תצפית מיקרוסקופית מולטיפוטון של כלי רקמת כבד עכבר

שיטה זו יכולה לעזור לנו לדמיין את התנועות של כלי הדם בתוך כבד העכבר לאורך האבולוציה של הדינמיקה של הכבד בממדים מרובים. בשיטה זו, אנו יכולים לדמיין את הדינמיקה של כלי הדם בתוך הכבד בשלושה ממדים. הדגמנו את השימוש בצבע כלי דם, אבל אתה יכול לבצע את כלי הכתמת עם החומר שלך עניין לפני הדמיה מיקרוסקופית.

לאחר אישור חוסר רפלקס תיקון בעכבר 6 שחור זכר C 57 בן שמונה שבועות מורדם. נגב את זנב העכבר עם 75% אלכוהול והשתמש במזרק מיקרוליטר אחד המצויד במחט 30 מד להזרקת 10 מיליגרם למיליליטר של רודמין B Isothiocyanate-Dextran שהוכן זה עתה ב-100 מיקרוליטרים של רודמין B Isothiocyanate-Dextran לתוך וריד הזנב caudal. כאשר כל הפתרון נמסר להשתמש ספוגית כותנה כדי להפעיל לחץ על אתר הנקב ולהשתמש גזה רטוב עם מים סטריליים כדי להשרות את פרוות הבטן.

השתמש סכין גילוח כדי לגלח את הבטן, ביצוע משיכות לכיוון הפרווה, ומניחים את העכבר על 37 מעלות צלזיוס, אלכוהול חיטוי כרית חימום. כדי לתקן את כבד העכבר עם מסגרת הדמיה של איברי גוף, יש להניח במקום ראשון יניקה נקייה בקוטר חמישה מילימטרים בתנוחה קבועה ולנגב את כרית החימום וגביע היניקה עם 75% אלכוהול. מחברים את היניקה לצינור משאבת הוואקום ומדליקים את המשאבה.

על שולחן מעוקר 75% אלכוהול להשתמש במספריים כירורגיים לחתוך שני סנטימטרים של העור מגבול עצם החזה התחתון של העכבר ולחשוף את הכבד. מניחים את העכבר ואת כרית החימום על בסיס המחזיק של מסגרת הגוף ולהתאים את מתקן הדמיית האיברים כך היניקה יכול להחזיק את הכבד. לאחר מכן השתמש בלחץ שלילי של 30 עד 35 קילופסקלים ליניקה, כך הכבד מתחבר לגביע.

כדי להגדיר את מיקרוסקופ סריקת לייזר מולטי פוטון להפעיל את מיקרוסקופ ובחר את המטרה 60 X. לתקן את המסגרת ואת העכבר מתחת למטרה ולהוסיף טיפה של מלוחים רגילים לתוך ה מכוס גדול מספיק כדי לכסות את העדשה. כוונן את המטרה כך שהעדשה פשוט תיגע במים הרגילים ותפעיל את תוכנת הלייזר.

הפעל את הלייזר ולחץ והחזק את לחצן ההפעלה והתריס למשך שלוש שניות. לאחר מכן הפעל את תוכנת ההפעלה מיקרוסקופ ולהגדיר את הלייזר ל 800 ננומטר. כדי להגדיר את פקד רכישת התמונה, לחץ על מתג הפלואורסצנט וכבה את אורות החדר והציוד.

פתח את תריס נתיב האור במיקרוסקופ וסובב את מסנן הפלואורסצנטי להילוך הרביעי. משוך את שני המנופים של המתג האופטי והסתכל דרך חתיכת העין, להשתמש כמובן ואת ספירלות מעין התמקדות בסדר כדי להתאים את אורך המוקד. לאחר מכן השתמש בצירי X Y כדי להתאים את שדה התצוגה כדי לאתר את אזור היעד.

להדמיה, כבה את מתג הפלואורסצנט בתוכנה והעבר את מסנן הפלורסנט להילוך השני. דחוף את שני המנופים של המתג האופטי ולחץ על המוקד פעמיים כדי להציג בתצוגה מקדימה את אזור היעד כדי להתאים את הגדרות הרכישה ואת הפרמטרים של בקרת רכישת התמונה וללחוץ על Control plus C כדי להתאים את הרווח וההיסט במתח גבוה. לחץ על עצור כדי לעצור את התצוגה המקדימה, לחץ על לחצן X Y כדי לסרוק בשני ממדים ולחץ על שמור.

בחרו אזור ולחצו על 'עומק' ו'תצוגה מקדימה' כדי לבחור את ערכות הסיום וההתחלה בהגדרות המיקרוסקופ. סרוק תמונות תלת-ממד ושמור. לאחר הסריקה, בחר זמן לחיצה על אזור והתאם את הגדרות הרכישה האחרות ואת הפרמטרים המבוקרים של רכישת תמונה.

לאחר מכן סרוק את הפרוסות השונות ושמור כדי להשיג את סרט התמונה שנוצר. כאן הדמיה של התפלגות של כלי הדם בתוך הכבד באמצעות מיקרוסקופיה פוטון רב כפי שהוכח, ניתן לראות. כלי דם זה מחולק לריבוי ענפים הנובעים מתא מטען ומופצים לחלל שמסביב.

ההיקף החיצוני של כלי הדם ניתן לראות באדום בעוד החלל הפנימי הוא כהה, כפי שנצפה בסרטון חפצים שאינם אדומים נעים בתוך כלי הדם יכול להיות תאים. החושך של הרקמה שנצפה בסרטון זה סביר להניח בשל הכבד לא תוקן היטב לאורך זמן. חשוב לזכור כי איך כבד ללא צלקת קבוע, משפיע על היציבות של התמונה.

מתודולוגיה זו יכולה להיות מיושמת גם על המיקום של מבנים אחרים בתוך הכבד לתצפית ישירה של ההתפלגות או שינויים במבני עבודה ספציפיים של עניין.