В этом исследовании используются мыши BALB / c для создания модели NEC, которая будет полезна для исследования заболеваний на Т-клетках. На пятый день обе группы не показывают существенной разницы в размере тела. Однако на 10-й день мыши NEC были значительно тоньше контрольных мышей.
Вес мышей в группе NEC увеличивался медленно, а выживаемость постепенно снижалась в течение пяти дней создания модели. Модель NEC может быть полезна для изучения поляризации Т-клеток. Демонстрировать процедуру будет Ян Тянь, аспирант из моей лаборатории.
Нанесите мышам от 20 до 30 микролитров ЛПС и кормите их 40-50 микролитрами смеси на пятый день. Начиная с пятого дня, поместите их в устройство для гипоксии при 5% кислорода в течение 90 секунд и повторно насытите их кислородом в течение трех минут. Затем поместите мышей в среду в четыре градуса Цельсия на 15 минут и перенесите их в инкубатор.
Внимательно наблюдайте за всеми мышами, взвешивайте их каждый день, записывайте выживаемость мышей в течение индукционного периода и записывайте, является ли их стул кровавым и липким. Держа желудочный зонд в правой руке, зафиксируйте голову мыши указательным пальцем на голове мыши, осторожно прижатой назад и вниз. Вставьте желудочную трубку из левого угла рта и медленно переместите ее на два-три сантиметра к центру рта.
Протолкните от 40 до 50 микролитров формулы или от 20 до 30 микролитров ЛПС в пищеварительный тракт. Если у мыши сильный рвотный рефлекс и желудочный зонд уходит в трахею, осторожно вытащите и дайте мыши отдохнуть, прежде чем пытаться снова принять участие. Погрузите свежую ткань иллума мыши в 10% формалин, встройте ткани в парафин и нарежьте их на четыре микрометровых среза.
Чтобы депарафинизировать срезы, поместите их в ксилол. Замочите в течение пяти минут в абсолютном этаноле, 95% этаноле, 80% этаноле, 70% этаноле и дистиллированной воде. Далее окрашивают срезы раствором гематоксилина в течение пяти минут, и дифференцируют их в 1% соляной кислоты и 70% спирта в течение пяти секунд.
Наконец, окрашивают их раствором эозина в течение одной минуты, и исследуют гистопатологию кишечной ткани при 40-кратном увеличении. На микрофотографиях оценки патологии кишечника от нуля до четырех показана неповрежденная и нормальная слизистая оболочка, легкое отделение подслизистой и пластинчатой проприи, умеренное отделение подслизистой и пластинчатой проприи, тяжелое отделение подслизистой и пластинчатой проприи, а также исчезновение ворсинок кишечника при некрозе кишечника. Оценка патологии кишечника была значительно выше в группе NEC, чем в контрольной группе со значением P менее 0,001.
Стул набирали от нуля с хорошо сформированными гранулами до трех с жидким стулом. На 10-й день оценки стула групп NEC были значительно выше в группе NEC со значением P менее 0,001. На пятый день обе группы не показали существенной разницы в размере тела.
Однако на 10-й день мыши в группе NEC были значительно тоньше и меньше от головы до хвоста, чем мыши в контрольной группе. Вес мышей в группе NEC увеличивался медленно, а выживаемость постепенно снижалась в течение пяти дней создания модели. Резецированный илеоцекальный участок кишечной ткани у больных НЭК показал некроз ткани слизистой оболочки кишечника.
В этом исследовании у мышей в группе NEC также развилось илеоцекальное кровоизлияние и некроз. При осмотре мыши убедитесь, что мышь не борется за то, чтобы избежать введения желудочной трубки. Обхватите мышей от 20 до 30 микролитров ЛПС и кормите их от 40 до 50 микролитров смеси на пятый день.
Начиная с пятого дня, поместите затем в устройство для гипоксии при 5% кислорода в течение 90 секунд и повторно переродите их в течение трех минут. Эта модель может быть полезна для исследования болезни NEC на Т-клетках и может помочь изучить реакции клеток Th2 в NEC.
