Этот метод может помочь нам визуализировать движения кровеносных сосудов в печени мыши вдоль эволюции динамики печени в нескольких измерениях. Используя этот метод, мы можем визуализировать динамику кровеносных сосудов в печени в трех измерениях. Мы продемонстрировали использование сосудистого красителя, но вы можете выполнить окрашивание сосуда с веществом, представляющим интерес до микроскопической визуализации.
После подтверждения отсутствия правого рефлекса в анестезировал восемь недель старый мужчина C 57 черный шесть мыши. Протрите хвост мыши с 75% алкоголя и использовать один микролитр шприц оснащен 30 калибровочных иглы для введения 10 миллиграммов на миллилитр свежеприготовленного родамина B Изотиоцианат-Декстран в 100 микролитров родамина B Изотиоцианат-Декстран в хвостовой вены хвоста. Когда все решение было доставлено использовать ватный тампон, чтобы оказать давление на место прокола и использовать марлю мокрой со стерильной водой, чтобы впитать брюшной мех.
Используйте бритву, чтобы побрить живот, делая удары в направлении меха, и поместите мышь на 37 градусов по Цельсию, алкоголь дезинфицировали грелку. Чтобы исправить мышь печени с телом органа изображения кадра, Первое место чистой пятимиллиметровой диаметр всасывающей чашки в фиксированном положении и протрите грелку и всасывающей чашки с 75%алкоголя. Подключите присоску к шлангу вакуумного насоса и включите насос.
На 75%-алкогольной стерилизованной таблице используйте хирургические ножницы, чтобы вырезать два сантиметра кожи от нижней кормовой границы мыши и разоблачить печень. Поместите мышь и грелку на основание держателя рамы тела и отрегулируйте прибор для визуализации органов так, чтобы присоска можно было удерживать печень. Затем используйте отрицательное давление от 30 до 35 килопаскаль для всасывания так, что печень прикрепляется к чашке.
Для настройки Мультифотонного лазерного сканирующего микроскопа включите микроскоп и выберите цель 60 X. Зафиксим рамку и мышь под объективом и добавьте каплю нормального солевого раствора в чашку достаточно большую, чтобы покрыть объектив. Отрегулируйте цель так объектив просто касается нормального солевого раствора и включите лазерное программное обеспечение.
Включите лазер и нажмите и удерживайте кнопку питания и затвор в течение трех секунд. Затем запустите программное обеспечение для работы микроскопа и установите лазер на 800 нанометров. Чтобы установить контроль за получением изображения, нажмите на флуоресцентный переключатель и выключите свет комнаты и оборудования.
Откройте затвор световой дорожки на микроскопе и поверните фильтр флуоресценции на четвертую передачу. Потяните два рычага оптического переключателя и, глядя через глаз кусок, использовать курс и тонкой фокусировки квази спирали для регулировки фокусного длины. Затем используйте оси X Y для регулировки поля зрения, чтобы найти целевую область.
Для визуализации выключите флуоресцентный переключатель в программном обеспечении и переключитесь на флуоресцентный фильтр на вторую передачу. Нажмите два рычага оптического переключателя и нажмите фокус раз два, чтобы просмотреть целевую область настроить настройки приобретения и параметры управления приобретением изображения и управления прессом плюс C, чтобы настроить высоковольтное увеличение и смещение. Нажмите стоп, чтобы остановить предварительный просмотр, нажмите кнопку X Y, чтобы сканировать в двух измерениях и нажмите сохранить.
Выберите область и нажмите глубину и предварительный просмотр, чтобы выбрать конец и начать наборы в настройках микроскопа. Сканирование 3D-изображений и сохранение. После сканирования выберите время клика по региону и отрегулируйте другие параметры приобретения и параметры, контролируемые приобретением изображений.
Затем просканировать различные ломтики и сохранить, чтобы получить полученный фильм изображения. Здесь можно наблюдать визуализацию распределения кровеносных сосудов в печени с помощью мультикотонной микроскопии, как попродемонстрировано. Этот кровеносный сосуд делится на множество ветвей, исходящих из ствола и распределенных в окружающее пространство.
Внешняя окружность кровеносных сосудов может наблюдаться красным цветом, в то время как внутренняя полость темная, как это наблюдается на видео, не красные объекты, движущиеся в сосудах, могут быть клетками. Темнота ткани наблюдается в этом видео, вероятно, из-за печени не были исправлены хорошо с течением времени. Важно помнить, что, как без шрамов печени фиксируется, влияет на стабильность изображения.
Эта методология также может быть применена к позиции других структур в печени для прямого наблюдения за распределением или изменения в конкретных трудовых структур, представляющих интерес.
