Name: spot the correct tissue every time in multi-tissue blocks
Uploaded: 2015-05-31T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 53 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about SpOT the Correct Tissue Every Time in Multi-tissue Blocks at JoVE.com

Yazarlar yazının eleştiri sağlamak için Dr. Brent Harris teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışmalar NIH / NCI hibe P30-CA051008 kısmen desteklenen Lombardi Kapsamlı Kanser Merkezi Histopatoloji ve Doku Paylaşılan kaynağın gerçekleştirilmiştir. Içeriği sadece yazarların sorumluluğundadır ve mutlaka Ulusal Kanser Enstitüsü veya Ulusal Sağlık Enstitüleri resmi görüşlerini temsil etmemektedir.

SPOT 1. İnşaat <ol><li> 1 dakika süre ile ya da tamamen çözülene kadar 15 ml konik bir tüp ya da 2 mi mikrofüj tüpüne ve vorteks 1 ml doku markalama boyaya Sığır Serum Albumin (BSA), 50 mg ekleyin. Not: Bu protokol için biyokimyasal Sınıf BSA kullanın. Diğer sınıflarda ve saflık test edilmemiştir iken, sınıf ve saflık SPOT başarısı üzerinde önemli bir etkisi olmazdı beklenmektedir. </li><li> Jel tamamen eriyene kadar 10 saniye artışlarla% 30 güçte bir mikrodalga bir 15 ml konik tüp Isı 9 ml hidroksietil agaroz jel işlem. </li><li> Tek bir 15 ml konik tüp içinde erimiş işleme jel ve boya-BSA çözüm birleştirin ve bir pipet ile iyice karıştırın. Çözüm vorteksleyin. </li><li> Bir kaç saat için ya da katı kadar bir buzdolabı içinde konik tüp yerleştirin. </li><li> Yavaşça konik tüp renkli jel fişi serbest bırakmak için uzun, ince, metal bir spatula ya da prob kullanın. </li><li> Cu bir neşter veya jilet kullanınJel 5 mm kalınlığında kesitler içine enine fişini t. Yuvarlak uçları çıkartın ve atık (Şekil 2A) olarak imha ediniz. </li><li> Histoloji kasetlerinde düz jel fiş bölümleri yerleştirin ve 1 saat% 70 etanol içinde tutun. 24 saatlik bir süre boyunca en az 3 değişiklikler için% 70 etanol çözeltisi 2-4 saat değiştirin. </li><li> (1 saat boyunca her birinin (örneğin, alifatik hidrokarbonlar çözelti, 3 kez temizleme daha sonra açık bir% 70 etanol,% 80 etanol,% 95 etanol,% 100 etanol (3 x değişiklikleri): El, bir etanol serisi (1 saat her birinden jel bölümleri işleme ksilenler yerine)) bu protokol kullanılmıştır, ksilenler ya da el ile ya da bir doku processer altında) da kabul edilebilir, ve 1 saat her), erimiş parafın (3x sızmasıdır. Not:% 100 etanol tam dehidrasyon öncesinde, boya otomatik doku işlemci diğer doku ve sıvı reaktifler etkileyebilecek jel fiş sızabilir. Böyle, manuel rehidrasyon tavsiye edilir gibi, ancak otomatik işleme equ olduğunumüttefiki etkili. </li><li> Metodolojisi (Şekil 2B) katıştırma standart parafin kullanılarak göm birden işlenmiş jel bölümleri. Blok soğumaya ve sertleşmeye ve daha sonra oda sıcaklığına çıkmasına izin verin. </li><li> Blok (Şekil 2C) tükenene kadar gömülü jel kesimlerinden nOKTA çekirdeklerini çıkarmak için istenilen büyüklükte bir dermal yumruk iğne kullanın. Bir tek blok 20 x 2 mm 2 çekirdek kadar sağlayabilir. Serin bir çekirdeği saklayın. Bu protokol dermal yumruk kullanın Şekiller, bkz 1,5 mm (Şekil 1D, 2D ve) ya da 2 mm (Şekil 1B, 1C ve 2C). </li></ol> 2. Orient Olmayan dizilmiş Bloklar noktalar kullanma <ol><li> İstediğiniz yerleri ve birlikte gömülü bireysel doku parçalarının her kimliklerini ve spot yerini belirtmek için bir doku yönlendirme şeması oluşturun. NOT: Doku yönlendirme şeması p içeren resimli haritasıtanımlayıcıları ve spot konumu ile etiketlenmiş tüm doku parçaları hysical yerleri. Bu elektronik oluşturulabilir veya elle çizilmiş olabilir. diyagram en son ürünü kullanırken teknisyen ve araştırmacı uygun ne olursa olsun yöntemi kullanılarak oluşturulmalıdır. Numuneler kolayca mikroskobik analizi sırasında tespit edilebilir, böylece bu harita araştırmacı için rehber olarak görev yapacak. Bu protokolde kullanılan harita elle çizilmiş. Bu doku, her parça ve spot çizilmiş ve gerçek doku bloğu ve slayt aynı pozisyonda etiketli bir doku blok ve cam mikroskop lamı göstermektedir. </li><li> Düzgün grossing ve işlem aşamaları boyunca tespit kalır sağlanması, normal doku parçaları işleyin. % 70 etanol,% 80 etanol,% 95 etanol,% 100 etanol (x3 değişiklikleri), alifatik hidrokarbonlar (ksilen yerine) (x3 değişiklikleri) ve erimiş doku infiltrasyonu parafin at: Bu protokol için 1 saat her dokuları işlemek 60 ° C (x3 değişiklikleri). NOT:ll dokular, standart histoloji laboratuvar prosedürleri takip işleme tabi tutulmalıdır. Bu durum, bireysel laboratuvar prosedürü, doku boyutu ve türü değişken olabilir, ama bu bir oryantasyon aracı olarak nokta kullanma yeteneği etkilemez. </li><li> Doku oryantasyon şemasına göre doğru atanan yerlerde gömme istasyonu doku parçaları düzenlemek. Her blokta nOKTA ve doku parçaları düzenlemek için nasıl teknisyeni rehberlik için bir referans olarak doku oryantasyon şeması kullanın. NOT: şemasında çizildiği gibi gömme teknisyen aynı düzende gömme istasyonu doku parçaları gömme istasyonu yanında elle çizilmiş oryantasyon haritası koymak ve düzenlenmiş bu protokolde. Bu, tüm doku parçaları, nihai ürün içinde doğru bir şekilde tanımlanabilir kalmasını sağlar. Bu çoklu doku blokları başarıyla kullanımı için çok önemlidir. </li><li> Tüm doku parçaları blokta gömülü olarak daha nOKTA çekirdek uzun boylu olduğundan emin olun. </li><li> Standart gömme yöntemi kullanılarak doku oryantasyon şemasına göre uygun yerlerde daha sonra doku parçaları ve son (enine) spot gömün. Gerektiğinde parafin nOKTA (lar) (1-2 dk) üzerinden düşmeyecek yeterince katılaşmış kadar, forseps ile dik nokta (lar) tutun. </li><li> Standart metodoloji kullanılarak nokta ile Bölüm ve leke parafin kesitleri. <ol><li> Bölümler, bir pozitif yüklü cam slayt, 40 ° C&#39;de bir su banyosu üzerinde yüzen ve yapışmış izin verin (yüksüz slaytlar test edilmemiştir). En az 20 dakika süreyle 60 ° C&#39;de bir kurutma fırınında slaytlar kurutun. </li><li> Aşağıdaki reaktifler ile bir otomatik Stainer slaytlar yerleştirin ve işlenmiş: ksilenler (ksilenler 1-5 dakika, ksilenler 2 ve 3-2 dakika, her biri),% 100 etanol (2 dakika),% 95 etanol (1 dakika), 80 % etanol (30 sn),% 70 etanol (30 sn), çalışan musluk suyu (2 dk), hematoksilin (1.5 dakika), çalışan musluk suyu (3 dk), asit alkol (1 dakika), çalışan musluk suyu (2 dk ), bluing reaktif madde (1 dakika), akan su (2 dakika),% 80 etanol (30 sn), eozin (1 dakika), akan su (10 sn),% 80 etanol (1 dakika),% 100 etanol (3 değişikliği, 2 dk), ksilenler (3 değişiklik, 30 saniye) ekstrakte edildi. </li><li> Montaj orta monte cam lamelleri ile slaytlar örtün. NOT: Bu protokol, histotechnician 5 um bölümlerde bir mikrotom üzerinde parafın bloklar kesitli. Biz otomatik bir Boyayıcı kullanılan bu protokol için, ancak eşit sonuçlar manuel boyama ile elde edilebilir. </li></ol></li></ol> TMAlar 3. nOKTA (Manuel TMA Kit) <ol><li> 2.1 tarif ve spot istenen yer (ler) atamak gibi bir doku yönlendirme şeması oluşturun. </li><li> Bir gömme istasyonunda erimiş parafin ile TMA kalıp doldurun. Kalıp soğutma gibi, doku oryantasyon şemasında gösterilen istenen yerlerde TMA kalıp kenarlarında ucundaki nokta (lar) embed. Gerektiğinde, parafin ha kadar dik forseps ile nokta (lar) tutuns nOKTA (lar) (1-2 dk) üzerinden düşmeyecek yeterli katılaşmış. </li><li> Üreticinin talimatlarına ve dizi marjları (Şekil 2D) Spot (lar) ın konumu ile ilgili olarak TMA çekirdekleri toplayın ve standart kesit ve boyama protokolleri uygulayın. NOT: Bu protokolde kullanılan kesit ve boyama yöntemleri görmek için adım 2.6 bakınız. </li></ol>

<ol>
	<li>Jawhar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarray:+a+rapidly+evolving+diagnostic+and+research+tool.">Tissue microarray: a rapidly evolving diagnostic and research tool.</a> Ann. Saudi. Med. 29 (2), 123-127 (2009).</li><li>Dhir, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarrays:+an+overview.">Tissue microarrays: an overview.</a> Methods Mol. Bio. 441, 91-103 (2008).</li><li>Parsons, M., Grabsch, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+to+make+tissue+microarrays.">How to make tissue microarrays.</a> Diagn. Histopath. 15 (3), 142-150 (2009).</li><li>Saxena, R., Bade, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+7+Tissue+Microarray+–+Construction+and+Quality+Assurance.">Ch. 7 Tissue Microarray – Construction and Quality Assurance.</a> Immunohistochemical Staining Methods 6th ed. , (2013).</li><li>Nocito, A., Kononen, J., Kallioniemi, O., Sauter, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarrays+(TMAs)+for+high-throughput+molecular+pathology+research.">Tissue microarrays (TMAs) for high-throughput molecular pathology research.</a> Int. J. Cancer. 94, 1-5 (2001).</li><li>Rangel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tissue+microarray:+helpful+hints.">The tissue microarray: helpful hints.</a> J.Histotech. 25 (2), 93-100 (2002).</li><li>Hammer, A., Williams, B., Dietz, H., Hamilton-Dutoit, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+immunophenotyping+of+43+ferret+lymphomas+using+tissue+microarray+technology.">High-throughput immunophenotyping of 43 ferret lymphomas using tissue microarray technology.</a> Vet. Path. 44, 196-203 (2007).</li><li>Eckel-Passow, J., Lohse, C., Sheinin, Y., Crispen, P., Krco, C., Kwon, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarrays:+one+size+does+not+fit+all.">Tissue microarrays: one size does not fit all.</a> Diagn Pathol. 5, 48-57 (2010).</li><li>Lin, Y., Hatem, J., Wang, J., Quinn, A., Hicks, D., Tang, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+microarray-based+immunohistochemical+study+can+significantly+underestimate+the+expression+of+HER2+and+progesterone+receptor+in+ductal+carcinoma+in+situ+of+the+breast.">Tissue microarray-based immunohistochemical study can significantly underestimate the expression of HER2 and progesterone receptor in ductal carcinoma in situ of the breast.</a> Biotech. Histochem. 86 (5), 345-350 (2011).</li><li>Wampfler, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determining+the+optimal+numbers+of+cores+based+on+tissue+microarray+antibody+assessment+in+non-small+cell+lung+cancer.">Determining the optimal numbers of cores based on tissue microarray antibody assessment in non-small cell lung cancer.</a> J Cancer Sci. Ther. 3, 120-124 (2011).</li><li>Quagliata, L., Schlageter, M., Quintavalle, C., Tornillo, L., Terracciano, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+new+players+in+hepatocarcinogenesis:+Limits+and+opportunities+of+using+tissue+microarray+(TMA).">Identification of new players in hepatocarcinogenesis: Limits and opportunities of using tissue microarray (TMA).</a> Microarray. 3, 91-102 (2014).</li><li>Miettinen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+generating+multitissue+blocks+without+special+equipment.">A simple method for generating multitissue blocks without special equipment.</a> Immunohistochem. Mol. Morphol. 20 (4), 410-412 (2012).</li><li>Jones, M., Calabresdi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agar-gelatin+for+embedding+tissues+prior+to+paraffin+processing.">Agar-gelatin for embedding tissues prior to paraffin processing.</a> BioTechniques. 42, 569-570 (2007).</li><li>Carson, F., Hladik, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Histotechnology: A Self-Instructional Text. , (2009).</li><li>Suvarna, S., Layton, C., Bancroft, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Bancroft&#8217;s Theory and Practice of Histological Techniques. 7th ed. , (2013).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Noktalar Başarılı hazırlanması ve kullanımı birkaç teknik adımda dikkatli bağlılık gerektirir. Hidroksietil agaroz Erime yavaş ve düşük ısıda yapılmalıdır. Yüksek ısıda hızla Erime optimum sonuçlar daha az agaroz bazı arıza neden olabilir. Işlenmesi için parçalar halinde boya yüklü fişler keserken, her parçanın kalınlığı fazla 4.5 mm ve 7 mm&#39;yi aşmaz emin olun. bunlar kalınlığında üniform 5 mm gibi yuvarlatılmış uçları atık olarak kaldırılır. 5 mm&#39;den az ade...

Tek bir parafin blok içinde birden kişilerden doku örnekleri embed yeteneği, tedavi ve bireyler arasında kolay yan yana karşılaştırma sağlayan slaytlar arasındaki değişkenliği ortadan kaldırır ve kesit ve örneklerin boyanması maliyetini ve iş yükünü azaltır. Bu çok-doku blokları tipik olmayan bir dizi düzeninde birden bireylerden alınan doku içeren her iki doku mikrodizileri (TMA) ya da parafin bloklar olarak üretilir. Örnek kimlik Bakım herhangi bir çok doku analizi başarısı için kritik öneme sahiptir. Araştırmacılar, analiz verimliliğini artırmak slaytlar arasındaki farklılıkları azaltmak, değerli doku kaynaklarını korumak, zaman ve deneyler 1 maliyetini azaltmak için onların gelişimi beri TMAlar kullanarak olmuştur. TMAlar Doğru yönlendirme doku çekirdekleri 2-4 çekirdek gruplarının asimetrik düzenleme 3, 5 (örneğin, contro arasındaki boşluk, satır veya sütun olmak üzere, çeşitli yöntemler kullanılarak yapılabilirTedavi vs l) &quot;işaret&quot; çekirdek 6 ve TMA matrisin 3 dışında bulunan özel oryantasyon çekirdek. Bu yöntemler TMAlar için iyi çalışır rağmen, çoğu doku çekirdekleri zamanla tükenmiş gibi tanımlayıcıları kafa karıştırıcı hale gelebilir olarak boşluklar ve boşluk değerli TMA çekirdek alanı ve TMAlar tüketir. Onlar tanımlayıcı olarak tekdüze mikroarray çekirdek sıkıca sunumda anomaliler güveniyor çünkü Ayrıca, bu yöntemler bir dizi formatında olmadan çoklu doku bloklarında kullanılmak için uygun değildir. Çoğu olmayan dizilmiş çok doku blokları bu sapmaları yerlerinden olarak kılan yapısal dizi ızgara görüntülemek yok, tanımı gereği, düzgün olmayan dokuları uyum ve olmalıdır. Bir TMA, en büyük dezavantajlardan birini kullanarak pek çok avantajı olmasına rağmen, her zaman büyük ölçüde heterojen dokusu 1 temsilcisi değildir çekirdeklerin, küçük boyutudur. Sigara dizilmiş çok doku blokları t birçok sağlamako bir TMA faydaları, ancak daha büyük doku örnekleri, ya da hayvan çalışmalarından elde edilen tüm organları içerir. Tek çekirdeği kullanarak Doku mikrodizileri ilgi protein dayalı tüm doku bölümleri ile uyumu değişen ve birçok artan uyum 7-11 için birden fazla çekirdeği gerektirir. Nedeniyle karmaşıklığı ve bazı biyomarker fenotipleri heterojen doğası, TMAlar hala yetersiz olabilir çekirdek bile çok sayıda (&gt; 10) ile ve analiz 8 mikrodizilerinden farklı yöntemler gerektirebilir. Ayrıca, TMA inşaat teknik olarak zor bir zaman tüketen, ve doku arrayer başlangıç ​​maliyeti ve yatırımı veya erişimi gerektirir. Sigara dizilmiş çok doku blokları önemli ölçüde daha az zaman ve çaba ile herhangi bir temel laboratuvar yapılan ve diziler izin vermek veya maliyetlerini düşürmek ve analizi basitleştirmek için bir araç olarak daha fazla doku gerektiren çalışmalar için geçerli bir alternatif olabilir. Sigara dizilmiş çok doku blokları benzer güvenilir gerektiren veyaientation markör Örnek kimlik izlemek için, ancak, bu markerlerin gelişimi sınırlanmıştır. Doku yönünü anlatan literatürün çoğu bu tür mürekkep 12 ile doku dövme gibi bireysel doku parçaları, gömme için doğru fizyolojik yönü üzerinde duruluyor, işlemden önce 13 agar-jelatin içinde dokuların ön gömme ve çentik 14 veya dikiş 15 ile bazı dokuların işaretleme . Işlevsel olsa da, bu yöntemler nedeniyle sınırlamalara çoklu doku blokları belirteçleri olarak ideal değildir. Bir dikiş hızla aracılığıyla bölümlere edilecek ve her bölümde görünür olmayabilir. Işleme ve gömme sırasında doğru yönlenmede doku devam edebilir agar jelatin teknikler kullanılarak ön gömme ancak parafin bloğu ve slaytlar çoklu numuneler arasında ayırt etmek için bir görsel işaret temin etmez. Doku üzerindeki çentikler veya boya analizi komplike veya önemli morfolojik ayrıntıları occlude. Alternatif olarak, doku, kimlikolmayan bir dizilmiş çoklu doku bloğu bir asimetrik düzenlemesinin doku parçalarının yerleştirilmesi vasıtasıyla yapılmaktadır, ancak bu 3 ya da daha fazla doku parçaları gerektirir ve analiz için dokuların uygun düzenleme için yeterli olmayabilir edilebilir. Numune Oryantasyon Etiketi (Spot) açıkça çoklu doku bloklar halinde dokuları tespit etmek kolay ve ucuz bir yöntem olarak geliştirilen ve mevcut oryantasyon yöntemleri üzerinde birçok faydalar sunmaktadır. NOKTA Hidroksietil agaroz jeli işleme ve doku işaretleme boyası, oluşan ve parafin (Şekil 2C) ile infiltre küçük, renkli, çekirdeğidir. NOKTA çekirdeği çok doku parafin blok içinde tek bir dokuya sonraki ucunda gömülü ve blok ve her bölümde bir parlak renkli nokta olarak görünür - açıkça blok ve bölümlerin doğru yönünü gösteren (Şekil 1A D) Kolay doku tanımlama için.

<table><tbody><tr><td>Histogel Specimen Processing Gel</td><td>Thermo Scientific</td><td>HG-4000-012</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html&quot; target=&quot;_blank&quot;&gt;http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Tissue Marking Dye</td><td>Triangle Biomedical Sciences, Inc.</td><td>TMD-5</td><td>Any tissue marking dye would most likely be sufficient.</td></tr><tr><td>Arraymold Kit A 2 mm (60 core)</td><td>Arraymold</td><td>20015A</td><td>Any manual tissue arrayer would work similarly.</td></tr></tbody></table>

spot the correct tissue every time in multi-tissue blocks

Çok doku parafin blokları verimlilik artışı, deneysel bütünlüğü ve azaltılmış zaman ve maliyet ile yüksek verimlilik analizi sağlar. Doku mikrodizileri çoklu doku parafin bloklar çoğunluğunu oluşturan, ancak giderek, araştırmacılar planlama ve teçhizat önemli yatırım yapmadan doku mikrodizilerinin avantajları birçok sağlayabilir birden bireylerden daha dokuları içeren olmayan dizilmiş blok kullanıyor. Herhangi bir çok doku analizi önemli bir bileşeni, her bir doku tanımlamak için kullanılan yönlendirme yöntemidir. Yöntemler uygun oryantasyon ve çoklu doku blokları dokuların belirlenmesi korumak için mevcut olmasına rağmen, pek çok, bir dizi içindeki değerli alanı tüketebilir dizilmemiş bloklar için çok uygun değildir ve / veya standart histoloji laboratuarda üretilmesi zordur. Numune Oryantasyon Etiketi (Spot) açıkça parafin blok ve tüm doku kesitlerinde fo görünür basit, düşük maliyetli yönlendirme aracıdizilmiş olan ve olmayan dizilmiş düzenleri r güvenilir örnek tanımlama. Nokta o dokuya doğrudan bir değişiklik gerektirmez olmayan dizilmiş blokları için varolan yönlendirme yöntemlerine göre avantajlar sağlamaktadır, doku parçalarının düzenlemesinde esneklik sağlar.

NOKTA tüm parafin kesitlerde yuvarlak, parafin bloğunda parlak renkli nokta (Şekil 1A ve 2D) olarak görünür, ve H &amp; E veya İHK boyama işlemi ile cam slayt üzerinde kalır (Şekil 1B - 1D ve 2D). Bu bariz bir görsel işaret yardımları, hem her doku parçası belirlenmesinde histotechnician ve araştırmacı ve histotechnician olarak iletişim kolaylaştırır mikroskopta slayt veri toplama araştırmacı doku parçaların...

Watch this Scientific Journal Video about SpOT the Correct Tissue Every Time in Multi-tissue Blocks at JoVE.com

SpOT the Correct Tissue Every Time in Multi-tissue Blocks

Numune Oryantasyon Etiketi (Spot) amacı çoklu doku parafin bloklar bireysel doku tanımlanmasında yardımcı olmak için bir oryantasyon aracı olarak işlev etmektir. Bu protokoller, ortak, düşük maliyetli histolojisi malzemelerden kolayca inşa edilmiş ve parafin bloklar ve kesitlerde güvenilir bir görsel belirteç olarak hizmet eder gösterilmektedir.

Doğru DOKU Çok doku blokları her zaman nokta

Multi-tissue paraffin blocks provide high throughput analysis with increased efficiency, experimental uniformity, and reduced time and cost. Tissue ...

spot-the-correct-tissue-every-time-in-multi-tissue-blocks

Research

JoVE Journal

Biology

11.7K Görüntüleme.  Frederick National Laboratory for Cancer Research.  Numune Oryantasyon Etiketi (Spot) amacı çoklu doku parafin bloklar bireysel doku tanımlanmasında yardımcı olmak için bir oryantasyon aracı olarak işlev etmektir. Bu protokoller, ortak, düşük maliyetli histolojisi malzemelerden kolayca inşa edilmiş ve parafin bloklar ve kesitlerde güvenilir bir görsel belirteç olarak hizmet eder gösterilmektedir. 

Video: SpOT the Correct Tissue Every Time in Multi-tissue Blocks

Quantitative Multispectral Analysis Following Fluorescent Tissue Transplant for Visualization of Cell Origins, Types, and Interactions

With the desire to understand the contributions of multiple cellular elements to the development of a complex tissue; such as the numerous cell types that participate in regenerating tissue, tumor formation, or vasculogenesis, we devised a multi-colored cellular transplant model of tumor development in which cell populations originate from different fluorescently colored reporter gene mice and are transplanted, engrafted or injected in and around a developing tumor. These colored cells are then recruited and incorporated into the tumor stroma. In order to quantitatively assess bone marrow derived tumor stromal cells, we transplanted GFP expressing transgenic whole bone marrow into lethally irradiated RFP expressing mice as approved by IACUC. 0ovarian tumors that were orthotopically injected into the transplanted mice were excised 6-8 weeks post engraftment and analyzed for bone marrow marker of origin (GFP) as well as antibody markers to detect tumor associated stroma using multispectral imaging techniques. We then adapted a methodology we call MIMicc- Multispectral Interrogation of Multiplexed cellular compositions, using multispectral unmixing of fluoroprobes to quantitatively assess which labeled cell came from which starting populations (based on original reporter gene labels), and as our ability to unmix 4, 5, 6 or more spectra per slide increases, we&#39;ve added additional immunohistochemistry associated with cell lineages or differentiation to increase precision. Utilizing software to detect co-localized multiplexed-fluorescent signals, tumor stromal populations can be traced, enumerated and characterized based on marker staining.1

Complex tissue masses, from organs to tumors, are composed of various cellular elements. We elucidated the contribution of cellular phenotypes within a tissue utilizing multi-labeled fluorescent transgenic mice in combination with multiparameter immunofluorescent staining followed by spectral unmixing to decipher cell origin as well as cell characteristics based on protein expression.

Hücre Origins, Türleri ve Etkileşimler Görselleştirme için Floresan Doku Nakli ardından Kantitatif Çokspektrumlu Analizi

With the desire to understand the contributions of multiple cellular elements to the development of a complex tissue; such as the numerous cell types that ...

Tıp

Automated Dissection Protocol for Tumor Enrichment in Low Tumor Content Tissues

Tumor enrichment in low tumor content tissues, those below 20% tumor content depending on the method, is required to generate quality data reproducibly with many downstream assays such as next generation sequencing. Automated tissue dissection is a new methodology that automates and improves tumor enrichment in these common, low tumor content tissues by decreasing the user-dependent imprecision of traditional macro-dissection and time, cost, and expertise limitations of laser capture microdissection by using digital image annotation overlay onto unstained slides. Here, digital hematoxylin and eosin (H&#38;E) annotations are used to target small tumor areas using a blade that is 250 &#181;m2 in diameter in unstained formalin fixed paraffin embedded (FFPE) or fresh frozen sections up to 20 &#181;m in thickness for automated tumor enrichment prior to nucleic acid extraction and whole exome sequencing (WES). Automated dissection can harvest annotated regions in low tumor content tissues from single or multiple sections for nucleic acid extraction. It also allows for capture of extensive pre- and post-harvest collection metrics while improving accuracy, reproducibility, and increasing throughput with utilization of fewer slides. The described protocol enables digital annotation with automated dissection on animal and/or human FFPE or fresh frozen tissues with low tumor content and could also be used for any region of interest enrichment to boost adequacy for downstream sequencing applications in clinical or research workflows.

Digital annotation with automated tissue dissection provides an innovative approach to enriching tumor in low tumor content cases and is adaptable to both paraffin and frozen tissue types. The described workflow improves accuracy, reproducibility and throughput and could be applied to both research and clinical settings.

Düşük Tümör İçeriği Dokularında Tümör Zenginleştirme için Otomatik Diseksiyon Protokolü

Tumor enrichment in low tumor content tissues, those below 20% tumor content depending on the method, is required to generate quality data reproducibly ...

Kanser Araştırmaları

Manual Construction of a Tissue Microarray using the Tape Method and a Handheld Microarrayer

The tissue microarray (TMA) is an important research tool in which many formalin fixed paraffin embedded (FFPE) samples can be represented in a single paraffin block. This is achieved by using tissue cores extracted from the region of interest of different donor FFPE blocks and arranging them into a single TMA paraffin block. Once constructed, sections from the completed TMA can be used to perform immunohistochemistry, chromogenic, fluorescence in situ hybridization (FISH) and RNA ISH studies to assess protein expression as well as genomic and transcriptional alterations in many samples simultaneously, thus minimizing tissue usage and reducing reagent costs. There are several different TMA construction techniques. One of the most common construction methods is the recipient method, which works best with cores of the same length for which a minimum length of 4 mm is recommended. Unfortunately, tissue blocks can be heavily resected during the diagnostic process, frequently resulting in "non-ideal" donor block thicknesses of less than 4 mm. The current article and video focus on the double-sided adhesive tape method; an alternative manual, low cost, easy to use, and rapid method to construct low density (&lt;50 cores) TMAs that is highly compatible with these non-ideal donor blocks. This protocol provides a step-by-step guide on how to construct a TMA using this method, with a focus on the critical importance of pathological review and post construction validation.

This protocol outlines the tape method on how to manually construct a tissue microarray using FFPE donor blocks of differing depths.

Bant Yöntemi ve El Tipi Mikrodizileyici Kullanılarak Doku Mikrodizisinin Manuel Yapımı

The tissue microarray (TMA) is an important research tool in which many formalin fixed paraffin embedded (FFPE) samples can be represented in a single ...

Tümör Bağışıklık Manzarasının Haritalanması: Derinlemesine Bir Multipleks IHC Analiz Protokolü

Multiplex Immunohistochemical Analysis of the Spatial Immune Cell Landscape of the Tumor Microenvironment

The immune cell landscape of the tumor microenvironment potentially contains information for the discovery of prognostic and predictive biomarkers. Multiplex immunohistochemistry is a valuable tool to visualize and identify different types of immune cells in tumor tissues while retaining its spatial information. Here we provide detailed protocols to analyze lymphocyte, myeloid, and dendritic cell populations in tissue sections. Starting from cutting formalin-fixed paraffin-embedded sections, automatic multiplex staining procedures on an automated platform, scanning of the slides on a multispectral imaging microscope, to the analysis of images using an in-house-developed machine learning algorithm ImmuNet. These protocols can be applied to a variety of tumor specimens by simply switching tumor markers to analyze immune cells in different compartments of the sample (tumor versus invasive margin) and apply nearest-neighbor analysis. This analysis is not limited to tumor samples but can also be applied to other (non-)pathogenic tissues. Improvements to the equipment and workflow over the past few years have significantly shortened throughput times, which facilitates the future application of this procedure in the diagnostic setting.

Yazar Spotlight: Tümörlerin Bağışıklık Hücresi Manzarasına İlişkin İçgörülerin Kilidini Açmak

This protocol describes in detail how immune cell characterization of the tumor microenvironment using multiplex immunohistochemistry is carried out.

Tümör Mikroçevresinin Mekansal İmmün Hücre Manzarasının Multipleks İmmünohistokimyasal Analizi

The immune cell landscape of the tumor microenvironment potentially contains information for the discovery of prognostic and predictive biomarkers. ...

Akciğer Skuamöz Karsinomunda mIHC Kullanılarak Tümör Mikroçevresinin Deşifre Edilmesi

Multiplex Immunohistochemistry Staining for Paraffin-embedded Lung Cancer Tissue

Lung cancer is the leading cause of malignant tumor-related morbidity and mortality all over the world, and the complex tumor microenvironment has been considered the leading cause of death in lung cancer patients. The complexity of the tumor microenvironment requires effective methods to understand cell-to-cell relationships in tumor tissues. The multiplex immunohistochemistry (mIHC) technique has become a key tool for inferring the relationship between the expression of proteins upstream and downstream of signaling pathways in tumor tissues and developing clinical diagnoses and treatment plans. mIHC is a multi-label immunofluorescence staining method based on Tyramine Signal Amplification (TSA) technology, which can simultaneously detect multiple target molecules on the same tissue section sample to achieve different protein co-expression and co-localization analysis. In this experimental protocol, paraffin-embedded tissue sections of lung squamous carcinoma of clinical origin were subjected to multiplex immunohistochemical staining. By optimizing the experimental protocol, multiplex immunohistochemical staining of labeled target cells and proteins was achieved, solving the problem of autofluorescence and channel crosstalk in lung tissues. In addition, multiplex immunohistochemical staining is widely used in the experimental validation of tumor-related, high-throughput sequencing, including single-cell sequencing, proteomics, and tissue space sequencing, providing intuitive and visual pathology validation results.

Yazar Spotlight: Akciğer Karsinomu Örneğinde Çok Renkli Floresan Lokalizasyonunun Geliştirilmesi

This experimental protocol describes and optimizes a multiplex immunohistochemistry (IHC) staining method, mainly by optimizing single-channel antibody incubation conditions and adjusting the settings of antibodies and channels to solve the problems of autofluorescence and channel crosstalk in lung cancer tissues of clinical origin.

Parafine Gömülü Akciğer Kanseri Dokusu için Multipleks İmmünohistokimya Boyama

Lung cancer is the leading cause of malignant tumor-related morbidity and mortality all over the world, and the complex tumor microenvironment has been ...

Production of Tissue Microarrays, Immunohistochemistry Staining and Digitalization Within the Human Protein Atlas

The tissue microarray (TMA) technology provides the means for high-throughput analysis of multiple tissues and cells. The technique is used within the Human Protein Atlas project for global analysis of protein expression patterns in normal human tissues, cancer and cell lines. Here we present the assembly of 1 mm cores, retrieved from microscopically selected representative tissues, into a single recipient TMA block. The number and size of cores in a TMA block can be varied from approximately forty 2 mm cores to hundreds of 0.6 mm cores. The advantage of using TMA technology is that large amount of data can rapidly be obtained using a single immunostaining protocol to avoid experimental variability. Importantly, only limited amount of scarce tissue is needed, which allows for the analysis of large patient cohorts 1 2. Approximately 250 consecutive sections (4 &mu;m thick) can be cut from a TMA block and used for immunohistochemical staining to determine specific protein expression patterns for 250 different antibodies. In the Human Protein Atlas project, antibodies are generated towards all human proteins and used to acquire corresponding protein profiles in both normal human tissues from 144 individuals and cancer tissues from 216 different patients, representing the 20 most common forms of human cancer. Immunohistochemically stained TMA sections on glass slides are scanned to create high-resolution images from which pathologists can interpret and annotate the outcome of immunohistochemistry. Images together with corresponding pathology-based annotation data are made publically available for the research community through the Human Protein Atlas portal (<a href="http://www.proteinatlas.org" target="_blank">www.proteinatlas.org</a>) (Figure 1) 3 4. The Human Protein Atlas provides a map showing the distribution and relative abundance of proteins in the human body. The current version contains over 11 million images with protein expression data for 12.238 unique proteins, corresponding to more than 61% of all proteins encoded by the human genome.

Tissue microarrays allows for an efficient method to gain concurrent information from a multitude of tissues. Representative parts of tissues are assembled into a single paraffin block. Sections from the block are used for immunohistochemistry and analysis of protein expression patterns. Digital scanning generates corresponding images for distribution of data.

İnsan Protein Atlas içinde Doku Mikroarray&#39;ler, İmmünohistokimya Boyama ve Sayısallaştırma Üretimi

The  tissue microarray (TMA) technology provides the means for high-throughput  analysis of multiple tissues and cells. The technique is used within the ...

Doğru DOKU Çok doku blokları her zaman nokta

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Hücre Origins, Türleri ve Etkileşimler Görselleştirme için Floresan Doku Nakli ardından Kantitatif Çokspektrumlu Analizi

Düşük Tümör İçeriği Dokularında Tümör Zenginleştirme için Otomatik Diseksiyon Protokolü

Bant Yöntemi ve El Tipi Mikrodizileyici Kullanılarak Doku Mikrodizisinin Manuel Yapımı

Tümör Mikroçevresinin Mekansal İmmün Hücre Manzarasının Multipleks İmmünohistokimyasal Analizi

Tümör Mikroçevresinin Mekansal İmmün Hücre Manzarasının Multipleks İmmünohistokimyasal Analizi

Tümör Mikroçevresinin Mekansal İmmün Hücre Manzarasının Multipleks İmmünohistokimyasal Analizi

Parafine Gömülü Akciğer Kanseri Dokusu için Multipleks İmmünohistokimya Boyama

Parafine Gömülü Akciğer Kanseri Dokusu için Multipleks İmmünohistokimya Boyama

Parafine Gömülü Akciğer Kanseri Dokusu için Multipleks İmmünohistokimya Boyama

İnsan Protein Atlas içinde Doku Mikroarray'ler, İmmünohistokimya Boyama ve Sayısallaştırma Üretimi