Omvänd genetik för att konstruera RNA-virusvarianter med positiv känsla

1.1K Views

•

15:49 min

•

June 9th, 2022

DOI :

10.3791/63685-v

June 9th, 2022

•

1,072 Views

Shalini Soni¹, Shubhra Agarwal¹, Rakesh Aggarwal², Naga Suresh Veerapu¹

¹Virology Section, Department of Life Sciences, Shiv Nadar University, ²Gastroenterology, Sanjay Gandhi Postgraduate Institute of Medical Sciences

Chapters

0:04

Introduction

1:01

Genome‐Wide Substitution Mutagenesis of JFH1 Using Error‐Prone PCR

2:46

Estimation of the Proportion of Mutations in ep‐PCR Products (Mutant Libraries)

6:08

Viral RNA Transfection of the Huh7.5 Cell Line

7:57

Quantification of Virus Titers

11:59

Drug‐Resistant Viral Variant Selection

13:33

Results: Integration of ep‐PCR and Virus Reverse Genetics to Generate HCV Mutants

15:17

Conclusion

Transcript

Protokollet som beskrivs här möjliggör generering av slumpmässigt mutagenserade RNA-bibliotek i full längd av enkelsträngade positiva RNA-virusgenom upp till 10 kilobyte långa, och urval av fenotyper av intresse under önskade experimentella förhål

Summary

Protokollet beskriver en metod för att introducera kontrollerbar genetisk mångfald i hepatit C-virusets genom att kombinera fullängdsmutant RNA-syntes med hjälp av felbenägen PCR och omvänd genetik. Metoden ger en modell för fenotypselektion och kan användas för 10 kb långa RNA-virusgenom.

Explore More Videos

Omv nd genetik

RNA virus med positiv k nsla

fenotyper av intresse

full ngdsmutant RNA syntes FL MRS

bibliotek

genetisk m ngfald