이 프로토콜은 생물학적 문제를 파악하는 데 도움이되는 물리적 방법을 채택 할 수 있음을 시사합니다. 이 기술은 최소한의 절개로 곤충에 물질을 배치하고 미세 수술이 개인의 발달에 미치는 영향을 연구하는 방법을 제공합니다. 이 방법은 다른 Lepidoptera 유충과 머리와 흉부를 포함한 곤충의 다른 부분에 적용 할 수 있습니다.
특정 재료에 절개를 만들고 능숙하게 봉합하는 연습을하는 것이 매우 중요합니다. Spodoptera litura 수컷 유충을 6 번째 instar 또는 L6D4의 4 일째에 얼음 위에 10 ~ 30 분 동안 올려 놓고 수술 중에 마취 상태로 유지하십시오. 마취 된 유충을 등쪽 쪽을 위로 향하게하여 왁스 트레이에 놓습니다.
유충의 머리와 꼬리를 핀과 실로 고정시키고 표피에 면봉으로 3 % 요오드 팅크를 바르고 70 % 알코올을 사용하여 수술 부위를 소독하십시오. 9 번째 신체 부위의 등쪽 표피를 2 밀리미터 길이로 절개하고 멸균 된 면봉을 사용하여 누출 된 용혈림프와 지방체를 제거하여 수술 부위를 명확하게 볼 수 있습니다. 외과 용 핀셋을 사용하여 고환 사이에 알루미늄 호일 조각을 삽입 한 다음 실행 봉합사로 표피를 닫습니다.
바늘 홀더와 수술 핀셋의 도움으로 외과 사각형 매듭을 묶으십시오. 가위로 루프 꼬리에서 과도한 봉합사를 자르고 2 밀리미터 실을 남겨 둡니다. 봉합 후, 유충을 사육 상자에 부드럽게 놓고 지속적인 관찰을 통해 깨끗한 환경 시뮬레이션 챔버에 유지하십시오.
미세 수술 후 Spodoptera litura 수컷 유충의 성장 및 발달을 모니터링하였다. 유충 사망률은 수술 그룹에서 약간 높았던 반면, 번데기, 성인 출현 및 성공적인 짝짓기의 비율은 대조군보다 수술 그룹에서 약간 낮았다. 실험군에서, 유피렌 및 아피렌 정자 다발의 총 정자 다발의 수는 대조군 및 가짜 대조군보다 현저히 낮았다.
반면에, 유피렌 정자 다발의 비율은 세 그룹 모두에서 유의한 차이가 없었다. 유충의 일방적 고환을 제거한 후, 미세 수술군의 총 정자 다발과 유피렌 및 아피렌 정자 다발의 수는 대조군보다 현저히 낮았다. 번데기 단계의 여섯째 날에 유피렌 정자 다발의 비율은 세 그룹 모두에서 비교되었습니다.
상처의 위치를 알아 차리고 절개 중에 다른 장기를 손상시키지 않는 것이 매우 중요합니다. 이 기술은 장기에 약물을 적용하여 고환 융합의 생물학적 중요성을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 표적 장기에 대한 약물의 효과를 탐구 할 수 있습니다.
