный txt-файл, в строку, где находится setwd в коде R.
    3. Откройте программное обеспечение R, запустите измененный код R и сохраните его. Устанавливаем ген, называем файл Disease.txt.
    4. Откройте веб-сайт Draw Venn Diagram; В разделе ввода скопируйте и вставьте текстовое содержимое, сохраненное в разделах с 4 по 8, один за другим в список, назвав его соответствующей базой данных и нажав кнопку Отправить.
    5. Нажмите «Сохранить изображение в формате PNG» под изображением и сохраните текстовый результат в той же папке.
  2. Пересечение мишеней для лекарств и генов, ассоциированных с заболеванием
    1. Поместите файл allTargets.symbol.txt, полученный в разделе 3, и файл Disease.txt, полученный в шаге 5.1.3, в эту же папку.
    2. Откройте код R (мишень для лекарства и ген, связанный с заболеванием, пересекаются), скопируйте и вставьте путь, по которому хранится вышеуказанный txt-файл, в строку, где находится setwd в коде R.
    3. Откройте программное обеспечение R, запустите измененный код R и сохраните его. Установите ген, назовите файл Drug_Disease.txt.
    4. Откройте веб-сайт Нарисовать диаграмму Венна. В разделе ввода скопируйте и вставьте allTargets.symbol.txt и Disease.txt в список и назовите их в соответствии с соответствующими файлами.
    5. Нажмите «Сохранить изображение в формате PNG» под изображением и сохраните текстовые результаты в той же папке.

6. Построение регулирующей сети компаундирования ТКМ

  1. Поместите файл allTargets.symbol.txt, полученный в разделе 3, в ту же папку, что и файл Disease.txt и соответствующий Perl-скрипт (Supplementary Coding File 3).
  2. Откройте CMD, введите путь к файлу cd, нажмите Enter и запустите скрипт Perl. Получите четыре новых txt-файла: net.geneLists.txt, net.molLists.txt, net.network.txt и net.type.txt. Файл network.txt содержит идентификатор ингредиента ТКМ, ген-мишень, отношение к мишени и название ингредиента. net.type.txt содержит имя узла, атрибуты и принадлежность. net.geneLists.txt — это список генов, а net.molLists.txt — список ингредиентов.
  3. Скопируйте вновь полученные текстовые файлы в ту же новую папку.
  4. Откройте программу Cytoscape 3.9.1, нажмите «Файл», нажмите «Импорт» и выберите «Файл сетевой формы». Выберите net.network.txt, поместите первый столбец идентификатора компонента в качестве исходного узла, второй столбец параметра Гены в качестве целевого узла и третий столбец целевого отношения в качестве типа взаимодействия и нажмите кнопку ОК.
  5. Импортируйте net.type.txt из окна Таблица узлов. Перейдите на вкладку Выбрать, выберите Узлы, выберите Из файла списка идентификаторов, выберите net.geneLists.txt и нажмите кнопку Открыть.
  6. Перейдите на вкладку Компоновка, выберите Компоновка круга с сортировкой по градусам и выберите Только выбранные узлы. Отрегулируйте высоту и ширину узлов на 70.
  7. Щелкните второе поле в поле Высота, выберите degree.layout в столбце, выберите Непрерывное отображение в поле Тип отображения и дважды щелкните окно настройки высоты в правой части поля Текущее сопоставление, чтобы настроить верхний и нижний пределы высоты до подходящего диапазона.
  8. Повторите операцию с параметром Ширина.
  9. Щелкните вкладку Компоновка еще раз и выберите Инструменты компоновки > Настроить масштаб, чтобы узлы не перекрывались.
  10. Нажмите на Верхнее правое окно программы, чтобы снять флажок с сети узлов, перейдите на вкладку Выбрать , выберите Узлы, выберите Из файла списка идентификаторов, выберите net.molLists.txt и нажмите Открыть.
  11. Перейдите на вкладку Компоновка, выберите Компоновка атрибутов группы, выберите Только выбранные узлы и нажмите кнопку Тип.
  12. Нажмите Размер шрифта метки в левом столбце и установите Значение по умолчанию на 12. Нажмите «Значение по умолчанию» на изображении/диаграмме 1 в левом столбце.
  13. Выберите «Диаграммы» во всплывающем окне, нажмите «Круговая диаграмма» и выберите элементы в столбце «Доступные столбцы», за исключением степени. Макет в столбце выбранных столбцов и нажмите кнопку Применить.
  14. Нажмите на кнопку Краска границ в левом столбце и установите значение по умолчанию на #003EF8. Нажмите на вкладку «Край» в нижней части левой боковой панели и установите «Ширину» на 0,8.
  15. Нажмите «Файл» на верхней панели инструментов, выберите «Экспорт», затем выберите «Сеть в образ».
  16. Во всплывающем окне выберите формат PNG для параметра «Формат», выберите каталог сохранения и назовите сеть изображений, отрегулируйте размер изображения до максимального значения 500%, выберите «Прозрачный фон» и нажмите «ОК», чтобы завершить сохранение изображения.

7. Конструкции сетей белок-белковых взаимодействий (ИПП)

  1. Откройте веб-сайт STRING (https://string-db.org/), нажмите «Множественный белок», нажмите «Обзор » в разделе «Загрузить файл», выберите файл Drug_Disease.txt , полученный на шаге 5.2.3, и выберите Homo sapiens в разделе «Организмы». Нажмите «Поиск» и нажмите «Продолжить».
  2. Нажмите «Настройки», установите минимальный требуемый показатель взаимодействия на наивысшую достоверность (0,900) и установите флажок «Скрыть отключенные узлы в сети» в параметрах отображения сети. Нажмите кнопку Обновить.
  3. Внесите коррективы в узлы на схеме сети, чтобы не было перекрытия или окклюзии.
  4. Нажмите кнопку Экспорт и нажмите кнопку Загрузить как растровое изображение с высоким разрешением, чтобы получить карту взаимодействующей сети белков в формате PNG. Кроме того, загрузите файл TSV в виде короткого табличного текста. Сохраните оба файла в одной папке. Файл TSV содержит имя гена, внутренний идентификатор STRING и баллы по различным атрибутам.

8. Построение ядра сети PPI

  1. Поместите файл TSV, полученный в разделе 7, и необходимые Perl-скрипты в новую папку.
  2. Откройте программу Cytoscape 3.9.1, нажмите «Файл», выберите «Импорт», нажмите «Сеть из файла», выберите файл TSV, укажите первый столбец node1 в качестве исходного узла и второй столбец node2 в качестве целевого узла и нажмите OK.
  3. Нажмите «Стиль » на левой боковой панели, нажмите «Значение по умолчанию » в поле «Ширина» и установите значение 60. Перетащите узлы так, чтобы в сети не было перекрытия и окклюзии.
  4. Нажмите APPs на верхней панели инструментов, нажмите CytoNCA и нажмите Открыть.
  5. В левом столбце выберите Без веса в разделах Между, Близость, Степень, Собственный вектор, Метод на основе локальной средней связности и Сеть и щелкните Анализировать.
  6. Когда анализ будет завершен, нажмите на «Таблицу узлов » в правом нижнем окне, нажмите « Экспорт», сохраните ее в папке и назовите «Оценка 1».
    ПРИМЕЧАНИЕ: Плагин CytoNCA должен быть установлен в программное обеспечение Cytoscape. Для этого нажмите «Приложения » на верхней панели инструментов, нажмите «Диспетчер приложений», введите CytoNCA в поле поиска, отметьте галочкой CytoNCA в среднем столбце возвращенных результатов и нажмите «Установить».
  7. Откройте score1, настройте столбец name на первый столбец, скопируйте информацию в таблицу, вставьте ее в новый текстовый файл, назовите его score1.txt и сохраните.
  8. Откройте код R, скопируйте и вставьте путь, по которому находится файл score1.txt, в строку, где находится setwd в коде R.
  9. Откройте программу R и запустите измененный код, чтобы получить два новых файла, score2.txt и score2.gene.txt. Файл score2.txt содержит гены, для которых все баллы программы были выше медианы, и конкретные баллы для каждой программы. score2.gene.txt содержит гены, которые набрали больше баллов, чем медиана по всем пунктам.
  10. Чтобы продолжить работу в Cytoscape, нажмите AnalysisPanel 1 в правом нижнем окне, нажмите Загрузить из файла в левой части окна, выберите score2.gene.txt, нажмите Открыть и нажмите OK во всплывающем окне.
  11. Нажмите «Выбрать узлы» внизу и нажмите «ОК» во всплывающем окне.
  12. Нажмите «Файл » на верхней панели инструментов, выберите «Экспорт», нажмите «Сеть в изображение», установите масштаб (%) в поле «Размер изображения» до максимального значения 500%, отметьте флажок «Прозрачный фон» и сохраните файл в той же папке, назовите его network1.
  13. Нажмите «Создать подсеть » на правой боковой панели нижнего окна, чтобы создать подсеть, проанализируйте подсеть, нажмите «ПРИЛОЖЕНИЯ» на панели инструментов вверху, нажмите «CytoNCA» и нажмите «Открыть».
  14. На левой боковой панели выберите «Без веса » в разделах «Между», «Близость», «Степень», «Собственный вектор», «Метод на основе локальной средней связности» и «Сеть» и нажмите «Анализировать».
  15. Когда анализ будет завершен, нажмите «Таблица узлов » в правом нижнем окне, нажмите «Экспорт» и сохраните его в новой папке с именем score2.
  16. Откройте score2, настройте столбец name на первый столбец, скопируйте информацию в таблице, вставьте ее в новый текстовый файл, назовите его score2.txt и сохраните.
  17. Откройте код R, скопируйте и вставьте путь, по которому находится файл score2.txt, в строку, где находится setwd в коде R.
  18. Откройте программу R и запустите измененный код, чтобы получить два новых файла: score3.txt и score3.gene.txt. Файл score3.txt содержит гены, которые набрали больше медианы для всех пунктов, а также конкретные баллы для каждого элемента. score3.gene.txt содержит гены, которые набрали больше среднего значения по всем элементам.
  19. Чтобы продолжить работу в Cytoscape, нажмите AnalysisPanel 1 в правом нижнем окне, нажмите Загрузить из файла в левой части окна, выберите score3.gene.txt, нажмите Открыть и нажмите OK во всплывающем окне.
  20. Нажмите «Выбрать узлы» внизу и нажмите «ОК» во всплывающем окне.
  21. Нажмите «Файл» на верхней панели инструментов, выберите «Экспорт», нажмите «Сеть в изображение», установите «Масштаб (%) в размере изображения до 500%, отметьте галочкой «Прозрачный фон» и сохраните файл в той же папке, которая использовалась на этом шаге, назвав его network2.
  22. Нажмите « Создать подсеть» на правой боковой панели окна ниже, чтобы создать подсеть.
  23. Нажмите «Файл » на панели инструментов вверху, выберите «Экспорт», нажмите «Сеть в изображение», установите масштаб (%) в размере изображения до максимума 500%, установите флажок «Прозрачный фон» и сохраните файл в той же папке, которая использовалась на этом шаге, и назовите его network3.

9. Преобразование Gene ID

  1. Поместите файл Drug_Disease.txt в ту же новую папку, что и требуемый файл кода.
  2. Откройте код R (Supplementary Coding File 4) и скопируйте и вставьте путь, по которому находится файл Drug_Disease.txt, в строку, где находится setwd в коде R.
  3. Откройте программу R, запустите измененный код с помощью org. Hs.eg.db пакет для преобразования идентификатора гена, и запускается после завершения создания нового файла id.txt. id.txt содержит символ гена и соответствующий идентификатор.

10. Анализ обогащения ГО

  1. Поместите файл id.txt из предыдущего шага в ту же папку, что и код анализа обогащения GO.
  2. Откройте код R (Supplementary Coding File 5) и установите в качестве рабочего каталога значение id.txt и путь, по которому хранится код Go.
  3. Откройте программное обеспечение R, запустите измененный код и используйте clusterProfiler, org. Hs.eg.db, обогатить график, график ggplot2, гистограммы анализа обогащения GO и пузырьковые графики. Получите три новых файла, GO.txt, barplot.pdf и bubble.pdf, после завершения прогона.
    ПРИМЕЧАНИЕ: GO.txt представляет собой файл результатов обогащения, содержащий классификацию обогащения (BP, CC, MF), GO ID, GO, пропорцию гена, фоновую пропорцию, p-значение значимости обогащения, скорректированное p-значение (p.adjust, value), идентификатор гена (название) и количество генов, обогащенных на каждом GO. barplot.pdf – гистограмма, пузырь. PDF — это пузырьковый график.

11. Анализ обогащения KEGG

  1. Поместите файл id.txt в ту же папку, что и код анализа обогащения KEGG.
  2. Откройте код R (Supplementary Coding File 6) и установите рабочий каталог по пути, где хранятся id.txt и код KEGG.
  3. Откройте программное обеспечение R, запустите измененный код и используйте clusterProfiler, org. Hs.eg.db, enrichplot, пакет ggplot2 для построения гистограмм анализа обогащения GO, пузырьковых графиков и графиков путей. Прогон завершается созданием трех новых файлов: KEGG.txt, barplot.pdf и bubble.pdf.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Файл KEGG.txt представляет собой файл результатов обогащения, содержащий идентификатор пути, описание пути, пропорцию гена, пропорцию фона, p-значение значимости обогащения, скорректированное p-значение (p.adjust, qvalue), идентификатор гена (имя) и количество генов, обогащенных в каждом пути. barplot.pdf — это линейчатая диаграмма, а bubble.pdf — пузырьковая диаграмма.
  4. Поиск Ил-17 в файле KEGG.txt; Результат показывает, что существует только один путь; скопируйте идентификатор пути.
  5. Откройте код R, вставьте идентификатор пути IL-17 в KEGGID и используйте пакет pathview для маркировки карты пути. Запустите измененный код R и получите два новых файла, hsa04657.pathview.png и hsa04657.png.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Файл hsa04657.png — это карта путей, hsa04657.pathview.png — помеченная карта путей, а те, что помечены красным цветом, — это гены, присутствующие в сети взаимодействий.

12. Приготовление таблеток Сяояо

ПРИМЕЧАНИЕ: Используемый метод приготовления см. в Китайской фармакопее5.

  1. Возьмите 100 г чая Ху, 100 г Angelica sinensis, 100 г White Paeonia lactiflora, 100 г жареных Atractylodes macrocephala, 100 г Poria cocos, 80 г Radix glycyrrhizae preparate и 20 г Menthae herba.
  2. С помощью каменной мельницы или порошкообразующей машины измельчите травы в мелкий порошок; Несколько трав соединяют в вышеуказанных пропорциях и измельчают в мелкий порошок для естественного смешивания. Используйте лекарственное сито с внутренним диаметром 80 меш от 180 μм ± 7,6 μм и процедите измельченный порошок. Тщательно перемешиваем.
  3. Возьмите 100 г имбиря, добавьте воду и каждый раз кипятите 2 раза по 20 минут. Процедите и отложите в сторону.
  4. Возьмите лечебный налет, окуните небольшой веник в имбирную воду, смажьте им бляшку, возьмите вышеуказанный порошок, посыпьте им имбирную воду, и переверните налет так, чтобы весь порошок был влажным и его можно было слепить в форму шара.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Образование лекарственного налета является важным этапом во время приготовления таблеток ТКМ. Большая часть бамбука мосо будет разделена на полоски и сплетена в скелет. Бамбуковая кожа, или тенгпи, вплетается в поверхность, и она приобретает округлую форму. Поверхность налета должна быть тонко покрыта тунговым маслом, а затем покрыта слоем лака. Его высушивают, чтобы он стал водонепроницаемым. Таблетки, изготовленные таким образом, будут круглыми и гладкими.
  5. Снова смажьте имбирь водой, посыпьте порошком, и поверните налет так, чтобы лекарство постепенно округлилось и увеличивалось. Поместите в прохладное место для просушки.

13. Создание животной модели

  1. После 7 дней акклиматизации случайным образом разделите подопытных мышей на 4 группы, а именно: фиктивную операционную группу (Sham, где был удален только жир вокруг яичников) и три группы овариэктомированных мышей, состоящих из модельной группы (OVX), а также групп приема таблеток Сяояо в низкой и высокой концентрации.
  2. Обезболите мышей 3% пентобарбиталом натрия (40 мг/кг), вводимым внутрибрюшинно. Убедитесь, что мыши входят в состояние анестезии, наблюдая за общим расслаблением мышц, глубоким и медленным дыханием и замедленными движениями. Нанесите глазную мазь на глаза мышей перед операцией.
  3. Поместите животных в положение лежа и побрейте почечную область спины с помощью бритвы для животных. Провести местную дезинфекцию 75% этанолом.
  4. Сделайте продольный разрез примерно на 1 см с обеих сторон, близко к дорсальной области почки, и надрежьте фасцию, чтобы отделить мышцы и брюшину.
  5. Найдите верхнюю часть маточного рога и маточные трубы для перевязки. Вставьте щипцы в разрез для исследования и найдите яичник, окруженный жировой тканью ярко-красного цвета цветной капусты, со спирально расположенными фаллопиевыми трубами ниже яичника, соединяющими яичник с маточным рогом25. Удалите яичники хирургическими ножницами и наложите шов.
  6. Удалите небольшое количество жировой ткани возле яичника в качестве контроля в группе фиктивной операции. Наблюдайте за животными до тех пор, пока они не придут в сознание. Поместите послеоперационных животных в отдельные клетки до полного выздоровления.
  7. Чтобы предотвратить заражение, обеспечьте мышей гентамицином в течение 3 дней после операции. После операции обеспечьте нормальное питание и хорошие условия для роста в соответствии с фактическим состоянием мышей. При возникновении каких-либо отклонений, таких как инфицирование раны или потеря аппетита, немедленно обратитесь к инструктору Центра лабораторных животных.

14. Применение лекарственных препаратов

ПРИМЕЧАНИЕ: В соответствии с Фармакологической экспериментальной методологией26, пересчет используемых доз для человека и животных составлял 9 г таблеток Сяояо для взрослого человека весом 70 кг, что эквивалентно одной дозе (дозировка для однократного приема).

  1. Для групп с низкой и высокой дозой используйте 0,683 г/кг и 2,73 г/кг соответственно для группы из 8 животных. Используйте левую руку, чтобы обездвижить мышь так, чтобы рот мыши находился на прямой линии с пищеводом. Держа иглу для зонда в правой руке, аккуратно введите ее в пищевод по задней стенке глотки от уголка рта мыши.
  2. На этом этапе направление иглы для зонда может быть немного изменено для стимуляции индуцированного глотания. Введите препарат. Выполняйте это один раз в день в течение 12 недель.
  3. В фиктивных и модельных группах вводите физиологический раствор один раз в день в течение 12 недель в количестве, определяемом весом животного.
  4. Усыпляйте мышей при вывихе шейного отдела и обрезайте им задние конечности. Снимите кожу с конечностей, чтобы отделить мышцу от бедренной кости. Обрабатывайте бедренные кости мышей раствором для декальцинации ЭДТА в течение 1 месяца и ежедневно заменяйте свежим раствором.

15. Окрашивание гематоксилин-эозином (ПЭ)

  1. Депарафинизируйте бедренные ткани в течение 8 минут, а затем поместите в градиентный этанол на 3 минуты; Смыть проточной водой в течение 1 мин.
  2. Каплями нанесите окрашивающий раствор гематоксилина на участки, чтобы полностью покрыть ткань, запачкайте на 5 минут и промойте водопроводной водой
  3. Добавьте раствор для дифференцировки соляной кислоты в ткань на предметное стекло, следя за тем, чтобы он полностью покрывал ткань. Прекращают, когда наблюдается изменение цвета ткани. Промойте водой из-под крана.
  4. Добавьте раствор красителя Эозина по каплям и дайте полностью покрыть ткань, действуя от 30 с до 2 минут. Излишки красителя смойте проточной водой.
  5. Проведите градиентное обезвоживание этанола 75% безводным этанолом в течение 5 минут, а затем безводным этанолом в течение 5 минут и очистите с помощью раствора для депарафинизации в течение 3 минут.
  6. Капните на предметное стекло соответствующее количество нейтральной камеди в соответствии с размером ткани и осторожно опустите покровную резинку, избегая попадания пузырьков воздуха.

16. Микрокомпьютерная томография и иммуногистохимический анализ

  1. Удалите лишние мышцы и связки вокруг образцов бедренной кости у разных групп мышей и зафиксируйте образцы тканей в 4% параформальдегиде на 24 ч.
  2. Высушите костные ткани на воздухе и выполните микрокомпьютерную томографию с помощью сканирования костной ткани с целью получения трехмерных данных микрокомпьютерной томографии.
  3. Из законсервированных мышиных восковых блоков разрежьте их на непрерывные участки толщиной 6 мкм и запекайте ломтики при температуре 70 °C -72 °C в течение 30-60 минут.
  4. Депарафинизация в течение 8 минут, затем обработка 75% безводным этанолом в течение 5 минут, безводным этанолом в течение 5 минут и полоскание PBS в течение 5 минут в 3 раза.
  5. Выполните ремонт под высоким давлением EDTA в течение 15 минут, а затем промывку PBS в течение 5 минут в течение 3 раз.
  6. Добавьте 3% перекись водорода по каплям в ткань, инкубируйте при комнатной температуре в течение 10 минут и промойте PBS в течение 5 минут в 3 раза.
  7. С помощью иммуногистохимического карандаша нарисуйте круг. Стирать с помощью PBS в течение 3 минут в 3 раза.
  8. Окрашивание первичных антител (pAb кролика против ALP (1:200), pAb кролика против COL-1 (1:200), pAb кролика против IL-17 (1:275), pAb против Act1 (1:500), pAb кролика против IL-6 (1:500)) в течение ночи, с последующим промыванием буфером PBS в течение 5 минут в течение 3 раз.
  9. По каплям добавьте вторичное антитело (HRP-конъюгированный Affinipure Goat Anti-rabbit IgG (H+L; 1:2000)) и инкубируйте при комнатной температуре в течение 60 минут. Стирать с PBS буфером в течение 3 мин в 3 раза.
  10. Инкубируйте в готовом к использованию DAB в течение 3-5 минут, затем промойте PBS.
  11. Повторное окрашивание гематоксилином в течение 3 минут, затем полоскание PBS.
  12. Используйте дифференцированный раствор в течение примерно 10 секунд, после чего прополощите PBS.
  13. Добавьте обратный синий раствор в течение 10 секунд, после чего прополощите PBS.
  14. Проведите обработку 75% безводным этанолом в течение 5 минут, безводным этанолом в течение 5 минут и прозрачным в течение 3 минут. Используйте нейтральную смолу для герметизации слайдов.

Результаты

Активные ингредиенты и цели действия таблеток Сяояо
Путем поиска в базе данных TCMSP и скрининга в соответствии с критериями пероральной биодоступности (OB) ≥ 30% и лекарственных свойств (DL) ≥ 0,18, было обнаружено 125 активных ингредиентов в таблетках Xiaoyao. Среди них ингредиенты 6, 4, 9...

Обсуждение

Согласно статистике, остеопороз ежегодно вызывает 1,5 миллиона переломов в Соединенных Штатах, и подавляющее большинство из них происходиту женщин в постменопаузе. Прогнозируется, что с увеличением численности стареющего населения большинство будущих переломов бедра в м?...

Раскрытие информации

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Благодарности

Эта работа была поддержана Программой научных исследований и технологического развития города Байсэ (20224128). Авторы благодарят доктора Дева Суранну из Имперского колледжа Лондона и YMUN за редактирование рукописи. YYX и ZYW внесли равный вклад в это исследование.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
1ml SamplerGuangxi Beilunhe Medical Industrial Group Co.JYQ001For anesthesia in mice
4%polyformaldehydeBeijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.P1110For tissue fixation
6-0 absorbable suture (angled needle)Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co.HZX-06For postoperative suturing
Absorbent cotton ballWinnerMIANQIU-500gFor sterilization and hemostasis
Adhesive slidesJiangsu Shitai Experimental Equipment Co.188105For tissue sectioning
AmobarbitalSigma Aldrich (Shanghai) Trading Co.A-020-1MLFor anesthesia in mice
Bluing SolutionBeijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.G1866Blue coloration of the nuclei of cells after the action of hematoxylin differentiation solution
C57BL/6 miceBeijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.(SCXK 2033-0063)For use in animal experiments
Carbon steel surgical bladesPremier Medical Equipment Co.SP239For mouse surgery
CIKS/TRAF3IP2 Rabbit pAbBIOSS ANTIBODIESbs-6202RBinds to Act1 in tissues
Cole's Hematoxylin Solution (For Conventional Stain)Beijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.G1140For staining paraffin sections
Collagen Type I Polyclonal antibodyproteintech14695-1-APBinds to COL-1 in tissues
DAB Substrate kit,20xBeijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.DA1010For tissue color development
Disposable surgical sheet 50*60CMNanchang Xuhui Medical Equipment Co.SP4529777For mouse surgery
EDTA decalcification solution (pH 7.2)Beijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.E1171-500mlFor tissue decalcification
Enhanced Endogenous Peroxidase Bloching BufferBeyotime BiotechnologyP0100BSequestration of tissue or cellular endogenous peroxidases
Environmentally friendly dewaxing clear liquidServicebioG1128-1LFor dewaxing paraffin sections
Ethyl AlcoholCHRON CHEMICALS64-17-5 (CAS)For dehydration of paraffin sections
General Purpose Antibody DiluentEpizyme BiotechPS119LFor antibody dilution
Hematoxylin Differentiation SolutionServicebioG1039-500MLFor differentiation after hematoxylin staining and removal of excessively bound and non-specifically adsorbed dye from tissues
Hematoxylin Eosin (HE) Staining KitBeijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.G1120-3*100mlFor tissue staining
High quality stainless steel surgical knife handlePremier Medical Equipment Co.SP0088For mouse surgery
HRP-conjugated Affinipure Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)proteintechSA00001-2Binds to primary antibody and amplifies signal
IL-17A Polyclonal antibodyproteintech13082-1-APBinds to IL-17 in tissues
IL-6 Polyclonal antibodyproteintech21865-1-APBinds to IL-6 in tissues
Immunohistochemistry penBeijing Zhongshan Jinqiao Biotechnology Co.ZLI-9305 (YA0310)For drawing circles in immunohistochemistry
Medical surgical suture Non-absorbent (ball) 5-0 3.5mYangzhou Yuanlikang Medical Equipment Co.FHX-5-2For postoperative suturing
Medical Suture Needles Angle Needles 4*10 3/8Chaohu Binxiong Medical Equipment Co.FHZ612-4For postoperative suturing
Neutral BalsamBeijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.G8590As a slice sealer
PBS(1X)Shenzhen Mohong Technology Co.,LtdB0015Buffer for slide washing and partial solution dilution
Protein Free Rapid Blocking Buffer (1X)Epizyme BiotechPS108PAvoiding non-specific binding of proteins
Rabbit Anti-Bone Alkaline Phosphatase antibodyBIOSS ANTIBODIESbs-6292RBinds to alkaline phosphatase in tissues
SalineAffiliated Hospital Youjiang Medical University For NationalitiesLHN500For animals by gavage
Shaving/Electric clippersHANGZHOU HUAYUAN PET PRODUCTS CO., LTD.DTJ-002For shaving mice
Stainless Steel Medical Needle Holder 14cm Coarse NeedlePremier Medical Equipment Co.SP784For mouse surgery
Stainless Steel Ophthalmic Forceps 10.5cm Curved (No Hook)ZhuoyouyueYKNWW-10.5For mouse surgery
Stainless Steel Ophthalmic Scissors/Surgical Scissors 10CM Straight TipPremier Medical Equipment Co.ZYJD-10-ZJFor mouse surgery
Stainless Steel Tip Gastric Needle 12 Gauge 55mm ElbowGWJ-12-55WFor use in mice by gavage
Tris-EDTA Antigen Repair Fluid (50x)proteintechPR30002For antigen repair of paraffin sections
Wooden dissecting board 25*16cmJP16*24For mouse surgery
Xiaoyao pillsJiuzhitang Co.,Ltd.YPG-041For animal drug delivery
Others
R 4.3.1Data processing
Cytoscape3.9.1National Resource for Network BiologyBuilding a regulatory network for traditional Chinese medicine
ImageJ 1.54fNational Institutes of HealthImage processing for immunohistochemistry results
Adobe Photoshop 24.0.0AdobeFor image combination
GraphpadPrism 9.5GraphPad SoftwareStatistical analysis of data
cellsens DimensionOLYMPUSFor slicing and photographing
OLYMPUS BX53OLYMPUSFor HE staining and immunohistochemical section photography

Ссылки

  1. Kanis, J. A., Melton, L. J., Christiansen, C., Johnston, C. C., Khaltaev, N. The diagnosis of osteoporosis. J Bone Miner Res. 9 (8), 1137-1141 (1994).
  2. Amin, U., Mcpartland, A., O'sullivan, M., Silke, C. An overview of the management of osteoporosis in the aging female population. Womens Health (Lond). 19, 17455057231176655 (2023).
  3. Słupski, W., Jawień, P., Nowak, B. Botanicals in postmenopausal osteoporosis. Nutrients. 13 (5), 1609 (2021).
  4. Sharma, A., et al. Understanding the mechanistic potential of plant based phytochemicals in management of postmenopausal osteoporosis. Biomed Pharmacother. 163, 114850 (2023).
  5. . Pharmacopoeia of people's republic of china. Chinese Pharmacopeia Commission. , (2020).
  6. Ji, Y., et al. Xiaoyao pills ameliorate depression-like behaviors and oxidative stress induced by olfactory bulbectomy in rats via the activation of the pik3ca-akt1-nfe2l2/bdnf signaling pathway. Front Pharmacol. 12, 643456 (2021).
  7. Lencel, P., Magne, D. Inflammaging: The driving force in osteoporosis. Med Hypotheses. 76 (3), 317-321 (2011).
  8. Daoussis, D., Andonopoulos, A. P., Liossis, S. N. Wnt pathway and il-17: Novel regulators of joint remodeling in rheumatic diseases. Looking beyond the rank-rankl-opg axis. Semin Arthritis Rheum. 39 (5), 369-383 (2010).
  9. Amarasekara, D. S., et al. Regulation of osteoclast differentiation by cytokine networks. Immune Netw. 18 (1), e8 (2018).
  10. Amatya, N., Garg, A. V., Gaffen, S. L. Il-17 signaling: The yin and the yang. Trends Immunol. 38 (5), 310-322 (2017).
  11. Shi, B., et al. Xiaoyao pills prevent lipopolysaccharide-induced depression by inhibiting inflammation and protecting nerves. Front Pharmacol. 10, 1324 (2019).
  12. Fang, Y., et al. Xiaoyao pills attenuate inflammation and nerve injury induced by lipopolysaccharide in hippocampal neurons in vitro. Neural Plast. 2020, 8841332 (2020).
  13. Zhang, X., et al. Effect of xiaoyao pills on fecal endogenous metabolites in rats with metabolism-associated steatohepatitis. J Shanxi Med University. 55, 36-43 (2024).
  14. Xiao, J., et al. Il-17 in osteoarthritis: A narrative review. Open Life Sci. 18 (1), 20220747 (2023).
  15. Mcgeachy, M. J., Cua, D. J., Gaffen, S. L. The il-17 family of cytokines in health and disease. Immunity. 50 (4), 892-906 (2019).
  16. Ru, J., et al. Tcmsp: A database of systems pharmacology for drug discovery from herbal medicines. J Cheminform. 6, 13 (2014).
  17. Wang, T., et al. Exploring the mechanism of luteolin by regulating microglia polarization based on network pharmacology and in vitro experiments. Sci Rep. 13 (1), 13767 (2023).
  18. UniProt Consortium. UniProt: The universal protein knowledgebase in 2023. Nucleic Acids Res. 51 (D1), D523-D531 (2023).
  19. Barshir, R., et al. Genecarna: A comprehensive gene-centric database of human non-coding rnas in the genecards suite. J Mol Biol. 433 (11), 166913 (2021).
  20. Wang, T., Jiang, X., Lu, Y., Ruan, Y., Wang, J. Identification and integration analysis of a novel prognostic signature associated with cuproptosis-related ferroptosis genes and relevant lncrna regulatory axis in lung adenocarcinoma. Aging (Albany NY). 15 (5), 1543-1563 (2023).
  21. Amberger, J. S., Bocchini, C. A., Scott, A. F., Hamosh, A. Omim.Org: Leveraging knowledge across phenotype-gene relationships. Nuc Acid Res. 47 (D1), D1038-D1043 (2019).
  22. Whirl-Carrillo, M., et al. An evidence-based framework for evaluating pharmacogenomics knowledge for personalized medicine. Clin Pharmacol Ther. 110 (3), 563-572 (2021).
  23. Zhou, Y., et al. Ttd: Therapeutic target database describing target druggability information. Nucleic Acids Res. 52 (D1), D1465-D1477 (2024).
  24. Knox, C., et al. Drugbank 6.0: The drugbank knowledgebase for 2024. Nuc Acid Res. 52 (D1), D1265-D1275 (2024).
  25. Rendi, M. H., Muehlenbachs, A., Garcia, R. L., Boyd, K. L. . Comparative anatomy and histology a mouse and human atlas. Chapter 17, 253-284 (2012).
  26. Chen, S. X. R. B. X. . Pharmacology experimental methodology. , (2002).
  27. Black, D. M., Rosen, C. J. Clinical practice. Postmenopausal osteoporosis. N Engl J Med. 374 (3), 254-262 (2016).
  28. Cummings, S. R., Melton, L. J. Epidemiology and outcomes of osteoporotic fractures. Lancet. 359 (9319), 1761-1767 (2002).
  29. Walker, M. D., Shane, E. Postmenopausal osteoporosis. N Engl J Med. 389 (21), 1979-1991 (2023).
  30. Hwang, Y. H., Jang, S. A., Lee, A., Kim, T., Ha, H. Poria cocos ameliorates bone loss in ovariectomized mice and inhibits osteoclastogenesis in vitro. Nutrients. 12 (5), 1383 (2020).
  31. Ling, X., et al. Shu-di-huang and gan-cao herb pair restored the differentiation potentials of mesenchymal stem progenitors in treating osteoporosis via downregulation of nf-κb signaling pathway. Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 7795527 (2021).
  32. Zhou, L. P., et al. protective effects of danggui buxue tang alone and in combination with tamoxifen or raloxifene in vivo and in vitro. Front Pharmacol. 9, 779 (2018).
  33. Huangfu, L., Li, R., Huang, Y., Wang, S. The il-17 family in diseases: From bench to bedside. Signal Transduct Target Ther. 8 (1), 402 (2023).
  34. Majumder, S., Mcgeachy, M. J. Il-17 in the pathogenesis of disease: Good intentions gone awry. Annu Rev Immunol. 39, 537-556 (2021).
  35. Le Goff, B., et al. Implication of il-17 in bone loss and structural damage in inflammatory rheumatic diseases. Mediators Inflamm. 2019, 8659302 (2019).
  36. Zhang, J. R., et al. Different modulatory effects of il-17, il-22, and il-23 on osteoblast differentiation. Mediators Inflamm. 2017, 5950395 (2017).
  37. Peng, R., et al. Il-17 promotes osteoclast-induced bone loss by regulating glutamine-dependent energy metabolism. Cell Death Dis. 15 (2), 111 (2024).
  38. Sato, K., et al. Th17 functions as an osteoclastogenic helper t cell subset that links t cell activation and bone destruction. J Exp Med. 203 (12), 2673-2682 (2006).
  39. Shetty, S., Kapoor, N., Bondu, J. D., Thomas, N., Paul, T. V. Bone turnover markers: Emerging tool in the management of osteoporosis. Indian J Endocrinol Metab. 20 (6), 846-852 (2016).
  40. Selvaraj, V., Sekaran, S., Dhanasekaran, A., Warrier, S. Type 1 collagen: Synthesis, structure and key functions in bone mineralization. Differentiation. 136, 100757 (2024).
  41. Hu, T., et al. Xiaoyao san attenuates hepatic steatosis through estrogen receptor α pathway in ovariectomized apoe-/- mice. J Ethnopharmacol. 282, 114612 (2022).
  42. Ramchand, S. K., Leder, B. Z. Sequential therapy for the long-term treatment of postmenopausal osteoporosis. J Clin Endocrinol Metab. 109 (2), 303-311 (2024).
  43. Schroeder, R. J., et al. Oral therapeutics post menopausal osteoporosis. Cureus. 15 (8), e42870 (2023).
  44. Patel, D., Gorrell, C., Norris, J., Liu, J. A narrative review of the pharmaceutical management of osteoporosis. Ann Jt. 8, 25 (2023).
  45. Minisola, S. Denosumab discontinuation: Covid-19 pandemic and beyond. JBMR Plus. 8 (7), ziae046 (2024).
  46. ACOG Committee on Clinical Practice Guidelines-Gynecology. Management of postmenopausal osteoporosis: ACOG clinical practice guideline no. 2. Obstet Gynecol. 139 (4), 698-717 (2022).
  47. Peng, Z., Xu, R., You, Q. Role of traditional Chinese medicine in bone regeneration and osteoporosis. Front Bioeng Biotechnol. 10, 911326 (2022).
  48. Li, J., et al. Clinical practice of traditional Chinese medicine for the treatment of postmenopausal osteoporosis: A literature review. Climacteric. 25 (6), 562-569 (2022).
  49. Zhang, N. D., et al. Traditional Chinese medicine formulas for the treatment of osteoporosis: Implication for antiosteoporotic drug discovery. J Ethnopharmacol. 189, 61-80 (2016).
  50. Ping, R., et al. Identifying the effective combination of acupuncture and traditional Chinese medicinal herbs for postmenopausal osteoporosis therapy through studies of their molecular regulation of bone homeostasis. J Tradit Chin Med. 44 (1), 212-219 (2024).
  51. Li, B., Jiang, C., Zhan, X. Combined therapy of yishen zhuanggu decoction and caltrate d600 alleviates postmenopausal osteoporosis by targeting foxo3a and activating the wnt/β-catenin pathway. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 7732508 (2022).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

JoVE210

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены