Spodoptera litura에서 Testes Fusion의 미세 외과 적 폐색

요약

알루미늄 호일은 고환의 융합을 방해하기 위해 Spodoptera litura 의 고환 사이에 미세 외과 적으로 삽입되었습니다. 절차에는 동결, 고정, 소독, 절개, 장벽 배치, 봉합, 수술 후 수유 및 검사가 포함됩니다. 이러한 접근법은 조직 형성을 방해하는 방법을 제공한다.

초록

RNA 간섭 (RNAi)과 같은 유전 적 방법을 사용하고 정기적으로 간격이 짧은 구두체 반복 (CRISPR) / CRISPR 관련 엔도뉴클레아제 Cas9와 같은 유전 적 방법을 사용하는 대신, 물리적 장벽이 Spodoptera litura 의 고환 사이에 미세 외과 적으로 삽입되어이 미세 수술이 성장과 번식에 미치는 영향을 연구했습니다. 고환 사이에 알루미늄 호일을 삽입 한 후, 변태 중 곤충 털갈이가 정상적으로 진행되었습니다. 곤충의 성장과 발달은 현저하게 변화되지 않았다. 그러나 고환 융합이 미세 수술에 의해 중단되면 정자 다발의 수가 변경되었습니다. 이러한 발견은 고환 융합을 차단하는 것이 남성 생식 능력에 영향을 줄 수 있음을 의미합니다. 이 방법은 특정 신호 전달 경로의 기능을 연구하기 위해 기관 간의 통신을 중단하는 데 더 적용될 수 있습니다. 기존의 수술에 비해, 미세수술은 동결마취만을 필요로 하며, 이는 이산화탄소 마취보다 바람직하다. 미세 수술은 또한 수술 부위 영역을 최소화하고 상처 치유를 용이하게합니다. 그러나 특정 기능을 가진 재료를 선택하려면 추가 조사가 필요합니다. 수술 중 절개를 할 때 조직 손상을 피하는 것이 중요합니다.

서문

융합은 조직 또는 장기 발달에서 흔히 발생하는 현상입니다. 그 예로는 Drosophila1에서의 등쪽 폐쇄 및 흉부 폐쇄 및 구개골 형태형성, 신경관 형태형성, 및 마우스 및 닭에서의 심장 형태형성²이 포함된다. CRISPR 및 RNAi는 융합 과정에서 유전자의 역할을 조사하기 위해 적용되었습니다^2,3,4.

Spodoptera litura (S. litura, Lepidoptera : Noctuidae)는 중국을 포함한 아시아의 열대 및 아열대 지역에 널리 분포하는 해로운 다식성 해충입니다^4,5,6. S. litura의 광범위한 분포는 부분적으로 생식선 발달과 관련된 강력한 생식 능력에 기인합니다. 남성 불임은이 해충을 방제하는 한 가지 접근법입니다. 고환 구조의 개략적인 그림에서....

프로토콜

1. 곤충 사육 및 유지 보수

1. Spodoptera litura 유충을 ^6th instar (L6D4)의 4 일째에 도달 할 때까지 인공 식단으로 환경 시뮬레이션 챔버에서 배양하십시오. 벌레가 여덟 번째 복부의 역 삼각형 모양의 구조를 기반으로 6 ^번째 instar (L6D0)의 첫날에 들어갈 때 수컷 유충을 선택하십시오¹⁴.
   참고 : 유충 사육 및 유지 보수 기술은 이전에 출판되었습니다^4,14.

2. 수술 전 준비

1. 알루미늄 호일을 둥근 모서리가 있는 직사각형 조각으로 다듬습니다(1mm x 2mm, 그림 2).
2. 수술 플랫폼 및 관련 항목 (테이블 표면, 현미경, 아이스 박스, 곤충 상자, 왁스 트레이, 핀 및 실)을 표면에 75 % 알코올을 뿌리고 닦아서 멸균하십시오.
3. 수술 도구 (알루미늄 호일 포함)를 고압 증기 멸균기로 30 분 동안 멸균하고 120 °C의 가열 및 건조 오븐에 놓습니다.
<....

결과

Spodoptera litura 성장 및 발달에 대한 미세 수술의 효과
미세 수술은 등쪽 유충 표피에 2mm 길이의 상처를 남겼고 결국 용혈림프가 새는 것을 멈추고 치유되었습니다. 유충은 준비 및 번데기 단계를 거쳐 폐쇄 된 것으로, 미세 수술이 성장과 발달에 큰 영향을 미치지 않았 음을 나타냅니다. 유충이 번데기로 털갈이했을 때, 봉합사 실은 표피와 함께 버려?.......

토론

Spodoptera litura에서 미세 외과 적으로 고환 융합을 방해 한 후, 정자 다발의 수가 감소하여이 융합이 생식 능력에 도움이된다는 가설을지지했습니다. 외과 적 조작은 20 ^세기 초부터 곤충의 생리 학적 발달을 연구하는 데 사용되어 왔습니다. 두개골 신경이 곤충 변형에 의해 조절되는지 여부를 결정하기 위해 일부 연구자들은 다른 곤충 (Hemiptera의 Rhodnius prolixus, Lepidoptera의 Lym.......

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
75% Rubbing alcohol	Qingdao Hainuo Nuowei Disinfection Technology Co., Ltd	Q/370285HNW 001-2019
Colored Push Pins	Deli Group Co.,LTD	0042
Corneal Scissors	Suzhou Xiehe Medical Device Co., Ltd	MR-S221A	Curved and blunt tip
Glad Aluminum Foil	Clorox China(Guangzhou) Limited	831457	10 cm*2.5 cm*0.6
Medical Cotton Swabs (Sterile)	Winner Medical Co., Ltd.	601-022921-01
Medical Iodine Cotton Swab	Winner Medical Co., Ltd.	608-000247
Needle holder	Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.	J32030	14 cm fine needle
Sterile surgical blade	Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., LTD	#11
Suigical Blade Holder	Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., LTD	K6-10	Straight 3#
Suture thread with needle	Ningbo Medical Stitch Needle Co., Ltd		needle: 3/8 Circle, 2.5*8 ; Thread: Nylon, 6/0, 25 cm
Tying Forceps	Suzhou Xiehe Medical Device Co., Ltd	MR-F201T-3	Straight-pointed; long handle; 0.12 mm-wide-head