老鼠肝脏组织血管多光子微观观测

这种方法可以帮助我们想象小鼠肝脏内血管的运动，以及肝脏多维动态的演变。使用这种方法，我们可以从三个维度来可视化肝脏内血管的动态。我们已经证明了使用血管染料，但你可以执行容器染色与你感兴趣的物质之前，微观可视化。

在确认麻醉的八周大男性 C 57 黑六只老鼠缺乏正确的反射后。用75%的酒精擦拭老鼠的尾巴，使用装有30根量度针的微升注射器，将每毫升新鲜制备的罗达明B异氰酸酯-德克斯特兰注射到100微升的罗达明B异氰酸酯-德克斯特兰中，注入牛皮尾静脉。当所有溶液都送达后，使用棉签对穿刺部位施加压力，并用无菌水将纱布湿润，浸泡腹部毛皮。

用剃须刀剃腹部，朝毛皮方向冲压，将鼠标放在37摄氏度的酒精消毒加热垫上。要用身体器官成像框架固定小鼠肝脏，首先在固定位置放置一个直径为五毫米的清洁吸盘，用75%的酒精擦拭加热垫和吸盘。将吸盘连接到真空泵软管，然后打开泵。

在75%的酒精消毒表上，使用手术剪刀从小鼠的下胸围切下两厘米的皮肤，并露出肝脏。将鼠标和加热垫放在身体框架的支架底座上，并调整器官成像夹具，使吸盘能够容纳肝脏。然后使用30至35千帕的负压进行吸气，使肝脏附着在杯子上。

设置多光子激光扫描显微镜打开显微镜并选择 60 X 目标。修复目标下方的框架和鼠标，并在杯子中加入一滴普通盐水，以覆盖镜头。调整目标，使镜头只接触正常的盐水，打开激光软件。

打开激光并按下电源按钮并按住快门三秒钟。然后启动显微镜操作软件，将激光设置为 800 纳米。要设置图像采集控制，请单击荧光开关并关闭房间和设备灯。

打开显微镜上的光路径快门，将荧光滤镜旋转到第四档。拉光学开关的两个杠杆，透过眼片看，使用路线和精细对焦准螺旋来调整焦距。然后使用 X Y 轴调整视场以定位目标区域。

对于成像，关闭软件中的荧光开关，并将荧光滤镜切换到第二档。推动光学开关的两个杠杆，点击对焦时间二，预览目标区域调整采集设置和图像采集控制参数，并按控加C调整高压增益和偏移。单击"停止"停止预览，单击 X Y 按钮以两个维度进行扫描，然后单击"保存"。

选择区域并单击深度并预览以选择显微镜设置中的结束和启动集。扫描 3D 图像并保存。扫描后，选择区域单击时间并调整其他采集设置和图像采集控制参数。

然后扫描不同的切片并保存以获取生成的图像电影。这里使用多光纳米显微镜可视化肝脏内血管的分布，如所示，可以观察到。这种血管被分成多个分支，从树干中流出，并分布到周围的空间。

血管的外周可以以红色观察，而内腔是暗的，正如视频中观察到的，在血管内移动的非红色物体可能是细胞。在这段视频中观察到的组织的黑暗可能是由于肝脏没有随着时间的推移被很好地修复。重要的是要记住，如何无疤痕肝脏是固定的，影响图像的稳定性。

这种方法也可应用于肝脏内其他结构的位置，以便直接观察特定利益劳动结构的分布或变化。