쥐 Adrenocortical 셀 및 Steroidogenic 기능의 분석 실험의 기본 문화

제시된 프로토콜은 아주 쉽고 연구원이 1차 부신 문화를 준비하는 것을 도울 것입니다. 그것은 부 신 스테로이드 발생을 시작 하기 위한 쉬운 절차를 제공 합니다. 이 기술은 스트레스 관련 질병, 에이전트 억제 염증 반응의 모든 잠재력을 선별에 적용될 수 있다.

절차를 시연하는 것은 내 실험실에서 석사 학생인 웨이창 이병창이 될 것입니다. 먼저 70%에탄올을 사용하여 안락사 된 SD 쥐를 살균하고 피부에 흡수시키는 것으로 시작합니다. 티슈 페이퍼로 피부를 닦은 후, 쥐를 수핀 위치에 깨끗한 플라스틱 접시에 놓습니다.

다음으로, 외부 곡선 포셉을 사용하여 중간선에서 피부를 들어 올립니다. 가위를 사용하여 허벅지 수준에서 서브코스트 각도까지 Y 모양을 만들어 피부의 무딘 해부를 수행합니다. 70%에탄올로 가위를 헹구고 근육을 자르고 Y 모양을 만듭니다.

간 오른쪽에서 위장 뒤에 왼쪽 부신을 찾습니다. 표준 집게 와 곡선 집게 한 켤레로 위와 간을 들어 올린 다음 부신을 다른 곡선 집게로 분리하고 멸균 접시에 넣습니다. 미세한 집게를 사용하여 각 선에서 부신 캡슐을 조심스럽게 이동시보도록 합니다.

이제 섬세한 가위를 사용하여 부신을 충분한 양의 혈청 없는 DMEM F-12 배지로 작은 조각으로 잘라 조직을 덮습니다. 버너 위에 가열하여 세 가지 다른 붓는 크기의 저스티스 파이펫을 준비합니다. 콜라게나세 II.Gently 피펫과 함께 배지를 함유한 50mL 원전 튜브로 모든 부신 조각을 10회 위아래로 옮기는 가장 큰 개구부가 있는 첫 번째 파이펫을 사용하십시오.

그런 다음 20 분 동안 섭씨 37도에서 수조에서 튜브를 배양하고 5 분마다 총 4 번 흔들어줍니다. 효소 소화 중 조직 분산을 제대로 수행하는 것이 매우 중요합니다. 두 번째 및 가장 작은 붓는 크기의 파이펫을 사용하여 모든 조직 조각이 작아질 때까지 파이펫팅과 인큐베이션을 반복합니다.

그런 다음 4섭씨 차가운 매체에 6배의 브레시를 추가하여 효소 반응을 멈춥시다. 그런 다음 10 분 동안 800 회 G에서 센트라푸징을 하고 두 번 상퍼를 폐기하십시오. 적절한 양의 매체를 추가하고 셀을 다시 일시 중단합니다.

원하는 접시 또는 요리에 세포를 심고 중간 하룻밤 에서 성장 중간 37 섭씨 에서 섭다 95%와 5% 이산화탄소. 다음 날, 세럼이 없고 따뜻한 DMEM F-12 배지로 셀을 두 번 조심스럽게 씻으시다. 신선한 성장 매체를 추가하고 3 일까지 섭씨 37도, 습도 95 %, 이산화탄소 5 %로 세포를 유지합니다.

이 프로토콜을 사용하여, 1차 배양 쥐 부신 세포가 얻어졌다. 3일부신세포는 상대비 현미경으로 확인되었다. 3일째에 수행된 지방 분화 관련 단백질의 면역형염색은 세포질 내의 소포가 지질 방울임을 확인했습니다.

쥐 부신 세포의 아드레날린 호르몬 자극 후, 세포의 호르몬 생산 능력은 코르티코스테론 분석에 의해 결정되었다, 더 높은 ACTH 농도와 증가 코르티코스테론 방출을 보여주는. 이 방법은 1 차적인 심장 배양, 부신 수질 배양, 등 세테라와 같은 그밖 1 차적인 배양 시스템에 적용될 수 있습니다. 이 기술은 또한 부뇌관세포와 크로마핀 세포 사이의 상호 작용을 조사하는 데 도움이 될 수 있다.